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血糖的测定实验五

(葡萄糖氧化酶法)（综合性实验一）一、实验目的和要求：掌握酶联法测定血糖含量的基本原理。熟悉分光光度计的操作。掌握血糖正常水平及其测定的临床意义。复习血糖的来源、去路及其调节的有关理论知识。

葡萄糖为一含醛基的已糖，在pH7.0条件，葡萄糖氧化酶（glucoseoxidase,GOD）可催化血样中葡萄糖氧化生成葡萄糖酸及过氧化氢。后者在过氧化物酶（peroxidase,POD）的作用下与苯酚，4-氨基安替毗啉氧化缩合成红色醌式物质，在505nm处有最大吸收峰。标本中葡萄糖含量与吸光度成正比，可求得血样中葡萄糖的含量。二、基本原理：β-D葡萄糖+O2+H2Oβ-D葡萄酸+H2O2葡萄糖氧化酶(GOD)H2O2

+4-氨基安替吡啉+苯酚H2O+红色醌式物质过氧化物酶(POD)原理505nm有最大吸收峰

正常血糖水平为80—120毫克／100ml，在糖尿病及肾上腺皮质机能亢进和脑下垂体机能亢进的患者血中葡萄糖含量可显著升高，饥饿时，血糖水平可下降。【器材】硬质中试管容量瓶、烧杯、玻璃棒电子天平微量移液器【试剂】工作液（酶酚混合试剂）葡萄糖双蒸水待测样品三、实验器材与试剂：取硬质中试管三支，分别标以1、2、3号，按下表操作：混匀后同时将三支试管置于37℃水浴中，保温10分钟，在波长505nm处比色。以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。（即测得A样和A标）四、实验操作：葡萄糖氧化酶法测定血糖的含量原理：步骤：空白管标准管样品管工作液1.5mL1.5mL1.5mL蒸馏水0.03mL标准液（10mM）0.03mL样品0.03mL

取3根试管，分别加入试剂混合均匀后，37摄氏度孵育10min，505nm比色，以空白管试剂调零，分别读取标准管和样品管的吸光值，并计算样品的实际浓度。葡萄糖+O2+H2O葡萄糖氧化酶葡萄糖酸+H2O22H2O2+4-氨基安替吡啉+酚过氧化物酶

醌亚胺+4H2O结果：请记录实验数据并列出计算公式葡萄糖标准溶液的配制配制10mmol/L葡萄糖溶液：

准确称量0.18g葡萄糖粉末；

用双蒸水溶解，充分溶解后，定容至100ml。标准曲线试管编号012345610mmol/L葡萄糖标准液（ml）00.0050.010.0150.0200.0250.030双蒸水（ml）0.0300.0250.0200.0150.0100.0050酶酚混合液（ml）1.501.501.501.501.501.501.50【计算】待测样品中葡萄糖浓度（mmol/L）＝——————×10

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