标准解读
《GB/T 40627-2021 油菜茎基溃疡病菌活性检测方法》是一项国家标准，专门针对油菜茎基溃疡病菌（Leptosphaeria maculans）的活性检测提供了一套标准化的操作流程。该标准旨在通过规范化的实验步骤和技术要求，提高检测结果的一致性和准确性，为科学研究、农业生产以及植物检疫等领域提供技术支持。
根据此标准，首先明确了适用范围，适用于油菜茎基溃疡病菌在实验室条件下的活性测定。接着详细规定了所需材料与试剂，包括但不限于健康无病斑的油菜植株样本、培养基质等，并对每种材料的质量提出了具体要求。此外，还列举了一系列必要的仪器设备，如显微镜、恒温培养箱等，以确保实验能够顺利进行。
对于样品处理部分，《GB/T 40627-2021》提供了详细的指导原则，从样品采集到保存都有明确指示，强调了保持样品原始状态的重要性。同时，针对不同类型的样本给出了相应的预处理建议，比如清洗去除表面杂质、适当切割等步骤，以便于后续操作。
在关键的检测环节，该标准描述了两种主要方法：直接观察法和分子生物学鉴定技术。前者依靠肉眼或借助低倍率显微镜来识别特征性病变；后者则利用PCR扩增特定DNA片段的方式进行定性分析。无论采用哪种方式，都需严格按照给定条件执行，包括反应体系构建、温度设置及时间控制等方面。
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- 现行
- 正在执行有效
- 2021-10-11 颁布
- 2022-05-01 实施
文档简介
ICS6502001
CCSB.16.
中华人民共和国国家标准
GB/T40627—2021
油菜茎基溃疡病菌活性检测方法
ViabilittestofLeptosphaeriamaculansDesmCes.etDeNot.
y()
2021-10-11发布2022-05-01实施
国家市场监督管理总局发布
国家标准化管理委员会
GB/T40627—2021
前言
本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定
GB/T1.1—2020《1:》
起草
。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任
。。
本文件由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口
(SAC/TC271)。
本文件起草单位中华人民共和国深圳海关深圳市检验检疫科学研究院
:、。
本文件主要起草人高瑞芳章桂明王颖黄河清向才玉李娜
:、、、、、。
Ⅰ
GB/T40627—2021
油菜茎基溃疡病菌活性检测方法
1范围
本文件描述了应用普通荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜对油菜茎基溃疡病菌Letoshaeria
[pp
maculans分生孢子进行活性检测的方法
(Desm.)Ces.etDeNot.]。
本文件适用于油菜茎基溃疡病菌相关寄主中携带的油菜茎基溃疡病菌分生孢子的活性检测鉴定
。
2规范性引用文件
本文件没有规范性引用文件
。
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义
。
4原理
应用荧光染料对油菜茎基溃疡病菌分生孢子进行染色处理根据碘化丙啶
,(PropidiumIodide,PI)
能够穿透正在死亡或者已经死亡的细胞膜不能透过具有活力的细胞膜使不具活性的孢子发出红色荧
,,
光具有活性的孢子不发出荧光的特点运用普通荧光显微镜或激光扫描共聚焦显微镜对荧光染料处理
、,
的分生孢子进行检测分析其活性情况油菜茎基溃疡病菌基本信息见附录
,。A。
5仪器和试剂
51试剂
.
碘化丙啶溶液配置方法称取粉末加入无菌水配制成浓度为的
(PI):0.01gPI,10mL,1mg/mL
母液置于棕色瓶避光保存使用前配制所需浓度
,4℃,。
马铃薯葡萄糖琼脂培养基去皮土豆切成小方块加入自来水煮沸
(PDA):200g,1000mL,
四层纱布过滤得到滤液滤液中加入葡萄糖琼脂粉加热溶解后将溶液定容至
15min,,18g、18g,
分装到三角瓶中高压蒸汽灭菌
1000mL,,121℃20min。
52设备
.
激光扫描共聚焦显微镜或普通荧光显微镜高压灭菌锅生物安全柜生化培养箱冰箱离心机
、、、、、。
6活性检测方法
61检测样品制备
.
在超净工作台中用解剖针将油菜茎基溃疡病菌分生孢子挑到灭菌水中充
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