标准解读
《GB/T 40254-2021 轮枝菌属实时荧光PCR检疫鉴定方法》是一项国家标准，旨在提供一种科学准确的方法用于检测和鉴定轮枝菌属（Verticillium spp.）真菌。该标准详细规定了利用实时荧光定量PCR技术对植物样本中的轮枝菌进行快速、灵敏且特异性的检测流程。
标准首先明确了适用范围，指出其适用于各类可能被轮枝菌感染的植物材料中目标病原体DNA的提取与后续分析。接着，在术语和定义部分，介绍了相关概念如“模板DNA”、“引物”、“探针”等专业词汇的确切含义，为理解全文打下基础。
对于实验所需的主要仪器设备及试剂耗材，《GB/T 40254-2021》也做了具体说明，包括但不限于热循环仪、离心机、微量移液器等实验室常用工具以及特定的核酸提取试剂盒、dNTPs混合物等生物化学制品。同时强调了在操作过程中应严格遵守安全防护措施，防止交叉污染。
样品处理方面，标准提供了详细的步骤指导，从采集新鲜或干燥植物组织开始，经过研磨、裂解细胞壁直至最终获得纯净度较高的基因组DNA溶液。此过程需注意避免外来DNA污染，并确保样品充分破碎以利于后续反应顺利进行。
接下来是关键的PCR扩增环节，《GB/T 40254-2021》推荐使用特定序列设计的引物与TaqMan探针组合来识别轮枝菌特有的保守区域。通过设置合适的退火温度、延伸时间等因素优化反应条件，使得目标片段能够高效复制并产生荧光信号。此外还列出了阳性对照品的选择标准及其应用价值。
结果判定部分则依据Ct值大小判断是否存在目标病原体感染情况：当Ct值小于等于设定阈限时视为阳性；反之则为阴性。需要注意的是，由于不同实验室之间可能存在差异，因此建议定期参与能力验证活动以保证检测结果的一致性和可靠性。
如需获取更多详尽信息，请直接参考下方经官方授权发布的权威标准文档。
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- 现行
- 正在执行有效
- 2021-05-21 颁布
- 2021-12-01 实施
文档简介
ICS6502001
CCSB.16.
中华人民共和国国家标准
GB/T40254—2021
轮枝菌属实时荧光PCR检疫鉴定方法
DetectionandidentificationofVerticilliumNeesusingreal-timePCR
2021-05-21发布2021-12-01实施
国家市场监督管理总局发布
国家标准化管理委员会
GB/T40254—2021
前言
本文件按照标准化工作导则第部分标准化文件的结构和起草规则的规定
GB/T1.1—2020《1:》
起草
。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利本文件的发布机构不承担识别专利的责任
。。
本文件由全国植物检疫标准化技术委员会提出并归口
(SAC/TC271)。
本文件起草单位中华人民共和国宁波海关中国科学院微生物研究所西宁市蔬菜技术服务中心
:、、、
中国检验检疫科学研究院中华人民共和国乌鲁木齐海关
、。
本文件主要起草人段维军蔡磊张慧丽赵鹏张晓梅郭立新刘芳李雪莲张永江张小菊
:、、、、、、、、、、
陈先锋
。
Ⅰ
GB/T40254—2021
轮枝菌属实时荧光PCR检疫鉴定方法
1范围
本文件描述了植物病原真菌轮枝菌属实时荧光聚合酶链式反应检疫鉴定方法
(PCR)。
本文件适用于携带轮枝菌属病菌的土壤植物及其产品中轮枝菌属病菌的检测筛查
、。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款其中注日期的引用文
。,
件仅该日期对应的版本适用于本文件不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于
,;,()
本文件
。
植物病原真菌检测规范
SN/T2589
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义
。
4基本信息
中文名轮枝菌属
:。
学名Verticillium
:Nees。
轮枝菌属隶属于真菌界子囊菌门盘菌亚门粪壳菌纲
(Fungi),(Ascomycota),(Pezizomycotina),
中的小不整球壳科
(Sordariomycetes)(Plectosphaerellaceae)。
传播途径轮枝菌属病菌主要由种子传播也可经病残体土壤风灌溉水和昆虫传播
:,、、、。
5鉴定原理
根据轮枝菌属病菌的序列特征及实时荧光原理应用所设计引物或探针对轮枝菌属病
DNAPCR,
菌进行检测鉴定
。
6仪器设备和器具试剂和培养基
、
61仪器设备和器具
.
高压灭菌锅显微镜解剖镜天平水浴锅制冰机纯水仪涡旋振荡器微量紫外分光光度计高
、、、、、、、、、
速冷冻离心机冰箱超净工作台生化培养箱通风橱实时荧光仪微量移液器
、、、、、PCR、(0.1μL~2.5μL、
锥形瓶培养皿
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