实验6 噬菌体噬斑观察

实验六微生物学教研室郭棵棵噬菌体噬斑观察（验证性实验）操作：1、肠道菌的分离与鉴定（三）（接种半固体、蛋白胨水、尿素、斜面）2、噬菌体培养（平板法）材料：1、半固体、蛋白胨水、尿素、斜面各1支/人2、普通平板1块/3人

3、菌种及噬菌体标本各1支/6人

实验内容录像：厌氧菌的分离与鉴定上次课结果观察了解：厌氧菌的分离鉴定方法

噬菌体的生物学特点掌握：噬菌体培养的方法和意义[教学目标]

重点：噬菌体培养的操作方法

难点：噬菌体培养的操作方法[重点难点]上次结果观察克氏双糖铁培养基培养结果观察：部分培养基高层变黄，斜面维持原有红色；部分培养基高层、斜面均变为黄色；有的培养基不光有颜色变化，还出现气泡或裂隙；有的培养基出现黑色物质。Why？葡萄糖、乳糖：

可被细菌分解产酸产气，通常将培养基的高层的颜色改变代表葡萄糖，斜面代表乳糖。

蛋白胨：细菌分解可产生H2S

硫酸亚铁：与H2S结合形成FeS黑色沉淀

酚红指示剂:

pH范围6.8-8.4(酸黄碱红)克氏双糖铁培养基（复习）克氏双糖培养基培养结果判断分解葡萄糖乳糖产酸产气：

——

高层、斜面均变黄

——

培养基出现气泡、裂隙未产生H2S：无黑色FeS出现分解葡萄糖：高层变黄不分解乳糖：斜面仍为红色不产气：无气泡、裂隙出现未产生H2S：无黑色FeS出现大肠杆菌痢疾杆菌分解葡萄糖：高层变黄不分解乳糖：斜面红色产气：培养基出现气泡、裂隙产生H2S：出现黑色FeS甲型副伤寒杆菌乙型副伤寒杆菌分解葡萄糖：高层变黄不分解乳糖：斜面红色产气：培养基出现气泡、裂隙未产生H2S：无黑色FeS出现分解葡萄糖：高层变黄不分解乳糖：斜面红色产生H2S：出现黑色FeS不产气：培养基无气泡、裂隙出现伤寒杆菌标本脓血便、肛拭子选择/鉴别培基生化反应血清学鉴定半固体,蛋白胨水,尿素培养基，斜面S.S平板，KIA玻片凝集试验肠道菌分离鉴定步骤（续）操作取克氏双糖铁培养基斜面上的菌苔，分别接种半固体培养基观察细菌有无动力。蛋白胨水培养基用于观察细菌能否分解色氨酸产生靛基质。尿素培养基是根据酚红指示剂变色来判断细菌是否分解尿素产碱。斜面培养基是为下一次血清学鉴定提供菌种。肠道菌分离与鉴定（三）（接种半固体、蛋白胨水、尿素、斜面）操作一

半固体培养——

动力试验（氯化三苯四氮唑）加入指示剂TTC肠科杆菌动力试验结果：大肠埃希菌阳性？阴性？痢疾志贺菌阳性？阴性?伤寒沙门菌阳性？阴性？用于检查细菌是否具有鞭毛，能否运动？蛋白胨水培养——

吲哚（indol）试验

色氨酸吲哚对位二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚红色靛基质指示剂肠科杆菌吲哚试验结果：大肠埃希菌阳性？阴性？变形杆菌阳性？阴性？痢疾志贺菌阳性？阴性?伤寒、副伤寒阳性？阴性？检测细菌是否分解色氨酸产生吲哚（靛基质）？+—变形杆菌→尿素→氨红色+酚红尿素酶试验尿素酶试验结果检测细菌是否产生尿素酶，分解尿素产氨？（酚红颜色改变：酸黄碱红）肠科杆菌尿素酶试验结果：大肠埃希菌阳性？阴性？变形杆菌阳性？阴性？痢疾志贺菌阳性？阴性?伤寒、副伤寒阳性？阴性？操作二噬菌体培养噬菌体（Bacteriophage）是一类能感染细菌、放线菌、螺旋体、支原体和真菌等微生物的病毒。（1）个体微小，能通过除菌滤器；（2）结构简单：核酸+蛋白；（3）种类繁多，分布广泛；（4）专性细胞内寄生；（5）严格宿主特异性。生物学特点：蛋白质外壳核酸：DNAorRNA尾领尾髓尾鞘尾板：含溶菌酶尾刺尾丝：粘附功能头部尾部在电镜下，呈蝌蚪形，微球形及细杆形三种形态。噬菌体的形态与结构蝌蚪形噬菌体毒性噬菌体（virulentphage）：感染宿主菌后，能在宿主菌细胞内独立复制增殖，产生许多子代噬菌体，并最终裂解宿主菌的噬菌体。（1）毒性噬菌体与溶菌反应固体培养基：形成称为噬斑（Plaque）溶菌反应的结果：液体培养基：菌液由混浊变清亮。噬菌体的分类噬斑（plaque）：噬菌体和宿主菌在固体培养基上共同培养后形成的透明或半透明区域。一个噬斑是由一个噬菌体复制增殖并裂解宿主菌后形成的。（2）温和性噬菌体与溶源性反应温和噬菌体（temperatephage）：噬菌体基因组与宿主菌染色体基因组整合，随细菌基因组的复制而复制，并随细菌分裂而传代，细菌不裂解，也不产生子代噬菌体，也称之为溶原性噬菌体。前噬菌体（Prophage）：整合在细菌染色体上的噬菌体基因组。

溶原性细菌（lysogenicbacterium）：带前噬菌体基因组的细菌。（1）平板一分为二，分别标记为1、2区。（2）接种环蘸取菌液分别在1区和2区均匀密集划线，1区接种DH5a，2区接种对照菌。（3）用接种环蘸取DH5a的噬菌体贴加于