高效液相色谱系统ppt

高效液相色谱系统——液相色谱培训（二）液相色谱流程图高压泵进样器检测器色谱工作站色谱柱储液瓶一个存放流动相的容器。其结构材料必须对流动相是化学惰性的，常用的溶剂储液瓶的材料应耐腐蚀，可为玻璃、不锈钢、氟塑料、特种塑料聚醚醚酮(PEEK)或聚四氟乙烯衬里不锈钢容器等，贮液罐容积一般为0.5～2L储液瓶输液系统功能：溶剂输送目标：稳定准确重要指标：耐压能力压力脉动流量精密度流量准确性高压输液泵柱双柱塞往复式并联泵柱双柱塞往复式串联泵各品牌输液泵的基本参数项目Waters515型Agilent1100型LC-10ATvp型EliteP200II型LC-5500型检定要求流速范围0.001~100.001~100.001~9.9990.01~4.990.01～4.99调节精度0.0010.0010.0010.010.01流量精密度RSD0.1%0.15%（<0.3%）0.3%0.5%0.5%1.5%流量准确度±1.0%±1.0%±2.0%±5.0%±1.0%±2.0%最高压力4000Psi40MPa39.2MPa40.0MPa40MPa进样器隔膜进样停留进样阀进样自动进样进样器对进样器的要求密封性好死体积小重复性好保证中心进样进样时对色谱系统的压力、流量影响小进样器原理－六通阀手动进样器－六通阀一般HPLC分析常用六通进样阀（以美国Rheodyne公司的7725和7725i型最常见），其关键部件由圆形密封垫（转子）和固定底座（定子）组成。耐高压（35~40MPa），进样量准确，重复性好，操作方便分离系统功能：组分分离目标：分辨力强效率高色谱柱液相色谱柱是高效液相色谱仪的核心部分，是分析好坏、成败的关键键合相色谱柱键合相:反相:70%;C18,65%;C8,15%;苯基柱<5%,正相:20%;

硅胶、-NH2、-CN、-OH其它(手性柱,离子交换柱):10%反相色谱是目前应用得最为广泛的高效液相色谱方法。C18和C8在反相色谱中应用得最为广泛。检测器功能：检测组分浓度目标：准确检出限低重要指标：噪声、漂移、线性、检出限紫外检测器（包括二极管阵列检测器）荧光检测器示差折光检测器电导检测器蒸发光散射检测器原理：基于被分析组分对特定波长紫外光的选择性吸收定量基础：朗伯-比耳定律，A＝KCL优点：1）灵敏度高

2）对温度和流速不敏感

3）可用于梯度洗提缺点：仅适用于测定有紫外吸收的物质紫外检测器

样品池二极管阵列光栅D2/W灯每一组分可在每一波长处得到一吸光度值二极管阵列检测器二极管阵列检测器1）采集三维谱图2）峰纯度检验3）光谱库检索4）可以发现单波长检测时未测到的峰二极管阵列检测器的优点大多数有机化合物有一定程度的吸光度，所以紫外-可见检测器可以测定大多数的化合物，是目前实验室中使用最多的检测器

--多数公司售出的检测器中75%以上是吸光度检测器（其中50%以上是紫外-可见检测器，25%是PDA）紫外-可见检测器原理：基于被分析组分发射的荧光强度进行检测优点：1）灵敏度极高，是最灵敏的检测器之一

2）选择性好

3）对温度和流速不敏感，可用于梯度洗脱缺点：仅适用于测定可产生荧光的物质可检测物质：多环芳烃、霉菌毒素、酪氨酸、色氨酸、卟啉、儿茶酚氨等（具有对称共轭体系）荧光检测器原理：连续测定流通池中溶液折射率来测定试样中各组分浓度。优点：通用型检测器，缺点：1）对温度变化敏感2）对溶剂组成变化敏感，不能用于梯度检测3）属于中等灵敏度的检测器示差折光检测器原理：根据物质在某些介质中电离后所产生的电导变化来测定电离物质含量。广泛应用于离子色谱法优点：对流动相流速和压力的改变不敏感，可用于梯度洗脱缺点：对温度变化敏感（每升高1度，电导率增加2%-2.5%)主要用于离子色谱检测水溶性无机和有机离子电导检测器蒸发激光光散射检测器（ELSD）通用型检测器（适合于挥发性比流动相低的任何组分）；响应值与组分质量有关；可用于梯度洗脱HPLC柱喷雾气体蒸发漂移管激光光源样品液滴光二极管检测器散射室工作站数据采集系统功能：采集处理数据目标：使用便捷功能完善梯度洗脱●HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品比例阀检测器进样器ABCD色谱柱高压输液泵低压梯度阻尼器混合器高压输液泵检测器进样器色谱柱梯度混合器高压输液泵高压梯度梯度洗脱梯度洗脱的特点优点缩短分析时间增加分离能力提高检测灵敏度缺点仪器设备要求高不适合某些检测方式(RI)柱需再生平衡定量分析的重复性较低梯度洗脱注意的问题注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相所用的溶剂纯度要求高所用的溶剂要彻底脱气，防止混合时产生气泡混合溶剂的黏度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力变化每次梯度洗脱后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复初始状态高效液相色谱的配件管路与连接件脱气装置：在线脱气机或超声波清洗器过滤器：溶剂过滤器和针筒式过滤器进样器：平头进样器不同材质的管路不锈钢管：耐腐蚀性好，有精密的同轴度，一般用于高压部分聚合物管：用在液相色谱系统中从储液瓶到泵、检测器出口以后和进样器排液口等低压部分PEEK（聚醚醚酮）管：是一种耐高温、高性能的工程塑料，具有良好的惰性，适宜于生物样品的分离分析液路连接件连接件也称接头一般可分为两种：高压接头和低压接头高压接头采用不锈钢材质低压接头采用高聚物材质连接件主要有卡套和空心螺钉液路连接密封示意图液路连接装配不合适的示意图脱气装置超声波清洗器通过超声波作用使流动相中的气泡排除，超声脱气效率只有20％～30％左右在线脱气机脱气效果好，脱气效率大于70％，在线脱气机使用方便、省事，尤其是在作梯度洗脱时最好用在线脱气机。过滤装置溶剂过滤器为了除去流动相中的杂质，对流动相进行过滤溶剂过滤器要配滤膜（有机系和水系，规格0.45μm或更小孔径的滤膜）针筒式过滤器样品溶液在进入色谱系统前必须经过针筒式过滤器针筒式过滤器也分为有机系和水系，规格0.45μm或更小孔径的进样器液相色谱的进样器必须是平头进样器常配的进样器规格为10、25、50、100μL最常使用的为50μL和100μL的进样器LC-5500和LC-5510

高效液相色谱仪介绍LC-5500高效液相色谱仪LC-5500高压输液泵P-101型高压液相平流泵由泵体、过滤器、缓冲器、步进电机、步进电机驱动器、控制电路板、键盘以及液晶显示器等部件构成LC-5500高压输液泵技术指标工作压力：0～40MPa流量范围：0.01～5.0mL/min流量准确性：≤1％流量精密度：≤0.5％压力脉动：≤1％LC-5500高压输液泵主要特点采用双柱塞交替输液吸液，特殊设计的非圆凸轮运动曲线，保证输出液体流速稳定精密电机及电路设计，实现流量控制和流速的稳定性压力传感器避免了过压对色谱柱和泵的意外损害性能良好的阻尼器有效消除了输液脉冲采用LCD带背光的显示屏来显示泵的设置参数和运行参数。梯度洗脱流量程序智能化，流量准确LC-5500高效液相色谱仪主机主机包括两部分：柱温箱紫外-可见光检测器LC-5500柱温箱技术指标：温度控制范围：室温＋10～80℃温度控制精度：±1℃功能特点：控温精度准确更换色谱柱方便分析结果重现性好保证检测稳定性LC-5500紫外-可见光检测器技术指标：波长范围：190～650nm波长精度:±2nm波长重复性:优于2nm基线噪声：±1×10-4AU基线漂移：±5×10-4AU/h光谱带宽：8nm流通池体积：5ul最小检测浓度：＜4×10-8g/mL(萘的甲醇溶液)LC-5500紫外-可见光检测器功能特点：使用波长范围宽波长精度准确能够实现多波长测定LC-5500工作站功能特点：具有仪器控制系统、数据采集和处理系统；可进行波长程序控制可设定柱温可对两台泵进行程序控制，进行梯度洗脱LC-5510高效液相色谱仪LC-5510在线脱气机在线脱气机主要由真空泵、脱气膜管、传感器、控制电路、真空腔等组成在线脱气机的主要目的是脱除流动相中的气泡LC-5510高压输液泵技术指标工作压力：0～42MPa流量范围：0.01～5.0mL/min流量准确性：≤1％流量精密度：≤0.5％压力脉动：≤1％LC-5100高压输液泵主要特点采用双柱塞交替输液吸液，特殊设计的非圆凸轮运动曲线，保证输出液体流速稳定精密电机及电路设计，实现流量控制和流速的稳定性压力传感器避免了过压对色谱柱和泵的意外损害性能良好的阻尼器有效消除了输液脉冲采用LCD带背光的显示屏来显示泵的设置参数和运行参数。梯度洗脱流量程序智能化，流量准确LC-5510柱温箱技术指标：温度控制范围：5～80℃温度控制精度：±0.2℃温度设定值误差：±0.5℃LC-5510柱温箱功能特点：控温精度准确分析结果重现性好保证检测稳定性采用LCD带背光的显示屏来显示柱温的设置和运行温度既可升温也可降温，能满足一些特殊用户的需求LC-5510紫外-可见光检测器技术指标：波长范围：190～650nm波长精度:±0.2nm波长重复性:优于0.2nm基线噪声：±6×10-5AU（动态，254nm）基线漂移：±2.5×10-4AU/h（动态