二：菌种的管理和保藏2

菌种的保藏和管理2009年10月2/4/20231菌种保藏

微生物实验过程中，实验菌株可能是最敏感的，因为它们的生物活性和特性依赖于合适的试验操作和贮藏条件。2/4/20232实验室菌种的处理和保藏的程序应标准化，使尽可能减少菌种污染和生长特性的改变。按统一操作程序制备菌株是微生物试验结果一致性的重要保证。2/4/20233菌种保藏是微生物学检验工作中的一项常规技术，菌种的科学保藏和管理直接关系到检验结果的正确性

试验菌种应是从国家菌种中心获得的标准菌种，经过实验室复活并在适宜的培养基中生长后保存.2/4/20234

菌种保藏的中心任务是广泛收集各种有用的微生物菌种，选择最适宜的保藏方法，避免在保藏和传代过程中死亡、变异、衰退及活力减弱，以保持菌种原有的各种生物学特性，从而达到保证研究、检验、交换和使用要求的目的。2/4/20235菌种保藏机构中国菌种保藏管理委员会（CCCCM）成立于1979年。下设7个菌种保藏管理中心及有关专业实验室，共12个单位实行统一领导，按专业分工管理。国外的菌种保藏机构2/4/20236常用菌种保藏方法

菌种保藏的原则根据微生物菌种的生理、生化特性，在人工创造的条件下尽量降低微生物细胞的代谢强度，使细胞基本上处于休眠状态，生长繁殖受到抑制但由不至于死亡，以减低菌种的变异率。

2/4/20237标准菌株的复活或培养物的制备应按供应商提供的说明或按验证的方法进行。标准储备菌株-从国内、外菌种收藏机构获得的标准菌株经复活并在适宜的培养基中生长后,既为标准储备菌株。常用菌种保藏方法2/4/20238低温、干燥、缺氧、缺乏营养等环境条件都可以抑制微生物的代谢和生长繁殖，因此低温、干燥和真空是菌种保藏的重要手段。标准储备菌株经纯度和特性确认后保存°

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工作菌株不可代替标准菌株，标准菌株的商业衍生物仅可用作工作菌株。2/4/202310不同的微生物，应根据其生物特征来选择最适宜的保藏方法，菌种的保藏方法一般分四个阶段：2/4/202311⑴

挑选特征典型的纯菌菌落⑵确定保藏的合适菌体形态⑶选择最适宜的方法保藏⑷定期对保藏的菌种进行检查2/4/202312二、菌种的传代和使用工作菌种的传代次数应严格控制，不得超过5代，（从菌种保藏中心获得的标准菌株为第0代）防止过度的传代造成菌种变异。1代是指将活的培养物接种到新鲜培养基中，任何亚培养的形式均被认为是转种或传代一次。必要时，实验室应对工作菌株的特性和纯度进行确认。

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细菌的接种、分离和培养接种、分离、培养是微生物学实验的基本作技术，要求严格的无菌操作和在无菌环境下进行。2/4/202314常用培养基种类斜面接种半固体培养基液体培养基平板培养基2/4/202315接种方法涂布法划线法穿刺法直接加入法等2/4/202316分离：分段划线法、连续划线法、涂布分离法、倾注分离法等。2/4/202317

培养：接种后的培养基，根据不同微生物生长条件的要求，置培养基于适宜微生物生长的环境中，使其生长繁殖的过程。需气培养法厌氧培养法2/4/202318培养后微生物的生长判断固体培养基液体培养基2/4/202319

菌种的传代和使用菌液的制备和使用2/4/202320

三、菌种的检查与复壮

菌种的衰退菌种经过长期人工传代培养或保藏，由自发突变的作用而引起某些优良特性变弱或消失的现象。

2/4/202321控制菌种的衰退方法

⑴控制传代次数⑵创造适宜的培养条件⑶用不同类型的细胞进行传代⑷采用有效的保藏方法2/4/202322定期检查

菌种在保藏期间必须定期检查，发现变异或衰退，应及时给予恢复。

2/4/202323菌种的复壮

使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性的过程。实验室主要采用分离纯化的方法。2/4/202324

四、菌种的管理

1、使用菌种的单位，应具备从事微生物工作的条件和设备。

菌种应由专人负责管理，管理人员应具有微生物专业知识和技术水平，并应具有较强的责任心。

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2、实验室必须建立菌种保存和使用文件化的程序管理制度.3、菌种应冷藏或冷冻保存，保存菌种的冰箱不得放置食品和易挥发性药品，放置菌种的专门冰箱，应上锁管理。

2/4/2023264、应由专人按操作规程和有关要求定期进行传代，并定期对保存的菌种进行检查，一般每年1～2次，（或定期更换栋干菌种）。

2/4/202327详细记录菌种的来源、接收、传代、分离、复壮、使用和鉴定等均应做好详细记录。包括菌种传代或使用时间、名称、菌号、代数、传代或保存形式、分离复壮方式、使用内容、鉴定情况等都应进行详细的记录。2/4/202328菌种不得随意带出实验室，外单位索取、购买应由登记，并包装严密。菌种处理应严格按操作规程进行，灭菌处理应有详细记录。

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