标准解读
《LY/T 1772-2008 杨树品种分子鉴定实验方法 DNA扩增片段长度多态性法(AFLP)》是一项针对杨树品种进行分子水平上鉴定的标准。该标准详细规定了利用AFLP技术对不同杨树品种进行遗传多样性分析的具体步骤和要求，以达到准确区分不同杨树品种的目的。
AFLP（Amplified Fragment Length Polymorphism），即扩增片段长度多态性，是一种基于PCR的DNA指纹技术。它结合了RFLP（限制性片段长度多态性）与RAPD（随机扩增多态性DNA）的优点，通过使用特定的限制性内切酶切割基因组DNA，并将得到的片段连接到接头序列上，随后选择性地扩增这些片段来揭示个体间的遗传差异。
根据此标准，整个实验流程主要包括以下几个关键环节：
- 样品准备：包括从新鲜或干燥的叶片中提取高质量的总DNA。
- 酶切及接头连接：采用两种不同的限制性内切酶同时消化样品DNA，并立即与特制的人工合成接头相连接。
- 预扩增：利用带有一个碱基选择性的引物对连接产物进行初步扩增。
- 选择性扩增：在预扩增的基础上，使用具有更多选择性碱基的引物进一步放大目标片段。
- 电泳分离与检测：通过聚丙烯酰胺凝胶电泳或毛细管电泳等手段分离扩增产物，并借助银染或其他化学发光试剂显色后观察记录。
- 数据分析：基于获得的带型图谱，运用适当的软件工具进行比对分析，从而识别出不同样本之间的相似性和差异性。
该标准还特别强调了实验过程中需要注意的一些技术细节，如如何保证酶切效率、提高接头连接率以及优化PCR反应条件等，旨在确保实验结果的可靠性和重复性。此外，对于数据分析部分也给出了指导建议，帮助研究人员正确解读AFLP谱带信息，有效应用于杨树种质资源的保护与利用研究当中。
如需获取更多详尽信息，请直接参考下方经官方授权发布的权威标准文档。
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- 废止
- 已被废除、停止使用，并不再更新
- 2008-09-03 颁布
- 2008-12-01 实施
文档简介
犐犆犛６５．０２０
犅６１
中华人民共和国林业行业标准
犔犢／犜１７７２—２００８
杨树品种分子鉴定实验方法
犇犖犃扩增片段长度多态性法（犃犉犔犘）
犕狅犾犲犮狌犾犪狉犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀犿犲狋犺狅犱犳狅狉狏犪狉犻犲狋犻犲狊狅犳狆狅狆犾犪狉—
犃犿狆犾犻犳犻犲犱犳狉犪犵犿犲狀狋犾犲狀犵狋犺狆狅犾狔犿狅狉狆犺犻狊犿（犃犉犔犘）
２００８０９０３发布２００８１２０１实施
国家林业局发布
书
犔犢／犜１７７２—２００８
前言
本标准的附录Ａ为资料性附录。
本标准由国家林业局提出。
本标准由全国林木种子标准化技术委员会归口。
本标准起草单位：中国林业科学研究院林业研究所、中国科学院遗传与发育生物学研究所和国家林
业局北方林木种子检验中心。
本标准主要起草人：李金花、张绮纹、王斌、宋红竹、周春江、卢孟柱、李庆梅、牛正田。
Ⅰ
书
犔犢／犜１７７２—２００８
杨树品种分子鉴定实验方法
犇犖犃扩增片段长度多态性法（犃犉犔犘）
１范围
本标准规定了以杨树新鲜组织（叶片、芽等）为材料，利用扩增片段长度多态性ＤＮＡ法（Ａｍｐｌｉｆｉｅｄ
ＦｒａｇｍｅｎｔＬｅｎｇｔｈＰｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，简称ＡＦＬＰ）对杨树品种进行分子鉴定的实验方法。
本标准适用于杨树品种的分子鉴定。
２原理
杨树基因组ＤＮＡ经限制性内切酶双酶切后，形成分子量大小不等的随机片段，将针对犈犮狅ＲＩ和
犕狊犲Ｉ的特定接头连接在这些ＤＮＡ片段的两端，形成带特异接头的ＤＮＡ片段，随后利用一对与接头和
邻接酶切位点相匹配的引物进行扩增，最终通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳将这些特异性片段分离开来，
通过比较待测品种和对照品种间ＤＮＡ指纹谱带数据的差异，来判定待测品种与对照品种是否为相同
品种。
３仪器和设备
３．１通用实验室仪器设备。
３．２梯度ＰＣＲ扩增仪。
３．３琼脂糖胶电泳系统。
３．４变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统。
３．５紫外透射仪。
３．６凝胶成像系统或照相系统。
３．７重蒸馏水仪。
４试剂与溶液
除非另有说明，在分析中使用分析纯试剂。配制好的溶液经高压灭菌后使用。实验中所使用的水
均为无菌超纯水。
４．１犇犖犃限制性内切酶犈犮狅犚犐和犕狊犲犐（１０犝／μ犔）及其１０×反应缓冲液
－２０℃保存。
４．２犜犪狇犇犖犃聚合酶（１犝／μ犔）及其１０×犘犆犚反应缓冲液
１０×ＰＣＲ反应缓冲液含２００ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８．４）、１５ｍｍｏｌ／Ｌ氯化镁（ＭｇＣｌ２）和
５００ｍｍｏｌ／Ｌ氯化钾（ＫＣｌ），－２０℃保存。
４．３犜４犇犖犃连接酶（１犝／μ犔）及其１０×连接反应缓冲液
１０×反应缓冲液含３５０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ７．６）、５０ｍｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２和５００ｍｍｏｌ／ＬＫＣｌ和
５ｍｍｏｌ／Ｌβ巯基乙醇；－２０℃保存。
４．４四种脱氧核糖核苷酸（犱犃犜犘，犱犆犜犘，犱犌犜犘，犱犜犜犘）混合溶液（各１０犿犿狅
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