实验一MS培养基的配制讲解学习

实验(shíyàn)一MS培养基的配制第一页，共18页。一、实验(shíyàn)目的了解植物外植体离体培养(péiyǎng)所需各种营养成分及激素种类。初步掌握培养(péiyǎng)基母液配制方法。第二页，共18页。二、实验(shíyàn)原理植物材料培养要获得成功，并正常生长，培养基的成分是一个决定性因素，不同植物要求不同的培养基。大多数植物组织培养所用(suǒyònɡ)的培养基由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等五类物质组成。第三页，共18页。在配制培养基之前，为了使用方便、简化操作、用量准确，减少每次配药称量各种化学成分所花费的时间和误差，常常将配制培养基所需无机大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素成分分别配制成比需要量大若干倍的浓缩(nónɡsuō)母液，置于冰箱内保存。当配制培养基时，按预先计算好的量分别吸取各种母液稀释即可。第四页，共18页。三、实验材料(cáiliào)与器具1、用具器材灭菌锅、普通及精密天平、烧杯(shāobēi)、医用瓷缸、量桶、移液管、试剂瓶、药勺、玻璃棒、pH试纸。2、药品试剂蒸馏水、1NHCl、1NNaOH、95%酒精、蔗糖、琼脂、各种所需化学药品（分析纯）。第五页，共18页。四、实验(shíyàn)步骤

1、母液配制(pèizhì)（1）配制(pèizhì)10倍1LMS大量元素母液NH4NO3

16.5gKH2PO41.7gKNO319g

CaCl2·2H2O

4.4gMgSO4·7H2O

3.7g第六页，共18页。

配制(pèizhì)成200倍1L母液，依次称取:KI0.166gNa2MoO4·2H2O0.05gH3BO31.24gCuSO4·5H2O

0.005gMnSO4·4H2O

4.46g

CoCl2·6H2O

0.005gZnSO4·7H2O

1.72g（2）配制(pèizhì)MS微量元素母液第七页，共18页。

配制(pèizhì)成200倍lL铁盐母液，依次称取:EDTA二钠（Na2·EDTA·7H2O）7.46g

FeSO4·7H2O

5.56g（3）配制(pèizhì)MS铁盐母液

第八页，共18页。

配制成200倍1L有机母液，依次(yīcì)称取：盐酸硫胺素（VB1）

0.02g烟酸

0.1g

盐酸吡哆醇（VB6）

0.1g（4）配制(pèizhì)MS有机母液①第九页，共18页。（5）配制(pèizhì)MS有机母液②配制(pèizhì)成200倍1L有机母液：肌醇

20.0g

（6）配制(pèizhì)MS有机母液③配制成200倍1L有机母液：甘氨酸

0.4g

第十页，共18页。

0.1mg/mL的6-BA溶液：取25mg的6-BA，用少量(shǎoliàng)1N的盐酸溶解，再加蒸馏水定容至250mL。0.1mg/mLNAA：取25mg的NAA可溶于热水中或用少量(shǎoliàng)95%乙醇或少量(shǎoliàng)1N的NaOH溶解后，再加水定容至250mL。0.1mg/mL2，4-D：取20mg的2，4-D溶于少量(shǎoliàng)95%乙醇中，再加水定容至200mL。（7）植物激素(jīsù)的配制第十一页，共18页。

2、培养基的配制(pèizhì)（以1L培养基为例）1、计量根据配制培养基的量（1L）和母液的浓度计算需要吸取(xīqǔ)母液的量，计算公式：吸取(xīqǔ)量mL=培养基中物质浓度（mg/L）×1000mL/母液浓度（mg/L）。母液浓度/培养基中物质浓度=稀释倍数2、移液取大烧杯（1L）一只，按照计算吸取(xīqǔ)母液的量依次吸取(xīqǔ)各母液置于烧杯中备用。3、称取称取10g琼脂，30g蔗糖备用。第十二页，共18页。4、融化(rónghuà)用搪瓷量杯量取600～700mL的蒸馏水放在电炉上，加入琼脂，边加热边用玻璃棒搅拌，直到液体呈半透明状将其取下，加入蔗糖，搅拌使之溶解。5、混合将融化(rónghuà)的琼脂和蔗糖倒入装有母液的大烧杯中，充分混合，用蒸馏水定容到1000mL。6、调pH用滴管吸取物质的量浓度为1mol/L的NaOH或HCl溶液调pH为6.0。第十三页，共18页。编号6-BA（mg/l）NAA（mg/l）2,4-D（mg/l）第一组0.50.11.0第二组0.50.52.0第三组0.50.050第四组1.00.10共分4组，每组配750mL培养基，每瓶倒25-30mL，共接种28瓶左右(zuǒyòu)每瓶编号1（1/2/3/4）n号分组情况(qíngkuàng)第十四页，共18页。3、培养基的分装(fēnzhuānɡ)和灭菌溶化的培养基应该趁热分装。分装时，将烧杯中的培养基倒入锥形瓶中，每瓶约25mL-30mL。注意(zhùyì)不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。用封口膜封口并编号。灭菌：121℃，15-20min。第十五页，共18页。五、注意事项配制铁盐母液时，FeS04和Na2EDTA应分别加热溶解后混合，并置于加热搅拌器上不断搅拌至溶液呈金黄