消毒质量现场采样及检测方法

消毒质量现场采样及检测方法提要洁净区域（手术室、供应室、ICU、透析室、层流病房）生物安全柜医护人员手物体表面使用中消毒剂灭菌器械（压力蒸汽、等离子体、低温甲醛熏蒸柜）紫外线辐照强度消毒器械（氧化还原电位水、熏蒸柜）现场指标—洁净区域温度湿度照度压差洁净度风速新风换气次数洁净区域技术参数---

特别洁净手术室、特殊实验室项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)+8换气次数(次/h)--手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)0.25～0.30自净时间(min)≤15温度(℃)22～25相对湿度(%)40～60最小新风量(m3/h·人--(次/h)60--6噪声dB(A)≤52最低照度(lx)≥350洁净区域技术参数---

标准洁净手术室项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)+8换气次数(次/h)30～36手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)≤25温度(℃)22～25相对湿度(%)40～60最小新风量(m3/h·人--(次/h)60--6噪声dB(A)≤50最低照度(lx)≥350洁净区域技术参数---

一般洁净手术室项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)+5换气次数(次/h)18～22手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)≤30温度(℃)22～25相对湿度(%)35～60最小新风量(m3/h·人--(次/h)60--4噪声dB(A)≤50最低照度(lx)≥350洁净区域技术参数---

准洁净手术室项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)+5换气次数(次/h)12～15手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)≤40温度(℃)22～25相对湿度(%)35～60最小新风量(m3/h·人--(次/h)60--4噪声dB(A)≤50最低照度(lx)≥350洁净区域技术参数---

体外循环灌注专用准备室项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)+5换气次数(次/h)17～20手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)--温度(℃)21～27相对湿度(%)≤60最小新风量(m3/h·人--(次/h)---3噪声dB(A)≤60最低照度(lx)≥150洁净区域技术参数---

无菌敷料、器械、一次性物品室和精密仪器存放室项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)+5换气次数(次/h)10～13手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)--温度(℃)21～27相对湿度(%)≤60最小新风量(m3/h·人--(次/h)---3噪声dB(A)≤60最低照度(lx)≥150洁净区域技术参数---

护士站项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)+5换气次数(次/h)10～13手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)--温度(℃)21～27相对湿度(%)≤60最小新风量(m3/h·人--(次/h)---3噪声dB(A)≤60最低照度(lx)≥150洁净区域技术参数---

准备室(消毒处理)项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)+5换气次数(次/h)10～13手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)--温度(℃)21～27相对湿度(%)≤60最小新风量(m3/h·人--(次/h)---3噪声dB(A)≤60最低照度(lx)≥200洁净区域技术参数---

预麻醉室项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)-8换气次数(次/h)10～13手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)--温度(℃)22～25相对湿度(%)30～60最小新风量(m3/h·人--(次/h)---4噪声dB(A)≤55最低照度(lx)≥150洁净区域技术参数---

刷手间项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)＞0换气次数(次/h)10～13手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)--温度(℃)21～27相对湿度(%)≤65最小新风量(m3/h·人--(次/h)---3噪声dB(A)≤55最低照度(lx)≥150洁净区域技术参数---

洁净走廊项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)＞0换气次数(次/h)10～13手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)--温度(℃)21～27相对湿度(%)≤60最小新风量(m3/h·人--(次/h)---3噪声dB(A)≤55最低照度(lx)≥150洁净区域技术参数---

更衣室项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)-换气次数(次/h)8～10手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)--温度(℃)21～27相对湿度(%)≤65最小新风量(m3/h·人--(次/h)---3噪声dB(A)≤60最低照度(lx)≥200洁净区域技术参数---

恢复室项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)-换气次数(次/h)8～10手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)--温度(℃)22～25相对湿度(%)30～60最小新风量(m3/h·人--(次/h)---4噪声dB(A)≤50最低照度(lx)≥200洁净区域技术参数---

清洁走廊项目标准值最小静压差(Pa,对相邻低级别洁净室)-换气次数(次/h)0～+5手术区手术台(或局部100级工作区)工作面高度截面平均风速(m/s)--自净时间(min)--温度(℃)21～27相对湿度(%)≤65最小新风量(m3/h·人--(次/h)---3噪声dB(A)≤55最低照度(lx)≥150其他产科手术室为全新风感染手术室：负压或可切换手术室洁净手术室的监测不得以空气洁净度级别或细菌浓度的单项指标代替综合性能全面评定；不得以竣工验收阶段的调整测试结果代替综合性能全面评定的检验结果。

温度、湿度的检测应符合下列要求夏季工况应在当地每年最热月的条件下检测，冬季工况应在当地每年最冷月的条件下检测室内温湿度测定为距地面0.8m高的中心点，检测仪器为可显示小数后一位的数字式温湿度测量仪

测出室内的温湿度之后，应同时测出室外温湿度。

工作区截面风速的测试要求对Ⅰ级洁净手术室达到100级洁净度的手术区和有局部100级的Ⅰ级洁净辅助用房中达到100级洁净度的区域应先测其工作区截面平均风速，综合性能检测结果不应小于0.27m/s，并不应超过规定的风速上限1.2倍测点范围为送风口正投影区边界0.12m内的面积，均匀布点测点高度距地0.8m，无手术台或工作面阻隔，测点间距不应大于0.3m，当有不能移动的阻隔时，测点可抬高至阻隔面之上0.25m检测仪器为微风速仪

换气次数检测要求对Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级洁净手术室和洁净辅助用房应通过检测送风口风量换算得出换气次数，综合性能检测结果不应小于规定范围的均值，并不应超过此范围上限的1.2倍或根据需要的设计值的1.2倍对于分散布置的送风口，对每个风口用套管法检测对于集中布置的送风口，应测出送风支管内的送风速度或送风面平均送风速度，换算出房间的换气次数洁净度级别的检测要求Ⅰ级洁净手术室和洁净辅助用房检测前，系统应已运行15min，其他洁净房间应已运行40min在确认风速、换气次数和静压差的检测无明显问题之后，再检测含尘浓度对≥0.5μm和≥5μm的微粒，检测结果均应同时满足下列条件：各测点平均含尘浓度

最大值max不大于规定的级别上限浓度的80%如果虽未超过级别上限但已大于该上限的80%，则应加大风量重测洁净度测试布点要求区域最少测点数Ⅰ级洁净手术室手术区和洁净辅助用房局部100级区5点(双对角线布点)Ⅰ级周边区8点(每边内2点)Ⅱ～Ⅲ级洁净手术室手术区3点(单对角线布点)Ⅱ级周边区6点(长边内2点，短边内1点)Ⅲ级周边区4点(每边内1点)Ⅳ级洁净手术室及分散布置送风口的洁净室面积＞30m24点(避开送风口正下方)面积≤30m22点(避开送风口正下方)洁净度测试要求每次采样的最小采样量：100级区域为5.66L，以下各级区域为2.83L

测点布置在距地面0.8m高的平面上，在手术区检测时应无手术台，当手术台已固定时，测点高度在台面之上0.25m在100级区域检测时，采样口应对着气流方向；在其他级别区域检测时，采样口均向上

当检测含尘浓度时，检测人员不得多于2人，都应穿洁净工作服，处于测点下风向的位置，尽量少动作

当检测含尘浓度时，手术室照明灯应全部打开

检测仪器应为流量不小于2.83L/min的光散射式粒子计数器噪声的检测要求噪声检测宜在外界干扰较小的晚间进行，以A声级为准不足15m2的房间在室中心1.1m高处测一点，超过15m2的在室中心和四角共测5点检测仪器宜用带倍频程分析仪的声级计全部噪声测定之后，应关闭净化空调系统测定背景噪声，当背景噪声与室内噪声之差小于10dB时，室内噪声应按常规予以修正照度的检测要求照度检测应在光源输出趋于稳定(新日光灯和新白炽灯必须已使用超过10h，旧日光灯已点燃15min，旧白炽灯已点燃5min)，不开无影灯，无自然采光条件下进行

测点距地面0.8m，离墙面0.5m，按间距不超过2m均匀布点，不刻意在灯下或避开灯下选点各点中最小的照度值应符合规定，对大型以上(含大型)手术室，应校核照度均匀度新风量的检测要求新风量的检测应在室外无风或微风条件下进行

通过测定新风口风速或新风管中的风速，换算成新风量，结果应在室内静压达到标准的前提下，不低于规定不得超过

新风的要求新风口进风速度应不大于3m/s新风口应设置在高于地面5m、水平方向距排气口3m以上并在排气口上风侧的无污染源干扰的清净区域

静压差的检测要求在洁净区所有门都关闭的条件下，从平面上最里面的房间依次向外或从空气洁净度级别最高的房间依次向低级别的房间，测出有孔洞相通的相邻两间洁净用房的静压差测定高度距地面0.8m，测孔截面平行于气流方向，测点选在无涡流无回风口的位置检测仪器为读值分辨率可达到1Pa的斜管微压计或其他有同样分辨率的仪表

细菌浓度的检测要求细菌浓度宜在其他项目检测完毕，对全室表面进行常规消毒之后进行表面染菌密度为监测项目，按《医院消毒卫生标准》GB15982的方法检测

当送风口集中布置时，应对手术区和周边区分别检测当送风口分散布置时，全室统一检测细菌采样布点原则参照洁净度布点原则浮游菌采样原则细菌浓度测点数应和被测区域的含尘浓度测点数相同，且宜在同一位置上每次采样应满足规定的最小采样量的要求每次采样时间不应超过30min。浮游菌最小采样量被测区域洁净度级别最小采样量m3(L)100级0.6(600)1000级0.06(60)10000级0.03(30)100000级0.006(6)300000级0.006(6)沉降菌采样原则细菌浓度测点数既要不少于被测区域含尘浓度测点数又应满足规定的最少培养皿(不含对照皿)数的要求。沉降菌采样最少布点数被测区域洁净度级别最少培养皿数(φ90，以沉降30min计)100级131000级510000级3100000级2300000级2洁净手术室沉降菌布点及标准值

(空态或静态)

区域等级洁净度布点数标准（cfu/皿）特别洁净手术室手术区百级≥13点≤0.2周边区千级≥5点≤0.4标准洁净手术室手术区千级≥5点≤0.75周边区万级≥2点≤1.5一般洁净手术室手术区万级≥2点≤2周边区十万级≥2点≤4洁净辅助用房的等级标准

(空态或静态)

等级浮游法细菌最大平均浓度(个/m3)空气洁净度级别Ⅰ

5其他区域10局部100级其他区域1000级Ⅱ5010000级Ⅲ150100000级Ⅳ175300000级空气菌落—浮游菌相关标准： GB50333-2002洁净手术室，空态或静态

洁净手术室浮游菌标准等级手术室名称浮游法细菌最大平均浓度(个/m3)空气洁净度级别手术区周边区手术区周边区Ⅰ特别洁净手术室510100级1000级Ⅱ标准洁净手术室25501000级10000级Ⅲ一般洁净手术室7515010000级100000级Ⅳ准洁净手术室175300000级其他指标采样及检测原则采样时间：消毒处理后，医疗活动前期间采样后尽快检测，送检时间≤6小时，若样品保存0～4℃，送检时间≤24h空气—沉降菌器材：9cm普通营养琼脂平板方法：平板暴露法（沉降法）一般情况：按GB15982-1995医院消毒卫生标准：布点方法：室内面积≤30m2,设内、中、外对角线三点，内外布点距墙壁1m；室内面积＞30m2，设中央及四角5点，四点的布点位置距墙1m，暴露时间5min培养时间：48小时沉降菌计算计算公式：细菌总数（cfu/m3）=50000N/(A×T)A：平板面积（cm2）T：平板暴露时间N：平均菌落数检测限与结果报告检出限：按cfu/皿计，根据公式，计算结果为157，报＜157cfu/m3

对于洁净度要求高的环境，该方法的最低检出限与评价标准不一致采用GB50333的方法测试和报告物体表面-

采样液

对于只清洁、未消毒的表面：无菌生理盐水消毒后的物体表面：根据使用消毒剂选择含相应中和剂的采用液物体表面-

采样方法5cm×5cm标准规格板棉拭采样≥100cm2；门把手等不规则物体表面：直接涂抹采样液之中和剂的选择消毒剂中和剂成分0.5%碘伏0.5%硫代硫酸钠、0.5%吐温80消毒剂2000mg/L有效氯0.5%硫代硫酸钠、0.5%吐温8075%乙醇0.5%卵磷脂、0.5%吐温80季铵盐0.5%卵磷脂、0.5%吐温80洗必泰0.5%卵磷脂、0.5%吐温802%戊二醛1%甘氨酸、0.5%吐温80检测细菌总数：取1ml接种平皿金黄色葡萄菌：1ml接种5mlSCDLP液体培养基，36±1℃培养24h，血平板分离乙型溶血性链球菌：样品1ml接种1%葡萄糖肉汤沙门氏菌：按照GB4789.41ml加入增菌液中检测-工作人员手采样液无菌生理盐水适合只清洁，未用消毒剂的情况含相应中和剂的采样液适用于消毒后采样工作人员手---采样方法被检人员五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子，在双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面积约30cm2）并随之转动采样棉拭，剪去操作者手接触部位，将棉拭投入采样液采样与检测--使用中消毒液采样时间：更换前，使用中的消毒液需要检测微生物污染情况的：采样液中含相应中和剂的营养肉汤，，取1.0ml消毒液加入9.0ml含中和剂的营养肉汤需要测定含量：另取干净、干燥的采样瓶直接取样采样量＞100ml要求采样量满足检测需要内窥镜采样依据：<<内镜清洗消毒技术规范>>方法:

检测部位：内镜的内腔面用无菌注射器抽取10ml含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检口注入，用15ml无菌试管从活检出口收集，及时送检，2小时内检测内窥镜采样液检测菌落计数：充分振荡，取0.5ml接种2个平皿后倾注营养琼脂，35℃培养48h后计数致病菌：0.2ml接种血平板

0.2ml接种中国兰平板

0.2ml接种SS平板涂布35℃培养48h

观察有无致病菌生长污水检测依据：GB18466-2005医疗机构水污染排放标准检测项目余氯的检测：现场用干净空瓶采样，直接用余氯测试盒检测余氯粪大肠菌群沙门氏菌志贺氏菌的检测：采样：污水采样加入含1g硫代硫酸钠的灭菌瓶中，根据GB18466-2005检测医院污水检测依据:GB18466-2005《医疗机构水污染物排放标准》。检测项目及频率:总余氯每日监测不得少于2次；粪大肠菌群每月不得少于1次；肠道致病菌主要监测沙门菌和志贺菌，每季度不得少于1次。结果判定:接触池出口总余氯一级标准为3～10mg/L，二级标准为2～8mg/L；粪大肠菌群数为<500MPN/L；肠道致病菌不得检出。存在问题:管理、杜撰数据、篡改记录、试剂过期失效、报告不规范（检测限）、使用环境有害气体超标、使用消毒药械不符合要求。压力蒸汽灭菌器压力蒸汽灭菌器灭菌效果：嗜热脂肪杆菌芽孢培养温度：56±1℃检测方法：下排气式压力蒸汽灭菌器、预真空和脉动真空灭菌器，生物指示剂置于标准包中心部位，标准包置于排气口上方。手提压力蒸汽灭菌器用通气储物盒代替标准包，盒内盛满中试管，生物指示剂放于中心部位放于中心部位两只灭菌试管内，储物盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部灭菌效果检测依据

及要求GB15981-1995《消毒与灭菌效果的评价方法与标准》《消毒技术规范》（卫生部2002）ws310.3-2009医院消毒供应中心第3部分:清洗消毒及灭菌效果监测标准检测方法：物理法每次灭菌应连续监测并记录灭菌时温度、压力和时间等灭菌参数。温度波动范围在十3℃以内，时间满足最低灭菌的要求，同时应记录所有临界点的时间、温度与压力值，结果应符合灭菌的要求.化学法应进行包内、包外化学指示物监测。生物法每周一次。压力蒸汽灭菌效果监测检测方法：按照《消毒技术规范》的规定，将嗜热脂肪杆菌芽胞菌片制成标准生物测试包或生物PCD，或使用一次性标准生物测试包，对灭菌器的灭菌质量进行生物监测。标准生物监测包置于灭菌器排气口的上方或生产厂家建议的灭茵器内最难灭菌的部位，并设阳性对照和阴性对照。如果一天内进行多次生物监测，且生物指示剂为同一批号，则只设一次阳性对照即可。具体监测方法为将生物指示物置于标准试验包的中心部位。标准试验包由16条41cmX66cm的全棉手术巾制成。制作方法将每条手术巾的长边先折成3层，短边折成2层，然后叠放，制成23cmX23cmX15cm大小的测试包。经一个灭菌周期后，在无菌条件下取出标准试验包的指示菌片，投入澳甲盼紫葡萄糖蛋白陈水培养基中，经56℃士1℃培养7d(自含式生物指示物按产品说明书执行)，观察培养结果。灭菌器环氧乙烷灭菌器灭菌：枯草杆菌黑色变种芽孢生物指示管均匀分布灭菌物品中。36±1℃培养干热灭菌器：枯草杆菌黑色变种芽孢干热灭菌效果监测检测方法与结果判定物理监测法：每灭菌批次应进行物理监测.监测方法为将多点温度检测仪的多个探头分别放于灭菌器各层内、中、外各点，关好柜门，引出导线，由记录仪中观察温度上升与持续时间。温度在设定时间内均达到预置温度，则物理监测合格。干热灭菌效果监测化学监测法：每一灭菌包外应使用包外化学指示物，每一灭菌包内应使用包内化学指示物，并置于最难灭菌的部位。对于未打包的物品，应使用一个或者多个包内化学指示物，放在待灭菌物品附近进行监测。经过一个灭菌周期后取出，据其颜色的改变判断是否达到灭菌要求。干热灭菌效果监测生物监测法：应每周监测一次：按照《消毒技术规范》的规定，采用枯草杆菌黑色变种芽泡菌片，制成标准生物测试包，置于灭菌器最难灭菌的部位，对灭菌器的灭菌质量进行生物监测，并设阳性对照和阴性对照。具体监测方法：将枯草杆菌芽抱菌片分别装入无菌试管内(1片/管)。灭菌器与每层门把手对角线内、外角处放置2个含菌片的试管，试管帽置于试管旁，关好柜门，经一个灭菌周期后，待温度降至80℃时，加盖试管帽后取出试管。在元菌条件下，加入普通营养肉汤培养基C5ml/管)，36℃土1℃培养48h，观察初步结果，无菌生长管继续培养至第7日。结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，若每个指示菌片接种的肉汤管均澄清，判为灭菌合格;若阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，而指示菌片之一接种的肉汤管混浊，判为不合格，对难以判定的肉汤管，取0.1ml接种于营养琼脂平板，用灭菌L棒或接种环涂匀，置36℃士l℃培养48h，观察菌落形态，并做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长，若有指示菌生长，判为灭菌不合格；若无指示菌生长，判为灭菌合格。低温灭菌的监测低温灭菌方法包括环氧乙烷灭菌法、过氧化氢等离子灭菌法和低温甲腔蒸汽灭菌法等。低温灭菌的监测通用要求新安装、移位、大修、灭菌失败、包装材料或被灭菌物品改变，应对灭菌效果进行重新评价，包括采用物理监测法、化学监测法和生物监测法进行监测(重复三次)，监测合格后，灭菌器方可使用。环氧乙烧灭菌的监测物理监测法：每次灭茵应连续监测并记录灭菌时的温度、压力和时间等灭菌参数。灭菌参数符合灭茵器的使用说明或操作手册的要求。化学监测法:每个灭菌物品包外应使用包外化学指示物，作为灭菌过程的标志，每包内最难灭菌位置放置包内化学指示物，通过观察其颜色变化，判定其是否达到灭菌合格要求。生物监测法：每灭菌批次应进行生物监测。环氧乙烧灭菌的监测-生物监测法用枯草杆菌黑色变种芽抱置于常规生物测试包内，对灭菌器的灭菌质量进行监测。常规生物测试包放在灭菌器最难灭菌的部位(整个装载灭菌包的中心部位)。灭菌周期完成后应立即将生物指示物从被灭菌物品中取出，36℃士1℃培养7d（自含式生物指示物应遵循产品说明)，观察培养基颜色变化。同时设阳性对照和阴性对照。常规生物测试包的制备：