标准解读

《GB/T 35912-2018 猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法》是一项国家标准，规定了使用荧光定量逆转录聚合酶链反应（Fluorescent RT-PCR）技术对猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus, PRRSV）进行检测的具体方法。该标准适用于疑似感染PRRSV的猪只样本中病毒核酸的定性检测。

根据标准内容，首先需要准备相关试剂和设备，包括但不限于RNA提取试剂盒、反转录酶、Taq DNA聚合酶、引物探针混合液等，并确保所有实验器材无核酸污染。样品采集方面，推荐从患病动物或疑似感染个体处取得鼻拭子、口腔液、血液、肺组织等作为待测材料。对于固体组织样本，还需经过匀浆处理后方可进入后续步骤。

接下来是RNA提取过程，依据所选用的商业试剂盒说明书操作即可完成。获得纯化后的总RNA之后，按照预定程序实施逆转录反应以生成cDNA模板。然后配置好含有特异性引物及荧光标记探针的PCR反应体系，在实时荧光定量PCR仪上运行扩增曲线分析软件自动判断结果。阳性对照品应显示出典型的S形扩增曲线且Ct值小于等于阈值；阴性对照则不应有非特异性扩增现象发生。

整个实验流程需严格遵守生物安全规范，避免交叉污染导致假阳性结果出现。此外，为保证数据准确性，建议定期参加室间质量评价活动并适时调整优化实验条件。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2018-02-06 颁布
  • 2018-09-01 实施
©正版授权
GB/T 35912-2018猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法_第1页
GB/T 35912-2018猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法_第2页
GB/T 35912-2018猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法_第3页
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文档简介

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T35912—2018

猪繁殖与呼吸综合征病毒

荧光RT-PCR检测方法

Real-timeRT-PCRmethodfordetectionofporcinereproductive

andrespiratorysyndromevirus

2018-02-06发布2018-09-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T35912—2018

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国动物卫生标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位中华人民共和国上海出入境检验检疫局中国农业科学院上海兽医研究所中华

:、、

人民共和国深圳出入境检验检疫局湖南圣湘生物科技有限公司中国检验检疫科学研究院

、、。

本标准主要起草人张强李健熊炜童光志赵和平李树清花群义杨忠苹李国新王巧全

:、、、、、、、、、、

王艳林颖峥蔡开妹喻正军林祥梅吴绍强

、、、、、。

Ⅰ

GB/T35912—2018

猪繁殖与呼吸综合征病毒

荧光RT-PCR检测方法

1范围

本标准规定了猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光检测的操作方法

RT-PCR。

本标准适用于猪繁殖与呼吸道综合征病毒美洲型毒株核酸检测

。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

猪常温精液生产与保存技术规范

GB/T25172

3缩略语

下列缩略语适用于本文件

。

荧光反转录聚合酶链式反应

Real-timeRT-PCR:(real-timereversetranscriptpolymerasechainre-

action)

Ct值每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值时所经历的循环数

:(cyclethreshold)

核糖核酸

RNA:(ribonucleicacid)

Taq酶Taq聚合酶Taq

:DNA(DNApolymerase)

缓冲液缓冲液

TE:Tris-EDTA(Tris-EDTAbuffer)

焦碳酸二乙酯

DEPC:(diethylpyrocarbonate)

猪繁殖与呼吸综合征病毒

PRRSV:(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus)

磷酸盐缓冲液

PBS:(phosphatebufferedsolution)

4仪器

41荧光检测仪

.PCR。

42高速台式冷冻离心机可控温至离心速度可达以上

.:4℃、12000r/min。

43组织研磨器或者研钵

.。

44普通冰箱

.:2℃~8℃。

45超低温冰箱可控温至以下

.:-70℃。

46微量移液器并

.:0.2μL~2μL、1μL~10μL、

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