酱腌菜检测作业指导书

酱腌菜检测作业指导书(总64页)--本页仅作为文档封面，使用时请直接删除即可------1-酱腌菜检测作业指导书酱腌菜检测作业指导书酱腌菜检测作业指导书TOC\o“1-1“\h\z\uHYPERLINK\l“_TOC_250010“第一章水分的测定 1HYPERLINK\l“_TOC_250009“其次章食盐的测定… 5HYPERLINK\l“_TOC_250008“第三章总酸的测定… 8HYPERLINK\l“_TOC_250007“第四章复原糖和总糖的测定… 9HYPERLINK\l“_TOC_250006“第五章二氧化硫残留的检测… 11HYPERLINK\l“_TOC_250005“第六章亚硝酸盐和硝酸盐的测定… 12HYPERLINK\l“_TOC_250004“第七章总砷的测定… 16HYPERLINK\l“_TOC_250003“第八章铅的测定… 18HYPERLINK\l“_TOC_250002“第九章大肠菌群的检测… 20HYPERLINK\l“_TOC_250001“第十章菌落总数的测定… 25HYPERLINK\l“_TOC_250000“第十一章沙门氏菌检验… 29-2-第一章水分的测定执行标准：GB5009.3—2023第一法直接枯燥法原理利用食品中水分的物理性质，在101.3kPa〔一个大气压〕，温度101℃～该条件下能挥发的物质，再通过枯燥前后的称量数值计算出水分的含量。试剂和材料除非另有规定，本方法中所用试剂均为分析纯。〔优级纯〕、氢氧化钠〔NaOH〕〔优级纯〕〔6mol/L〕100mL〕、氢氧化钠溶液〔6mol/L〕〔24g100mL〕〔取用水洗去泥土的海砂或河砂0.5h0.5h，用水洗至105℃枯燥备用〕仪器和设备〔内附有效枯燥剂〕、天平〔感量为0.1mg〕分析步骤101℃～105℃枯燥箱1.0h0.5h，称量，并2mg，即为恒重。将混合均匀的试样快速磨2mm2g～10g试样〔准确至0.0001g〕，放入此称量瓶中，试样厚度不超过5mm，如为疏松试样，厚度不10mm101℃～1052h～4h0.5h后称量。然后再放入1h0.5h2mg，即为恒重。〔注：两次恒重值在最终计算中，取最终一次的称量值。〕10g海砂及一根小玻棒，置于1.0h0.5h后称量，5g～10g试样〔0.0001g〕，置于蒸发皿中，用小玻棒搅匀放在沸水浴上蒸干，并随时搅拌，擦去皿底的水滴，置4h0.5h后称量。自“101℃～1051h左右“起依法操作。5分析结果的表述试样中的水分的含量按式〔1〕进展计算。式中：X——试样中水分的含量，单位为克每百克〔g/100g)；-3-m1——称量瓶(加海砂、玻棒)和试样的质量，单位为克〔g〕；(加海砂、玻棒)和试样枯燥后的质量，单位为克〔g〕；m3——称量瓶(加海砂、玻棒)的质量，单位为克〔g〕。水分含量≥1g/100g时，计算结果保存三位有效数字；水分含量＜1g/100g时，结果保存两位有效数字。周密度5%。其次法 减压枯燥法原理40kPa～53kPa压力后加热至60℃±水分的含量。仪器和设备真空枯燥箱、扁形铝制或玻璃制称量瓶、枯燥器〔内附有效枯燥剂〕、天平〔感量为0.1mg〕分析步骤用。2g～10g〔0.0001g〕试样，放入真〔所需压力一40kPa53kPa)60℃±5℃。关闭真空泵上的活塞，停顿抽气，使真空枯燥箱内保持肯定的温度和压力，经4h后，翻开活塞，-4-使空气经枯燥装置缓缓通入至真空枯燥箱内，待压力恢复正常后再翻开。取出2mg，即为恒重。分析结果的表述5。周密度10%。第三法 蒸馏法原理用于含较多其他挥发性物质的食品，如油脂、香辛料等。试剂和材料〔化学纯〕：取甲苯或二甲苯，先以水饱和后，分去水层，进展蒸馏，收集馏出液备用。仪器和设备〕5mL，最小0.1mL，0.1mL。-5-1.250mL蒸馏瓶； 2.水分接收管，有刻度；3.冷凝管。图1水分测定器0.1mg。分析步骤2mL～5mL，但最多取样量不得mL)75mL，连接冷凝管与水分接收管，从冷凝管顶端注入甲苯，装满水分接收管。加热渐渐蒸馏，使每秒钟的馏出液为两滴，待大局部水分蒸出后，加速蒸馏约每4端参加甲苯冲洗。如冷凝管壁附有水滴，可用附有小橡皮头的铜丝擦下，再蒸馏片刻至接收管上部及冷凝管壁无水滴附着，接收管水平面保持10min不变为蒸馏终点，读取接收管水层的容积。分析结果的表述试样中水分的含量按式〔2〕进展计算。式中：〔mL/100g〕〔20℃0.998，20g/mLV——接收管内水的体积，单位为毫升〔mL〕；-5-m——试样的质量，单位为克〔g〕。位有效数字。周密度10%。第四法 卡尔•费休法原理1mol1molC5H5N•2I+C5H5N•SO2+C5H5N+H2O+CH3OH2C5H5N•HI+C5H6N[SO4CH3]卡尔•-6-1:1的含量。试剂和材料卡尔•费休试剂、无水甲醇〔CH 4O〕：优级纯卡尔•费休水分测定仪、天平〔感量为0.1mg〕、分析步骤卡尔•费休试剂的标定〔容量法〕在反响瓶中加肯定体积〔浸没铂电极〕的甲醇，在搅拌下用卡尔•费休试剂10mg〔0.0001g)，滴定至终点并记录卡尔•费休试剂的用量〔V〕。卡尔•费休试剂的滴定度按式〔3〕计算：式中：T——卡尔·费休试剂的滴定度，单位为毫克每毫升〔mg/mL〕；M——水的质量，单位为毫克〔mg〕；V——滴定水消耗的卡尔·费休试剂的用量，单位为毫升〔mL〕。试样前处理可粉碎的固体试样要尽量粉碎，使之均匀。不易粉碎的试样可切碎。试样中水分的测定于反响瓶中加肯定体积的甲醇或卡尔·费休测定仪中规定的溶剂浸没铂电极，在搅拌下用卡尔·费休试剂滴定至终点。快速将易溶于上述溶剂的试样直接参加滴定杯中；对于不易溶解的试样，应承受对滴定杯进展加热或参加已测定水分的其他溶剂关心溶解后用卡尔•费休试剂滴定至终点。建议承受库仑法测10g，容量法应大于100g。对于某些需要较长时间滴定的试样，需要扣除其漂移量。漂移量的测定-6-在滴定杯中参加与测定样品全都的溶剂，并滴定至终点，放置不少于10min〔D〕。分析结果的表述固体试样中水分的含量按式〔4〕，液体试样中水分的含量按式〔5〕进展计算。式中：X——试样中水分的含量，单位为克每百克〔g/100g〕；V1——滴定样品时卡尔•费休试剂体积，单位为毫升〔mL〕；T——卡尔•费休试剂的滴定度，单位为克每毫升〔g/mL〕；M——样品质量，单位为克〔g〕；V2——液体样品体积，单位为毫升〔mL〕；D——漂移量，单位为毫升每分钟〔mL/min〕；〔min〕；——液体样品的密度，单位为克每毫升〔g/mL)。-7-<1g/100g时，计算结果保存两位有效数字。周密度10%。-7-其次章食盐的测定执行标准：GB12457-2023食品中氯化钠的测定-8--9-补充：SB/T10213—1994酱腌菜理化检验方法试剂硝酸银标准溶液〔C(AgNO3)=0.1000mol/lGB601100ml。样品处理5.000g～10.000g，250ml100ml200ml，然后用滤纸过滤，此滤液为样品稀释液，供测定用。测定50ml，100g/l酸钾指示剂0.5ml，用0.1000mol/l硝酸银标准溶液滴定至刚显砖红色即为终V。计算〕含量，g/100mlC——硝酸银标准溶液实际浓度，mol/l；V——样品耗用硝酸银标准溶液的体积，ml；V0——空白耗用硝酸银标准溶液的体积，ml；C(AgNO3)=1.000mol/l〕相当的氯化钠的重量，g；W——样品质量，g；-10--11--11-ml。允许误差：0.20g/100g第三章总酸的测定原理豆制品中含有多种有机酸，用氢氧化钠标准溶液滴定，以乳酸计算。试剂氢氧化钠标准溶液〔C=0.050mol/L〕、酚酞指示液〔称取0.50g酚酞用乙醇50ml〕仪器磁力搅拌器、酸度计分析步骤试样处理150ml100ml纸或脱脂棉过滤，滤液备用。酸度计法150ml80mlpH8.290.0ml100.0ml空白试验。酚酞指示液滴定法150ml50ml，33指示液，用氢氧化钠标准溶液滴定至初现粉红色，0.5min结果计算见式〔1〕.式中：X——试样中的酸度〔以乳酸计〕，单位为克每百克〔g/100g〕；〔ml〕；试剂空白消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积，单位为毫升〔ml〕；V3——滴定用试样溶液的体积，单位为毫升〔ml〕；C——氢氧化钠标准溶液实际浓度看，单位为摩尔每升〔mol/ml〕；0.09——与1.00ml氢氧化钠标准滴定溶液(C=1.000mol/l)相当的乳酸的质量，单位为克〔g〕〔g〕。计算结果保存两位有效数字。周密度5.-12-第四章复原糖和总糖的测定执行SB/T10213—1994酱腌菜理化检验方法一、复原糖的测定试剂0.05g1000ml50g，54g4g1000ml葡萄糖标准溶液：1g/l100℃烘箱中烘至恒重的无水葡萄糖1000ml水反复冲洗烧杯，洗液一并倒入容量瓶，加浓盐酸5ml，用蒸馏水稀释至刻度。样品处理5.000g～10.000g，250ml100ml200ml，然后用滤纸过滤，此滤液为样品稀释液，供测定用。操作空白滴定5.00ml150ml10ml〔15min2min30s3s～4s〔空白滴定，预备滴1g/l-12-0.5ml～1mlA。预备滴定5.00ml150ml10ml1.00ml，依据样品含糖量的凹凸〔估量数〕，用糖滴管参加不定量的30s3s～4s1g/l葡萄糖标准液，至蓝紫色消逝即为终点。记录沸腾前后共耗用标准糖液的毫升数。正式滴定5.00ml150ml10ml0.5ml1g/l30s3s～4s1g/lB。计算式中：X5——样品中复原糖的含量，g/100g；，ml；，ml；1g/l葡萄糖标准液的含糖量；W——所用稀释液相当样品重量，g。-13-允许误差：0.05g/100ml。-14-二、全糖的测定试剂斐林溶液甲液：称取69.3g硫酸铜，加蒸馏水溶解配成1000ml。斐林溶液乙液：称取346g酒石酸钾钠和100g氢氧化钠，加蒸馏水溶解，配成1000ml。1％次甲基蓝指示剂、200g/l100g/l6mol/l2g/l[〔20％V/V〕乙醇溶液配制]斐林氏溶液的标定：在分析天平上准确称取经烘干冷却的分析纯葡萄糖250ml用。2.5ml，150ml20ml，置电炉上加热至沸，用配好的葡萄糖溶液滴定至溶液变红时，参加次甲12min，1滴，连续用葡萄糖溶液滴定至终点。按下式计算其浓度：W——葡萄糖的重量，g；V——滴定时消耗葡萄糖溶液的体积，ml。操作样品切碎混合，准确称取3.000～4.000g样品，置于乳钵中参加少量蒸馏200g/ml15ml～-13-15ml～20ml100g/l溶液。至不再产生沉淀为止，加水至刻度，摇匀，过滤。6ml/l10ml70℃1℃水10min，2g/l1200g/l100ml品中总糖。计算X6——样品中全糖的含量〔以葡萄糖计〕，g/100g；W——样品重量，g；V——滴定时消耗样品溶液的量，ml；允许误差：0.5g/100ml.留意事项检验方法中，所用试剂除特别注明者外均为分析纯。允许误差，取其平均值作为分析结果。-14-第五章二氧化硫残留的检测GB/T5009.34—2023其次法 蒸馏法原理糖浆、果脯。试剂盐酸〔1:1〕：浓盐酸用水稀释1倍。乙酸铅溶液〔20g/l〕：2g100ml。[C(1/2I2)=0.010mol/l]:将碘标准溶液〔0.100mol/l〕用水稀10淀粉指示液〔10g/l〕:1g100ml沸水中，随加随搅拌，煮沸2min，放冷，备用，此溶液应临用时配。仪器全玻璃蒸馏器、碘量瓶、酸式滴定管分析步骤试样处理固体试样用刀切或剪刀剪成碎末后混匀，称取约5.00g均匀试样〔试样量5.0ml10.0ml500ml底蒸馏烧瓶中。-14-测定蒸馏：将称好的试样置入圆底蒸馏烧瓶中，参加250ml水，装上冷凝管，25ml〔20g/l〕吸取液中，然后在蒸馏瓶10ml〔1:1〕，200ml。在检测试样的同时要做空白试验。滴定：向取下的碘量瓶中依次参加10ml浓盐酸、1ml淀粉指示液〔0.010mol/l〕30s不退色为止。计算试样中的二氧化硫总含量按下式进展计算。式中：X——试样中的二氧化硫总含量，单位为克每千克〔g/kg〕；滴定试样所用碘标准滴定溶液〔0.010mol/l〕的体积，单位为毫升〔ml〕；滴定试剂空白所用碘标准滴定溶液〔0.010mol/l〕的体积，单位为毫升〔ml〕；m——试样质量，单位为克〔g〕-15---15-[C(1/2I2)=1.0mol/l]相当的二氧化硫的质量，单位为克〔g〕。第六章亚硝酸盐和硝酸盐的测定GB5009.33—2023食品安全国家标准食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定分光光度法原理亚硝酸盐承受盐酸萘乙二胺法测定，硝酸盐承受镉柱复原法测定。含量，即得试样中硝酸盐含量。试剂和材料除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。水为GB/T6682规定的二级水或去离子水。亚铁氰化钾〔K4Fe(CN)6·3H2O〕。乙酸锌〔Zn(CH3COO)2·2H2O〕。冰醋酸〔CH3COOH〕。硼酸钠〔Na2B4O7·10H2O〕。2.5盐酸〔ρ＝1.19g/mL〕。2.6氨水〔25%〕。对氨基苯磺酸(C6H7NO3S〕。盐酸萘乙二胺(C12H14N2·2HCl〕。亚硝酸钠〔NaNO2〕。硝酸钠〔NaNO3〕。-17--17-锌皮或锌棒。硫酸镉。106.0g亚铁氰化钾〔2.1〕，用水溶1000mL。乙酸锌溶液(220g/L220.0g〔2.2〕，先加30mL冰醋酸1000mL。5.0g〔2.4〕，100mL热水中，冷却后备用。2.16〔pH9.6～9.7〕：30mL〔2.5〕，100mL水，混1000mL，pH9.6～9.7。〔2.16〕，加水稀释至500mL，混匀。盐酸(0.1mol/L5mL600mL。0.4ｇ对氨基苯磺酸〔2.7〕，100mL20%〔V/V〕盐酸中，置棕色瓶中混匀，避光保存。盐酸萘乙二胺溶液〔2g/L〕：0.2g盐酸萘乙二胺〔2.8〕，溶于100mL水中, 混匀后，置棕色瓶中，避光保存。2.21亚硝酸钠标准溶液〔200μg/mL〕：准确称取0.1000ｇ于110℃～120℃枯燥500mL亚硝酸钠标准使用液〔5.0μg/mL〕：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液200mL硝酸钠标准溶液〔200μg/mL，以亚硝酸钠计〕：0.1232g500mL容量瓶中，并稀释至刻度。硝酸钠标准使用液〔5μg/mL〕：临用时吸取硝酸钠标准溶液2.50mL，置100mL仪器和设备天平〔0.1mg1mg〕、组织捣碎机、超声波清洗器、恒温枯燥箱、分光光度计镉柱海绵状镉的制备：投入足够的锌皮或锌棒于500mL 硫酸镉溶液中，经过3h～4h，当其中的镉全部被锌置换后，用玻璃棒轻轻刮下，取出剩余锌棒，使镉沉底，倾去上层清液，以水用倾泻法屡次洗涤，然后移入碎约2s，用水将金属细粒洗至标准筛上，取20～40目之间的局部。镉柱的装填：如图2。用水装满镉柱玻璃管，并装入2cm高的玻璃棉做垫，将玻璃棉压向柱底时，应将其中所包含的空气全部排出，在轻小扣击8cm～10cm1cm斗，末端要穿过橡皮塞与镉柱玻璃管严密连接。如无上述镉柱玻璃管时，可以25mL，镉柱不用时用水封盖，随时都要保持水平面在镉层之上，不得使镉层夹有气泡。-18-〔0.1mol/L〕洗涤，再以25mL，最终用水掩盖镉柱。镉柱复原效率的测定：吸取20mL硝酸钠标准使用液，参加5mL氨缓冲液的稀释液，混匀后注入贮液漏斗，使流经镉柱复原，以原烧杯收集流出5mL10.0mL复原后的溶液〔10μg〕50mL4.40.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL……”起依法操作，依据标准曲线计算测得结果，与参加量全都，复原效率应大于98%为符合要求。复原效率计算复原效率按式〔2〕进展计算。式中：X——复原效率，%；A——测得亚硝酸钠的含量，单位为微克〔μg〕；10——测定用溶液相当亚硝酸钠的含量，单位为微克〔μg〕。分析步骤试样的预处理加水量。提取-18-〔如制备过程中加水，应按加水量折算〕，50mL12.5mL〔2.15〕，搅拌均匀，以70℃左右的水约300mL将试样洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出置冷水浴中冷却，并放置至室温。提取液净化在振荡上述提取液时参加5mL亚铁氰化钾溶液〔2.13〕,摇匀,再参加5mL30min,除去上层30mL,滤液备用。亚硝酸盐的测定40.0mL50mL0.00mL、0.20mL、、0.60mL、0.80mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL用液〔相当于0.0μｇ、1.0μｇ、2.0μｇ、3.0μｇ、4.0μｇ、5.0μｇ、7.5μｇ、10.0μｇ、12.5μｇ亚硝酸钠〕，分别置50mL带塞比色管中。于标准管与〔2.19〕，3min～5min(2.20)，15min2cm538nm时做试剂空白。硝酸盐的测定镉柱复原3mL/min～2mL/min～3mL/min〕。-19-5mL〔2.16〕，混合后注5mL将全部收集液如前再经镉柱复原一次，其次次流出液收集于100mL容20mL，洗液一并收集于同一容量瓶中，加水至刻度，混匀。亚硝酸钠总量的测定10mL～20mL复原后的样液于50mL11.40.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL……”起依法操作。分析结果的表述亚硝酸盐含量计算亚硝酸盐〔以亚硝酸钠计〕的含量按式〔3〕进展计算。式中：试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克〔mg/kg〕；A1——测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为微克〔μg〕；m——试样质量，单位为克〔ｇ〕；V1——测定用样液体积，单位为毫升〔mL〕；V0〔mL〕。位有效数字。硝酸盐含量的计算-19-硝酸盐〔以硝酸钠计〕的含量按式〔4〕进展计算。式中：X2——试样中硝酸钠的含量，单位为毫克每千克〔mg/kg〕；A2——经镉粉复原后测得总亚硝酸钠的质量，单位为微克〔μg〕；m——试样的质量，单位为克〔g〕；1.232——亚硝酸钠换算成硝酸钠的系数；V2——测总亚硝酸钠的测定用样液体积，单位为毫升〔mL〕；V0——试样处理液总体积，单位为毫升〔mL〕；V3——经镉柱复原后样液总体积，单位为毫升〔mL〕；V4——经镉柱复原后样液的测定用体积，单位为毫升〔mL〕；X1——由式〔3〕计算出的试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克〔mg/kg〕。-20---20-位有效数字。周密度10%。第七章总砷的测定执行标准：GB/T5009.11—2023-22---23-第八章铅的测定GB5009.12—2023其次法 氢化物原子荧光光谱法原理试样经酸热消化后，在酸性介质中，试样中的铅与硼氢化钠(NaBH4)或硼氢化钾(KBH4)反响生成挥发性铅的氢化物(PbH4)。以氩气为载气，将氢化物导入电热石英原子化器中原子化，在特制铅空心阴极灯照耀下，基态铅原子被激发至高能态；在去活化回到基态时，放射出特征波长的荧光，其荧光强度与铅含量成正比，依据标准系列进展定量。试剂和材料硝酸+高氯酸混合酸(9+1)：900mL100mL，混匀。盐酸(1+1)：250mL盐酸倒入250mL水中，混匀。草酸溶液(10g/L1.0g100mL，混匀。(100g/L)：10.0g铁氰化钾，加水溶解并100mL，混匀。氢氧化钠溶液(2g/L2.0g1L水中，混匀。5.0g500mL氢氧化钠溶液(2g/L)中，混匀，临用前配制。铅标准储藏液(1.0mg/mL)。铅标准使用液(1.0μg/mL)：准确吸取铅标准储藏液(10.7)，逐级稀释至1.0μg/mL。仪器和设备原子荧光光度计、铅空心阴极灯、电热板、天平〔感量为1mg〕分析步骤试样消化2.00g〔mL〕～10.00g〔或mL〕〔0.001g〕，50mL～100mL〔锥形瓶〕，然后参加硝酸+高氯酸混合酸〔2.1〕5mL～10mL20mL0.5mL～1.0mL25mL〔2.2〕0.5mL，草酸溶液〔2.3〕0.5mL，摇匀，再参加铁氰化钾溶液〔2.4〕1.0mL，用水准确稀25mL，30min后测定。同时做试剂空白。标准系列制备25mL〔2.8〕0.00mL、0.125mL、0.25mL、0.50mL、0.75mL、1.00mL、1.25mL(0.0ng/mL、、10.0ng/mL、20.0ng/mL、30.0ng/mL、40.0ng/mL、50.0ng/mL)，用〔2.2〕0.5mL〔2.3〕摇匀，再参加铁氰化钾溶液〔2.4〕1.0mL，30min后待测。测定仪器参考条件负高压：323V；铅空心阴极灯灯电流：75mA；原子化器：炉温750℃～800℃，8mm；氩气流速：载气800mL/min；屏蔽气：1000mL/min；加复原剂时读数时间：15.0s；延迟时间：0.0s；测量方式：标准曲线法；读数方式：峰面积；进样体积：2.0mL。测量方式10min～20min开头测量：连续用标准系列的零管进样，待读数稳定之后，转入标准系列的测〔2〕进展计算。试中：X——试样中铅含量, 或mg/L〕；c1——试样消化液测定浓度，单位为纳克每毫升〔ng/mL〕；c0——试剂空白液测定浓度，单位为纳克每毫升〔ng/mL〕；V——试样消化液定量总体积，单位为毫升〔mL〕；m——试样质量或体积，单位为克或毫升〔g或mL〕。位有效数字。周密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果确实定差值不得超过算术平均值10%。-24-第九章大肠菌群的检测食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数1 设备和材料除微生物试验室常规灭菌及培育设备外，其他设备和材料如下：恒温培育箱〔36℃±1℃〕、冰箱〔2℃～5℃〕、恒温水浴箱〔46±1℃〕、天平〔感量0.1g〕、均质器、振荡器、无菌吸管[1mL〔具0.01mL刻度〕、10mL〔具0.1mL刻度〕或微量移液器及吸头]、无菌锥形瓶〔容量直径90mm〕、pH计或pH比色管或周密pH试纸、菌落计数器培育基和试剂月桂基硫酸盐胰蛋白胨〔LaurylSulfateTryptose，LST〕肉汤：见附录A中A.1。煌绿乳糖胆盐〔BrilliantGreenLactoseBile，BGLB〕肉汤：见附录A中A.2。RedBileAgar，VRBA〕：见附录A中A.3。磷酸盐缓冲液：见附录A中A.4。无菌生理盐水：见附录A中A.5。无菌1mol/LNaOH：见附录A中A.6。无菌1mol/LHCl：见附录A中A.7。第一法 大肠菌群MPN计数法-25-检验程序大肠菌群MPN计数的检验程序见图1。-26-图1大肠菌群MPN计数法检验程序操作步骤样品的稀释25g225mL液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min～10000r/min1min～2min,225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质1min～2min，制成1:10的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲〔瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠〕中，充分混1:10的样品匀液。样品匀液的pH6.5～7.51mol/LNaOH1mol/LHCl调整。1:101mL，沿管壁9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中〔留意吸管或吸头尖端11mL1:100的样品匀液。依据对样品污染状况的估量，按上述操作，依次制成十倍递增系列11mL品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。初发酵试验每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液〔液体样品可以选择原〔LST〕1mL-26-〔1mLLST肉汤〕，36℃±124h±2h，观察倒管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进展复发酵试验，如未产气则连续48h±2h，产气者进展复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。复发酵试验LST1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤〔BGLB〕管中，36℃±148h±2h，观看产气状况。产气者，计为大肠菌群阳性管。大肠菌群最可能数〔MPN〕的报告按6.3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表〔见附录B〕，报告每gMPN值。其次法 大肠菌群平板计数法检验程序2。-27---27-8操作步骤8.1样品的稀释8.26.1进展。平板计数2大肠菌群平板计数法检验程序,2个无菌平1mL1mL生理盐水参加无菌平皿作空白比照。准时将15mL～20mL冷至46℃的结晶紫中性红胆盐琼脂〔VRBA〕约倾注于每个平皿中。留神旋转平皿，将培育基与样液充分混匀，待琼脂凝固3mL～4mLVRBA36℃±1℃培育18h～24h。平板菌落数的选择选取菌落数在之间的平板，分别计数平板上消灭的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落四周有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为0.5mm或更大。证明试验从平板上挑取BGLB肉汤管内，36℃±1℃培育24h～48h，观看产气状况。凡BGLB肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性。大肠菌群平板计数的报告-28--28-经最终证明为大肠菌群阳性的试管比例乘以8.3中计数的平板菌落数，再g〔mL〕样品中大肠菌群数。例：10-4样品稀释液1VRBA10010BGLB肉汤6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g〔mL〕=6.0×105CFU/g〔mL〕。A〕培育基和试剂月桂基硫酸盐胰蛋白胨〔LST〕肉汤成分胰蛋白胨或胰酪胨20.0g氯化钠5.0g乳糖5.0g磷酸氢二钾〔K2HPO4〕2.75g磷酸二氢钾〔KH2PO4〕2.75g月桂基硫酸钠0.1g蒸馏水pH6.8±0.2A.1.2制法1000mLpH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每10mL。121℃高压灭菌15min。煌绿乳糖胆盐〔BGLB〕肉汤成分蛋白胨 10.0g乳糖 10.0g牛胆粉〔oxgall或oxbile〕溶液 200mL0.1%煌绿水溶液 13.3mL蒸馏水 800mLpH7.2±0.1制法500mL200mL〔将pH7.0～7.5〕，用蒸馏水稀975mL，pH，0.1%13.3mL，用蒸馏水补足到1mL10mL。121℃15min。结晶紫中性红胆盐琼脂〔VRBA〕成分蛋白胨7.0g酵母膏3.0g乳糖10.0g氯化钠5.0g31.5g-29--29-中性红0.03g结晶紫0.002g琼脂15g～18g蒸馏水 1000mLpH7.4±0.1制法将上述成分溶于蒸馏水中，静置几分钟，充分搅拌，调整pH。煮沸23h。磷酸盐缓冲液成分磷酸二氢钾〔KH2PO4〕 34.0g蒸馏水 500mLpH7.2制法34.0g500mL175mL1mol/LpH，1000mL1000mL，分装于适宜容器12115min。无菌生理盐水成分氯化钠 8.5g蒸馏水 1 000mL制法8.5ｇ1000mL，12115min。1mol/LNaOH成分NaOH 40.0g蒸馏水 1000mL制法40g1000mL，121℃高压灭菌15min。1mol/LHCl成分HCl 90mL蒸馏水 1000mL制法1000mL，12115min。B〔标准性附录〕大肠菌群最可能数〔MPN〕检索表B.1大肠菌群最可能数〔MPN〕检索表g〔mL〕检样中大肠菌群最可能数〔MPN〕B.1。B.1大肠菌群最可能数〔MPN〕检索表-29-第十章菌落总数的测定食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定设备和材料除微生物试验室常规灭菌及培育设备外，其他设备和材料如下：恒温培育箱〔36℃±1℃，30℃±1℃〕、冰箱〔2℃～5℃〕、恒温水浴箱〔46±1℃〕、天平〔感量为0.1g〕、均质器、振荡器、无菌吸管[1mL〔具0.01mL刻度〕、10mL〔具0.1mL刻度〕或微量移液器及吸头]、无菌锥形瓶〔容量250mL、500mL〕、无菌培育皿〔直径90mm〕、pHpH比色管或周密pH试纸、放大镜或/和菌落计数器培育基和试剂平板计数琼脂培育基：见附录A中A.1。磷酸盐缓冲液：见附录A中A.2。无菌生理盐水：见附录A中A.3。检验程序1。-30---31-图1菌落总数的检验程序操作步骤样品的稀释固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液〔瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠〕中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:101mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中〔留意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面〕，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。按6.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用11mL无菌吸管或吸头。依据对样品污染状况的估量，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液〔液体样品可包括原液〕，在进展10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1mL空白稀释液参加两个无菌平皿内作空白比照。准时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培育基〔可放置于46±1℃℃恒温水浴箱中保温〕倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。培育待琼脂凝固后，将平板翻转，36±148h±2h。水产品30±1℃℃培育72h±3h。的琼脂外表掩盖一薄层琼脂培育基〔约4mL〕，凝固后翻转平板，按6.2.1条件进展培育。菌落计数量。菌落计数以菌落形成单位〔colony-formingunits，CFU〕表示。选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无集中菌落生长的平板计数菌落总数。低于的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不行计。每个稀释度的菌落数应承受两个平板的平均数。生长的平板作为该稀释度的菌落数；假设片状菌落不到平板的一半，而其余一半2，代表一个平板菌落数。当平板上消灭菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。结果与报告菌落总数的计算方法落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g〔mL〕样品中菌落总数结果。假设有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式〔1〕计算：式中：N——样品中菌落数；〔含适宜范围菌落数的平板〕菌落数之和；n1——第一稀释度〔低稀释倍数〕平板个数；n2——其次稀释度〔高稀释倍数〕平板个数；d——稀释因子〔第一稀释度〕。300CFU，则对稀释度最高的平板进展计数，其他平板可记录为多不行计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。-32--33--33-30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。假设全部稀释度〔包括液体样品原液〕平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。CFU～300CFU30CFU300CFU乘以稀释倍数计算。菌落总数的报告菌落数小于100CFU菌落数大于或等于100CFU时，第3后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，承受两位有效数字。假设全部平板上为集中菌落而无法计数，则报告菌落集中。假设空白比照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。A〕培育基和试剂平板计数琼脂〔platecountagar，PCA〕培育基成分胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g琼脂 15.0g蒸馏水 1000mLpH7.0±0.2制法将上述成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调整pH。分装试管或锥形瓶，12115min。A.2磷酸盐缓冲液A.2.1成分磷酸二氢钾〔KH2PO4〕34.0g蒸馏水pH7.2500mLA.2.2制法34.0g500mL175mL1mol/LpH，1000mL-34--34-1000mL，分装于适宜容器12115min。磷酸盐缓冲液成分磷酸二氢钾〔KH2PO4〕 34.0g蒸馏水 500mLpH7.2制法34.0g500mL175mL1mol/LpH，1000mL1000mL，分装于适宜容器12115min。无菌生理盐水成分氯化钠 8.5g蒸馏水 1000mL制法8.5ｇ1000mL，12115min。第十一章沙门氏菌检验食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验设备和材料除微生物试验室常规灭菌及培育设备外，其他设备和材料如下：冰箱〔2℃～5℃、恒温培育箱〔36℃±1℃，42℃±1℃〕、均质器、振荡器、电子天平〔感量0.1g〕、无菌锥形瓶〔容量500mL，250mL〕、无菌吸管[1mL〔具0.01mL刻度〕、10mL〔具0.1mL刻度〕或微量移液器及吸头]、无菌培育皿〔直径90mm〕、无菌试管〔3mm×50mm、10mm×75mm〕、无菌毛细管、pH计或pH比色管或周密pH试纸、全自动微生物生化鉴定系统培育基和试剂附录A中A.1]、四硫磺酸钠煌绿〔TTB〕增菌液[见附录A中A.2]、 亚硒酸盐胱氨酸〔SC〕增菌液[见附录A中A.3]、亚硫酸铋琼脂[见附录A中A.4]、HE琼脂[见附录A中A.5]、木糖赖氨酸脱氧〔XLD〕琼脂[见附录A中A.6]、沙门氏菌属显色培育基、三糖铁〔TSI〕见附录中、蛋白胨水、靛基质试剂[见附录A中A.8]、尿素琼脂7.2〕[见附录A中A.9]、氰化钾〔KCN〕培育基[见附录A中A.10]、赖氨酸脱羧酶试验培育基[见附录A中A.11]、糖发酵管[见附录A中A.12]、邻硝基酚β-D半乳糖苷〔ONPG〕培育基[见附录A中A.13]、半固体琼脂[见附录A中A.14]、丙二酸钠培育基[见附录A中A.15]、沙门氏菌O和H诊断血清、生化鉴定试剂盒。检验程序-35-操作步骤前增菌称取25g〔mL〕样品放入盛有225mLBPW的无菌均质杯中，以8000000r/min1min～2min，或置于盛有225mLBPW的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。假设样品为液态，不需要均质，振荡混匀。如需测定pH值，用1mol/mL无菌NaOH或HCl调pH至6.8±0.2。无菌操作将样品转至500mL锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进展培育，于36℃±18h～18h。如为冷冻产品,应在45℃以下不超过15min,或2℃～5℃不超过18h解冻。增菌轻轻摇动培育过的样品混合物，移取1mL10mLTTB内，于42℃±1℃培育18h～24h1mL10mLSC36℃±118h～24h。分别分别用接种环取增菌液1环，划线接种于一个BS琼脂平板和一个XLD琼脂平板〔或HE琼脂平板或沙门氏菌属显色培育基平板〕36℃±1℃分别培育18h～24h〔XLD琼脂平板、HE琼脂平板、沙门氏菌属显色培育基平板〕或40h～48h〔BS琼脂平板〕，观看各个平板上生长的菌落,各个平板上的菌落特征见表1。-35-生化试验自选择性琼脂平板上分别挑取2个以上典型或可疑菌落，接种三糖铁,直接接种赖氨酸脱羧酶试验培育基和养分琼脂平板，于36℃±1℃培育18h～24h，必要时可延长至48h。在三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培育基内，沙门氏菌属的反响结果见表2。-36-接种三糖铁琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培育基的同时,可直接接种蛋白胨水〔供做靛基质试验〕、尿素琼脂〔pH7.2〕、氰化钾〔KCN〕培育基，也可在初步推断结果后从养分琼脂平板上挑取可疑菌落接种。于36℃±1℃培育18h～24h，必要时可延长至48h，按表3判定结果。将已挑菌落的平板储存于2℃～5℃或室温至少保存24h，以备必要时复查。反响序号A1：典型反响判定为沙门氏菌属。如尿素、KCN和赖氨酸脱羧酶项中有项特别，按表42项特别为非沙门氏菌。反响序号A2：补做甘露醇和山梨醇试验，沙门氏菌靛基质阳性变体两项试验结果均为阳性，但需要结合血清学鉴定结果进展判定。-36-A3：ONPG。ONPG酶阳性,甲型副伤寒沙门氏菌为赖氨酸脱羧酶阴性。必要时按表5-37-如选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统，可依据5.4.1当的菌悬液，使用生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统进展鉴定。血清学鉴定抗原的预备一般承受1.2％～1.5％琼脂培育物作为玻片凝集试验用的抗原。O血清不凝集时，将菌株接种在琼脂量较高的〔如2％～3％〕培育基上再检查；假设是由于Vi抗原的存在而阻挡了O凝集反响时，可挑取菌苔于1mL生理盐水中做成浓菌液，于酒精灯火焰上煮沸后再检查。H抗原发育不良时，将菌株接种在0.55％～0.65％半固体琼脂平板的中心，俟菌落集中生长时，在其边缘局部取菌检查；或将菌株通过装有0.3％～0.4％半固体琼脂的小玻管1次～2次，自远端取菌培育后再检查。多价菌体抗原〔O〕鉴定在玻片上划出2个约1cm×2cm的区域，挑取1环待测菌，各放1/2环于玻片上的每一区域上部，在其中一个区域下部加1滴多价菌体〔O〕抗血清，在另一区域下部参加1滴生理盐水，作为比照。再用无菌的接种环或针分-37-1min，并对着黑暗背景进展观看，任何程度的凝集现象皆为阳性反响。〔H〕鉴定同5.5.2。血清学分型〔选做工程〕O用A～F多价O血清做玻片凝集试验，同时用生理盐水做比照。在生理A～FOO4；O3、O10；O7；O8；O9；O2O11因子血清做凝集试验。依据试验结果，O群。被O3、O10血清凝集的菌株，再用O10、O15、O34、O19单因子血清做凝集试验，判定E1、E2、E3、E4各亚群，每一个O定均应依据O单因子血清的检查结果，没有O单因子血清的要用两个O因子血清进展核对。不被A～FO血清凝集者，先用9种多价-38-OOOOO多价1 A，B，C，D，E，F，群 〔并包括6,14群〕O440，41，42，43群H属于A～FO6H12相的H-38--39--39-再用这一种或两种血清所包括的各种H1相和第2H8种多价HHH多价1 a，b，c，d，iH多价2 eh，enx，enz15，fg，gms，gpu，gp，gq，mt，gz51H多价3 k，r，y，z，z10，lv，lw，lz13，lz28，lz40H多价4 1,2；1,5；1,6；1,7；z6H多价5 z4z23，z4z24，z4z32，z29，z35，z36，z38H多价6 z39，z41，z42，z44H多价7 z52，z53，z54，z55H多价8 z56，z57，z60，z61，z62HHH1H2H2H1相H抗原的,可在琼脂斜面上移种H查其另一个相。单相菌不必做位相变异检查。位相变异试验方法如下：小玻管法：将半固体管〔每管约1mL～2mL〕在酒精灯上溶化并冷至℃，取相的H0.05mL～0.1mL另一端挑取细菌进展检查。培育基内血清的浓度应有适当的比例，过高时细菌不能生长，过低时同一相细菌的动力不能抑制。一般按原血清1：200～1：800小倒管法：将两端开口的小玻管〔下端开口要留一个缺口，不要平齐〕501内，略加搅动，使其混匀，俟凝固后，将待检菌株接种于小套管中的半固体表层内，每天检查结果，待另一相细菌解离后，可从套管外的半固体外表取菌检1％软琼脂斜面，于37℃培育后再做凝集试验。简易平板法：将0.35％～0.4％半固体琼脂平板烘干外表水分，挑取因子位的中心点种待检菌株，培育后，在形成集中生长的菌苔边缘取菌检查。Vi-40--40-ViVi副伤寒沙门氏菌,都柏林沙门氏菌。5.5.4.4菌型的判定依据血清学分型鉴定的结果，依据附录B或有关沙门氏菌属抗原表判定菌型。5结果与报告25g〔mL〕样品中检出或未检出沙门氏菌。A〕培育基和试剂缓冲蛋白胨水〔BPW〕成分蛋白胨 10.0g氯化钠 5.0g磷酸氢二钠〔含12个结晶水〕 9.0g磷酸二氢钾 1.5g蒸馏水 1000mLpH7.2±0.2制法10min，煮沸溶解，调整pH121℃，15min。四硫磺酸钠煌绿〔TTB〕增菌液根底液蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g氯化钠3.0g碳酸钙45.0g蒸馏水1000mLpH7.0±0.2除碳酸钙外，将各成分参加蒸馏水中，煮沸溶解，再参加碳酸钙，调整pH121℃，20min。硫代硫酸钠溶液硫代硫酸钠〔含5个结晶水〕 50.0g蒸馏水 加至100mL高压灭菌 121℃，20min。碘溶液碘 片 20.0g-41--41-碘化钾 25.0g蒸馏水 加至100mL溶解为止，然后加蒸馏水至规定的总量，贮存于棕色瓶内，塞紧瓶盖备用。0.5％煌绿水溶液煌绿 0.5g蒸馏水 100mL溶解后，存放暗处，不少于1d，使其自然灭菌。牛胆盐溶液牛胆盐 10.0g蒸馏水 100mL加热煮沸至完全溶解，高压灭菌121℃，20min。制法根底液 900mL硫代硫酸钠溶液100mL碘溶液20.0mL煌绿水溶液2.0mL牛胆盐溶液50.0mL均应摇匀后再参加另一种成分。亚硒酸盐胱氨酸〔SC〕增菌液成分蛋白胨5.0g乳糖4.0g磷酸氢二钠10.0g亚硒酸氢钠4.0gL-胱氨酸0.01g蒸馏水 1000mLpH7.0±0.2制法除亚硒酸氢钠和L-胱氨酸外，将各成分参加蒸馏水中，煮沸溶解，冷至551g/LL-10mL〔称取0.1gL1mol/L15mL，使溶解，再加无菌蒸馏水100mL即成，如为DL-胱氨酸，用量应加倍〕。摇匀，调整pH。亚硫酸铋〔BS〕琼脂成分蛋白胨10.0g牛肉膏5.0g葡萄糖5.0g硫酸亚铁0.3g磷酸氢二钠4.0g煌 绿 柠檬酸铋铵 2.0g亚硫酸钠 6.0g-42--42-琼 脂 18.0g～20g蒸馏水 1000mLpH7.5±0.2制法300mL〔制作根底液〕，硫酸亚铁和磷酸氢二20mL30mL20mL和30mL蒸馏水中，琼脂参加600mL蒸馏水中。然后分别搅拌均匀，80℃左右时，先将硫酸亚铁和磷酸氢二钠混匀，倒入根底液中，混匀。将柠檬酸铋铵和亚硫酸钠混匀，倒入根底液中，再混匀。调整pH，50℃～55后马上倾注平皿。注：本培育基不需要高压灭菌，在制备过程中不宜过分加热，避开降低其选择天使用。HE琼脂〔HektoenEntericAgar〕成分蛋白胨12.0g牛肉膏3.0g乳糖12.0g蔗糖12.0g水杨素2.0g胆盐20.0g氯化钠5.0g琼脂 18.0g～20.0g蒸馏水1000mL0.4％溴麝香草酚蓝溶液16.0mLAndrade指示剂20.0mL甲液20.0mL乙液pH7.5±0.220.0mLA.5.2制法将前面七种成分溶解于400mL蒸馏水内作为根底液;将琼脂参加于600mLpH50℃～55℃倾注平皿。性。②甲液的配制硫代硫酸钠 34.0g柠檬酸铁铵 4.0g蒸馏水 100mL③乙液的配制去氧胆酸钠 10.0g蒸馏水 100mL-43--43-④Andrade 指示剂酸性复红 0.5g1mol/L氢氧化钠溶液 16.0mL蒸馏水 100mL将复红溶解于蒸馏水中,参加氢氧化钠溶液。数小时后如复红褪色不全,再1mL～2mL。木糖赖氨酸脱氧胆盐〔XLD〕琼脂成分酵母膏3.0gL-赖氨酸5.0g木糖3.75g乳糖7.5g蔗糖7.5g去氧胆酸钠2.5g柠檬酸铁铵0.8g硫代硫酸钠6.8g氯化钠5.0g琼脂15.0g酚红 0.08g蒸馏水 1000mLpH7.4±0.2制法除酚红和琼脂外，将其他成分参加400mL蒸馏水中，煮沸溶解，调整再参加指示剂，待冷至50℃～55℃倾注平皿。择性，贮于室温暗处。本培育基宜于当天制备，其次天使用。三糖铁〔TSI〕琼脂成分蛋白胨20.0g牛肉膏5.0g乳 糖10.0g蔗 糖10.0g葡萄糖1.0g硫酸亚铁铵〔6〕0.2g酚 红0.025g或5.0g/L溶液5.0mL氯化钠5.0g硫代硫酸钠0.2g琼 脂12.0g蒸馏水pH7.4±0.21000mLA.7.2制法除酚红和琼脂外，将其他成分参加400mL蒸馏水中，煮沸溶解，调整。另将琼脂参加600mL-44--44-再参加指示剂，混匀，分装试管，每管约2mL～4mL121℃10min115℃15min，灭菌后置成高层斜面，呈桔红色。蛋白胨水、靛基质试剂蛋白胨水蛋白胨〔或胰蛋白胨〕 20.0g氯化钠 5.0g蒸馏水 1000mLpH7.4±0.2将上述成分参加蒸馏水中，煮沸溶解，调整pH，分装小试管,121℃高压灭菌15min。靛基质试剂柯凡克试剂：将对