文稿教案讲稿

项目主要结 字体说 参考文 项目主要结果Intens.Intens.0

11m/zm/z（质荷比Intens（峰度I1.1符号名 符号说 小四字 五号字 正字 1蛋白分子量测定工作流程蛋白分子量测定原理基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)是一种新型的软电离生物质谱，尤其适用于蛋白质等生物大分子的分子量测定。其分子量测定原理如图2.1所示。图 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定蛋白分子量原基质辅助激光解析电离飞行时间质谱仪器主要由两部分组成：基质附助激光解析电离离子源（MALDI）和飞行时间质量分析器（TOF。MALDI的原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给蛋白分子，而电离过程中将质子转移到蛋白分子或从蛋白分子得到质子，而使蛋白分子电离的过程。因此它是一种软电离技术，适用于混合物及生物大分子的测定。TOF的原理是离子在电场作用2下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测，即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比，从而可以检测离子，测定其分子量。现阶段MLD-O-S测定蛋白分子量有其独特的优势（1对样品的消耗很少，特别适合于贵重蛋白的分子量测定；（2）对样品的保护作用好，基质可以保护样品的化合物不被破坏；（3）随着质量分析器的不断改进、新的基质的不断发现和应用以及延迟萃取技术的使用，使得MAD-TO-S的最高分辨率不断提高，现已达到5000；（）MALD-TO-S检测到的单电荷峰占主要部分，碎片峰少，非常有利于对复杂混合物的分析，并且能忍受较高浓度的盐、缓冲剂和其他难挥发成分，降低了对样品预处理的要求（5MALDI-TOMS质谱对分子量的测定范围是所有测试技术中最广的。数处理过2.2该图显示蛋白质分子测定的实验基本流程：第一步，对客户所提供的样品（一般为已经提激光解析飞行时间质谱（ultrafleXtremeMALDITOF/TOF）性模式下对1K~20KD、20K~200KD、200K~1000KD三个区间进行质谱扫描（只提供扫到信号峰的区间谱图。3生物信息分析流Raw数Raw处理过件，应用Flexysis分析软件对数据进行处理，通过峰识别，得到峰列表，分析判断得到相应蛋白质的4标准生物信息分析结果单一蛋白样品进行分子量测定，也可对多种蛋白的混合样中各蛋白分子量进定。所用软件：exyss3.3版。质谱下机数据经该软件处理后得到质谱峰图，图中横坐标为带电荷蛋白样质荷比（m/z，纵坐标为峰强度（Intense，单位为[a.u]埃单位。对软件的信噪比和峰宽进行设置，一般情况下，软件默认的信噪比参数为6宽没有特定值，视所测蛋白具体情况自行设置，如设置为10，则表明10以下为噪声，将被筛选掉，软件的默认峰宽参数为0.75m/z。软件自动标注选取得到峰单一蛋白样品分子量测定ultrafleXtr（Bruker50000，质量准确度为25ppm，蛋白样品的基本信息如表3.1所示：3.1 5000000Intens. 3.13.2

m/z（质荷比Intens（峰度综合图表分析，该样品中质谱检测到三种不同质荷比的离子峰：33162.1，66135.6，132788.2。飞行时间质谱仪中出现最多的一般为单电荷，由此可以判断分子量为66135.6，多种蛋白样品分子量测定基质辅助激光解析电离飞行时间质谱可以对多种蛋白样品的混合样进定，得到各蛋白的分子量，测定中所使用ultrafleXtre（Bruker）质谱仪，分辨率50000，质量准确度为25ppm，蛋白样品的基本信息如表3.3所示：3.3样品名 样品编 靶点编 6Intens.Intens.3.23.4m/z（质荷比Intens（峰强度 7[1]谭和平,王彧婕,等.蛋白质分子量测试方法概述[J].中国测试[2],