基因工程试题合集

武汉大学生命科学学院2023-2023<<基因工程>>A姓名 学号 专业 答案请写在答题纸上,写在试卷上无效.比较在大肠杆菌、植物和动物个体中表达真核生物基因时的优缺点。(16Southernblot〔12〕么要构建基因文库？〔10〕DNA(8500bpDNA3(18试述PCRPCR500bp入大肠杆菌中，请描述其克隆过程〔包括检测〔18〕表达植物基因枪和农杆菌介导的转化DNA者的优缺点？〔18〕教师给的重点：用DNA制备探针标记PCR相关问题转基因动物的安全性重组DNA与空载体自连噬菌体/农杆菌为根底的载体与质粒相关特点6.E.coli中高效表达外源真核基因的原理植物转基因方法〔农杆菌、基因枪...)动物转基因技术Southernblot原理以及在基因工程中的应用PCR克隆inE.coli(PCR从基因组中扩增DNA片段+t载体转入大肠杆菌筛选双抗性蓝白斑菌落〕比较以大肠杆菌、植物、动物作为外源真核基因表达系统的优缺点用大肠杆菌作为受体细胞表达目的基因的缘由DNA制备探针标记。切口平移法：掌握DNaseI的浓度，就可以在双链DNA分子的一条链的有限位置上翻开切口，形成3-OH末端〔这条链即成为引物。DNA聚合酶I把一个带有标记物的dNTP3-OH5-35-单核苷酸，同时依次添加的核苷酸到3一侧，其结果使切口沿着DNA平移，这就叫切口平移〔Nicktranslation)DNA配对互补的一小段DNADNA聚合酶klenow大片段能在随机引物的引导下以带有标记物的dNTP为原料合成的与模板DNA互补的探针。PCR法：标记物的dNTP,dNTP.引物〔插入片段两端的序列〕等扩增合成的带有标记物的DNA。末端标记法。用磷酸酶去除DNA32PDNA末端标记DNA。PCR相关问题。消灭非特异性扩增带PCR扩增后消灭的条带与估量的大小不全都非特异性扩增带。非特异性条带的消灭，其缘由：一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高、退火温度过低，及PCR循环次数过多有关。其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易消灭非特异条带而另一来源的酶则不消灭，酶量过多有时也会消灭非特异性扩增。其对策有：必要时重设计引物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量，适当增加模板量，削减循环次数。适当提高退火温度或承受二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延长)。Mg2+1.5～2.0mmol/L为宜。Mg2+浓度过高，反响特异性降低，消灭非特异扩增，浓度过低会降低TaqDNA聚合酶的活性，使反响产物削减。转基因动物的安全性。1．从基因工程的技术程序看，转基因动物性食品的食用安全性是可以保证的。首先，转DNA融合，而这个过程需要很严格的试验条件，这也正是转基因成功率较低的缘由之一。人们所吃的食物除了基因表达出来的蛋白，还包含基因的载体DNA本身，这些物质进入人体消化道之后被分解，即使没有完全分解，基因要进入人体细胞的细胞核并完成与DNA的融合而产生变异，也不会比试验室条件下简洁。其次，转入动物体内的基因都是自然存在的，人们寻常的食物中就含有这些基因，用转基因技术只是把这种基因转入其他的动物体内进展生产后再食用，因此，从理论上讲，转基因动物食品是安全的。但转基因动物性食品对人体安康也可能存在潜在的影响，如上述讲到的过敏原的问题，目的基因产物假设是潜在的过敏原，那么该转基因食品就有可能引起人体的过敏。2；②转基因动物中的基因给食物链其他环节造成了无意的不良后果；③。强化转基因动物的生存竞争性对自然界生物多样性的影响重组DNA和空载自连噬菌体农杆菌为根底的载体与质粒相关的特点1强化蛋白质的生物合成〔重组质粒的拷贝数，转录水平和翻译速率，启动子。高水平表达的最正确启动子必需具备的条件1〕它必需是一种强启动子，能够使克隆基因的蛋白质产物的表达量占细胞总蛋白的10％-3〔2〕这种启动子应当是诱导型的，能通过简洁的方式使用廉价的诱导物而得以诱导。B。使用有效的终止子。C。SD序列。D。选用偏爱密码子。E。增加质粒的拷贝数。抑制蛋白质产物降解；以包涵体、分泌蛋白、或融合蛋白形式表达。恢复维持蛋白质特异性空间构造。植物转基因的方法DNA直接转移法化学刺激法电击法显微注射法脂质体介导法基因枪法。微激光束法载体介导法。农杆菌介导法动物转基因技术。显微注射法。在显微操作仪下用极细的微吸管将在体外构建的外源目的基因注射到处于原核时期的受精卵的原核中，外源基因在受精卵生殖过程中通过DNA的复制而整合到动物基因组中，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体的子宫内连续发育，进而得到转基因动物逆转录病毒法。逆转录病毒法是将外源目的基因和逆转录病毒载体重组，再使之包装成为高滴度病毒颗粒，人为感染着床前或着床后的胚胎，也可直接将胚胎与能释放逆转录病毒的单层培育细胞共孵育以到达感染的目的。携带外源基因的反转录病毒DNA依靠逆转录病毒的整合酶及其末端特异性核苷酸序列可以整合到宿主染色体上，经过杂交筛选即可获得含有目的基因的动物。ESES细胞的基因组中，把ES细胞移入胚泡期的胚胎，再把这样的胚胎移植到假孕的代孕子宫内发育，产生〔嵌合体动物之间杂交，筛选出纯合转基因后代。DNA的载体，精子直接与外源DNA混合培育时，外源DNA可直接进入精子头部，通过受精将外源基因引入动物细胞中。DNA精子的卵母细胞微注射体细胞核移植法。将外源目的基因导入能传代培育的动物体细胞〔包括动物成体体细胞、胎体成纤维细胞等，以这些动物体细胞为核供体，通过显微操作或电融合使核供体与相应的核受体〔去核的原核胚或成熟的卵母细胞〕不经过有性生殖过程，在体外直接进展重组融合，对重组的胚进展胚胎移植，进而得到带有外源基因的转基因动物。9．Southernblot原理及在基因工程中的应用待分析的基因组DNA或其它DNA首先用一种或几种限制性核酸内切酶消化，消化后的DNA片段通过琼脂糖凝胶电泳依据分子量的大小进展分别，凝胶经碱变性处理，将DNA分子变性成单链，经毛细管作用或物理方法将凝胶中的单链DNA分子从胶上转移到固相支持物上〔一般使用的是尼龙膜和纤维素膜DNARNA探针对附着于膜上的DNA进展杂交来检测这些被转移的DNA片段，与探针有同源性的DNA片段在膜上的位置可以通过特定的检测方法如放射自显影或显色而显示。遗传病诊断，DNA图谱分析，检测样品中的DNA及其含量，PCR产物分析等检测重组子。从基因文库中筛选目的基因。Southern杂交可以确定外源基因在植物中的组织构造、外源DNA整和的位置及拷贝数、转基因植株F1世代外源基因的稳定性。10．比较一大肠杆菌。植物，动物作为外缘真核基因表达系统的优缺点。大肠杆菌：优点构造简洁，生理生化和遗传背景学问，尤其是其基因表达调控机制有了清楚的了解(2易于大规模培育，本钱低廉〔〕经过了遗传改造，已进展为一种安全基因工程试验系统，拥有各种不同的菌株和载体系列 缺点〔1真核基因具有内含子，所以只能用其cDN2〕很多真核生物基因仅在大肠杆菌中合成无特异性空间构造〕乏蛋白质加工系统〔4〕大肠杆菌内源性蛋白酶易降解外来的真核生物基因所表达的蛋白5〕反响。植物：优点1〕可对表达产物进展转译后加工，保持了产物的自然特性。2〕转基因植物中的外源基因可通过植物杂交的方法进展基因重组而到达在植物体内积存多基因的目的。3〕植物表达系统的产物可以直接储存在植物种子和果实中，无需冷连系统设备进展贮存运输，故易于长距离运输和普及推广。不仅降低了本钱且便利。4〕疫苗抗原基因转入可食低生产本钱，使用便利。5〕粘膜免疫是病毒性腹泻的免疫保护机制，但在启动粘膜免疫方面尚属难题。转基因植物细胞是可以启动粘膜免疫的有效途径。缺点：1〕生产周期长。2〕动物：优点：表达产物能充分修饰且具有稳定的生物活性，产品本钱低，并可进展大规模的生产；产品质量高，可诱导分泌，易提纯，不污染环境。缺点：1〕转基因动物成功率低2〕外源基因在动物基因组中的随机整合，可能会引起宿主细胞基因的插入突变、缺失突变及宿主基因的扩增