标准解读

《GB/T 34738-2017 蜜蜂囊状幼虫病荧光PCR检测方法》是一项国家标准，专门针对蜜蜂中囊状幼虫病的检测制定了详细的荧光定量PCR技术规范。该标准适用于对蜜蜂样本进行囊状幼虫病毒（Chronic bee paralysis virus, CBPV）感染状态的快速准确鉴定。

标准首先定义了适用范围、术语和定义等基本内容，为后续操作提供理论基础。其中明确了“囊状幼虫病”是由特定病毒引起的一种蜜蜂疾病，主要影响幼龄阶段的蜜蜂，并通过直接接触传播给其他个体。

接着，《GB/T 34738-2017》详细描述了实验所需材料与试剂的选择要求，包括但不限于核酸提取试剂盒、反转录酶、Taq DNA聚合酶以及特异性引物探针设计原则等关键组分。这些成分对于确保实验结果准确性至关重要。

在样品处理方面，本标准提供了从采集到保存再到前处理的具体步骤指导，强调了正确采集方法的重要性及如何避免交叉污染等问题。此外还特别指出了不同类型的样品（如活体成年蜜蜂、死亡蜜蜂或疑似受感染区域）应采用相适应的方法来进行处理。

关于PCR反应体系建立，《GB/T 34738-2017》给出了推荐使用的反应条件参数设置建议，比如退火温度、延伸时间长度等，同时也允许根据实验室具体情况适当调整以达到最佳扩增效果。同时，在数据解释部分，则是基于Ct值来判断样本是否含有目标病毒序列，并设定了阳性对照和阴性对照作为质量控制手段之一。


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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2017-11-01 颁布
  • 2018-05-01 实施
©正版授权
GB/T 34738-2017蜜蜂囊状幼虫病荧光PCR检测方法_第1页
GB/T 34738-2017蜜蜂囊状幼虫病荧光PCR检测方法_第2页
GB/T 34738-2017蜜蜂囊状幼虫病荧光PCR检测方法_第3页
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文档简介

ICS11220

B41.

中华人民共和国国家标准

GB/T34738—2017

蜜蜂囊状幼虫病荧光PCR检测方法

Methodofthereal-timePCRforthedetectionofhoneybeessacbrooddisease

2017-11-01发布2018-05-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T34738—2017

前言

本标准按照给出的规则起草

GB/T1.1—2009。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国动物卫生标准化技术委员会归口

(SAC/TC181)。

本标准起草单位中华人民共和国吉林出入境检验检疫局吉林大学中华人民共和国福建出入境

:、、

检验检疫局

。

本标准起草人宋战昀冯新孟日增刘金华魏春艳牟峻王振国郑腾孟庆峰蔡阳肖成蕊

:、、、、、、、、、、、

王伟利

。

Ⅰ

GB/T34738—2017

蜜蜂囊状幼虫病荧光PCR检测方法

1范围

本标准规定了蜜蜂囊状幼虫病荧光检测方法

PCR。

本标准适用于蜜蜂及其幼虫中囊状幼虫病的检测

。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文

。,

件凡是不注日期的引用文件其最新版本包括所有的修改单适用于本文件

。,()。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

出入境动物检疫采样

GB/T18088

3试剂和材料

除非另有规定仅使用分析纯试剂所有试剂均用无酶污染的容器用焦碳酸二乙酯水处理

,。RNA(

后高压灭菌分装

)。

31水三级

.,GB/T6682,。

32蜜蜂囊状幼虫病毒

.。

33引物和探针上游引物下游引物

.,F1(10pmol/μL):5’-AAGTTGGAGGCGCGYATTTG-3’,

探针

R1(10pmol/μL):5’-CAAATGTCTTCTTACDAGAAGYAAGGATTG-3’,P1(5pmol/μL):

5’-FAM-CGGAGTGGAAAGAT-TAMRA-3’。

34磷酸盐缓冲盐水配制方法见

.,A.1。

35总抽提试剂

.RNA。

36氯仿

.。

37异丙醇

.。

38乙醇

.75%。

注用新开启的无水乙醇和焦碳酸二乙酯水配制

:。

39焦碳酸二乙酯处理的水

.。

310反转录酶

.。

311酶抑制剂

.RNA(40U/μL)。

312反转录酶缓冲液

.5×。

313反应缓冲液含镁离子

.10×PCR()。

314聚合酶

.DNA(5U/μL)。

315三磷酸脱氧核糖核苷酸每种浓度均为

.(dNPTs

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