微生物监测环境学时

微生物监测环境学时第一页，共三十二页，2022年，8月28日第十章微生物监测环境

（2学时）一、环境污染的指示微生物二、污染物毒性的微生物检测第二页，共三十二页，2022年，8月28日一、环境污染的指示微生物（一）一般污染指示微生物（二）粪便污染指示菌（三）其他指示微生物第三页，共三十二页，2022年，8月28日（一）一般污染指示微生物环境中一般性的污染物：化学性污染，如糖类、含氮有机物、脂肪、有机酸等天然有机物以及无机磷、钾、硫等无机物；生物性污染，细菌、真菌、病毒等指示微生物（指示菌）：是指在环境监测中，用以指示环境样品污染性质与程度，并评价环境卫生状况的具有代表性的微生物第四页，共三十二页，2022年，8月28日1、细菌总数细菌总数（totalbacteriacount）：是指环境中被测样品，在一定条件下培养后所得到的1ml或1g样品中的细菌菌落总数计算单位：cfu/ml或cfu/g；cfu（colonyformingunit）是指菌落形成单位第五页，共三十二页，2022年，8月28日部分卫生标准清洁程度细菌总数cfu/m3饮用水100罐装矿泉水<50游泳池水≤1000图书馆、普通餐馆≤2500影剧院、音乐厅≤4000候车室、候船室≤7000第六页，共三十二页，2022年，8月28日项目多污带甲型中污带乙型中污带寡污带细菌数(cfu/ml)105至106

105

104

少于104

有机物含大量有机物；主要是蛋白质和碳水化合物有机物含量少；主要是氨和氨基酸有机物含量很少有机物含量极微溶解氧极低或几乎没有，厌氧性少量，半厌氧性较多，需氧性很多，需氧性BOD非常高较高较低很低第七页，共三十二页，2022年，8月28日（1）液体、固体样品的细菌总数测定倾注平板培养法：将待测样品梯度稀释后，取一定量菌悬液，与融化好的营养肉汤培养基（50℃左右）混匀，马上倒平板，凝固后37℃培养48h，计算形成的菌落数目平板涂布培养法：将待测样品梯度稀释后，取一定量菌悬液，均匀涂布于琼脂平板表面，风干后37℃培养48h，计算形成的菌落数目第八页，共三十二页，2022年，8月28日第九页，共三十二页，2022年，8月28日（2）空气样品的细菌总数测定平板暴露沉降法：采用9cm平皿，将营养琼脂平板在1.2m高处暴露5min，37℃培养48h，计算生长的菌落数仪器法：固体撞击式采样器的抽气装置以恒定气流量，使含有微生物粒子的空气通过狭小的喷嘴，与营养琼脂平板相撞并吸附其上，37℃培养48h，计算生长的菌落数第十页，共三十二页，2022年，8月28日第十一页，共三十二页，2022年，8月28日2、霉菌与酵母菌总数霉菌与酵母菌总数（fungiandyeastcount）：是指环境中被测样品经过处理，在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含的霉菌和酵母菌菌落数计算单位：cfu/ml或cfu/g检测方法：倾注平板培养法，多采用孟加拉红培养基、高渗察氏培养基或含抗生素的马铃薯葡萄糖培养基；25~28℃培养3~5d后计算生长的菌落数第十二页，共三十二页，2022年，8月28日一、环境污染的指示微生物（一）一般污染指示微生物（二）粪便污染指示菌（三）其他指示微生物第十三页，共三十二页，2022年，8月28日（二）粪便污染指示菌粪便污染指示菌：环境中的肠道病原菌主要来自人畜粪便，但其存在数量少，检测比较复杂；故选用粪便中的其他微生物为代表，以间接指示肠道病原菌的存在第十四页，共三十二页，2022年，8月28日粪便污染指示菌的理想条件大量存在于人的粪便中，且数量比病原菌多受粪便污染的水中易检测出该指示菌，未受污染的水中无此菌在水体中不会自行繁殖存活时间略长于致病菌，对消毒剂的抵抗略强于致病菌第十五页，共三十二页，2022年，8月28日微生物名称cfu/g粪便拟杆菌109-1010乳酸杆菌108-109大肠埃希氏菌107-108粪链球菌107-108柠檬酸杆菌105-106梭菌105-106葡萄球菌105-106克雷伯氏菌104-105肠杆菌104-105芽孢杆菌属104-105变形菌102-103铜绿假单胞菌102-103第十六页，共三十二页，2022年，8月28日1、大肠菌群大肠菌群（coliformgroup）：又称总大肠菌群；它们一群能在37ºC，24h内发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧性的G-无芽孢杆菌；在伊红美兰培养基生成紫红色、不带或带有金属光泽的菌落种类：埃希氏菌、柠檬酸杆菌、肠杆菌和克雷伯氏菌指标：大肠菌群数，个/ml或个/g；大肠菌群值，1000ml/大肠菌群数或1kg/大肠菌群数第十七页，共三十二页，2022年，8月28日（1）最大可能数法初发酵：将不同稀释度的检样，接种于乳糖培养液中，经37ºC培养24h，观察产酸产气情况以初步判断是否有大肠菌群存在平皿分离：将初发酵管的菌液接种于伊红美兰培养基上，37ºC培养24h，观察菌落形态；挑取疑似菌落涂片，革兰氏染色、镜检复发酵：将上述疑似菌落再次转接入乳糖培养液中，经37ºC培养24h，产酸产气者最后确证为大肠菌群统计结果：根据肯定有大肠菌群存在的初发酵管的数目及不同稀释度的检样，查阅专用统计表得出每毫升检样中大肠菌群的最可能数目第十八页，共三十二页，2022年，8月28日第十九页，共三十二页，2022年，8月28日MPN三管法测数统计表第二十页，共三十二页，2022年，8月28日（2）滤膜法水样过滤：选用孔径为0.45m的滤膜过滤检样，细菌截留在无菌滤膜上培养：将滤膜有菌面朝上贴于伊红美兰培养基平板上，37ºC培养16~18h结果观察：挑选疑似菌落进行革兰氏染色；G-接入乳糖培养液中复发酵，产酸产气者最后确证为大肠菌群结果计算：根据滤膜上经证实的大肠菌群数及滤过水量，求出每升水中的大肠菌群数量第二十一页，共三十二页，2022年，8月28日2、粪大肠菌群粪大肠菌群（fecalcoliform）：能在44~45℃发酵乳糖的大肠菌群，又称耐热性大肠菌群；以埃希氏菌属为主，其他3个属数量较少粪大肠菌群是理想的粪便指示菌：在人的粪便中粪大肠菌群细菌占总大肠菌群的96%，而且在体外环境中粪大肠菌群不易繁殖第二十二页，共三十二页，2022年，8月28日3、粪链球菌粪链球菌：短链状球菌，G+，含量仅次于大肠菌群细菌，在水中不自行繁殖，抵抗力弱差人粪便中粪大肠菌群数大于粪链球菌数，动物中则相反：粪大肠菌群数/粪链球菌数≥4，污染主要为人粪；≤0.7，污染主要动物粪；2~4，混合污染，以人粪为主；0.7~1，混合污染，以动物粪为主第二十三页，共三十二页，2022年，8月28日一、环境污染的指示微生物（一）一般污染指示微生物（二）粪便污染指示菌（三）其他指示微生物第二十四页，共三十二页，2022年，8月28日（三）其他指示微生物致病指示菌：主要包括沙门氏菌、志贺氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、链球菌、破伤风梭菌肠道病毒指示微生物：脊椎灰质炎病毒、大肠杆菌噬菌体第二十五页，共三十二页，2022年，8月28日1、沙门氏菌沙门氏菌（Salmonella）：G-，杆菌，周生鞭毛，无芽胞；好气性或兼性厌氧；不耐热，煮沸5min可将其杀死检测方法：将待测样品梯度稀释后，取适量涂布于伊红美兰培养基上，37℃培养48h，计算形成的菌落数目第二十六页，共三十二页，2022年，8月28日第二十七页，共三十二页，2022年，8月28日2、脊椎灰质炎病毒病毒的浓缩方法：微孔滤膜吸附洗脱法、氢氧化铝吸附沉淀法、聚乙二醇脱水透析法检测方法：蚀斑实验；将浓缩的含病毒样品，接种于Hep-2或RD细胞培养瓶中，经35℃培养1周，观察蚀斑形成情况，并进行蚀斑计数第二十八页，共三十二页，2022年，8月28日二、污染物毒性的微生物检测（一）发光细菌毒性试验（二）Ames致突变试验第二十九页，共三十二页，2022年，8月28日（一）发光细菌毒性试验发光细菌：一类能产生生物发光的细菌，主要是从海洋分离，特别是从海鱼体表分离得到；G-，兼性厌氧，有鞭毛发光细菌检测法：在环境不良或存在有毒物质时，发光细菌的发光能力减弱，其衰减程度与毒物的毒性和浓度成一定的比例关系；通过灵敏的光电测定装置，检查发光细菌受毒物作用时的发光强度变化，可以评价待测物的毒性大小第三十页，共三十二页，2022年，8月28日二、污染物毒性的微生物检测（一）发光细菌毒性试验（二）Ames致突变试验第三十一页，共三十二页，2022年，8月28日（二）Ames致突变试验沙门氏菌/阿姆斯（Ames）试验：是由美国阿姆斯（Ames）等1975年