定量分析方法概述

第四章

药典中常见定量分析方法概述

药物的定量分析是指准确测定药品有效成分或指标性成分的含量。

它是评价药品质量、判断药物优劣的重要手段。

对药物进行定量分析时，应按药品质量标准进行测定。药物定量分析可选用化学分析法和仪器分析法。

化学测定法仪器测定法重量分析法容量分析法：滴定法，准确，RSD≤0.2%，专属性差，适用于化学原料药光学分析法：紫外-可见分光光度法最常用，灵敏度高，准确度高色谱分析法：高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）最多电化学分析法滴定分析法紫外可见分光光度法色谱分析法分析方法的验证定量分析有关计算第一节

滴定分析法一、基本原理及特点

滴定分析法是将一种已知准确浓度的溶液（滴定液）滴加到待测物质的溶液中，直到化学反应按计量关系完全作用为止，然后根据所用滴定液的浓度和体积计算出待测物质含量的一种分析方法，又称“容量分析法”。一、基本原理及特点

沉淀、配位滴定非水滴定氧化还原酸碱滴定原料药纯度达到98.5%以上时首选容量分析法二、应用与实例

（一）酸碱滴定法1.直接滴定法适用范围：C·Ka≥10-8的弱酸、C·Kb≥10-8的弱碱终点：指示剂变色2.剩余滴定法适用范围：药物难溶于水或有其他原因不宜采用直接滴定法二、应用与实例

（一）酸碱滴定法实例一布洛芬含量测定—直接滴定法溶剂：中性乙醇（对酚酞显中性）指示剂：酚酞滴定液：氢氧化钠（0.1mol/L）滴定度（T）：每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于20.63mg的C13H18O2羧基酸性二、应用与实例

（一）酸碱滴定法实例二氯贝丁酯含量测定—剩余滴定法溶剂：中性乙醇水解溶液：定过量氢氧化钠溶液（0.5mol/L）指示剂：酚酞滴定液：盐酸滴定液（0.5mol/L）滴定度：每1ml氢氧化钾（钠）滴定液（0.5mol/L）相当于121.4mg的C12H15ClO3先水解再回滴二、应用与实例

（一）酸碱滴定法实例三丙戊酸钠含量测定—直接滴定，电位滴定法溶剂：水+乙醚指示终点：电位法滴定液：盐酸滴定液（0.1mol/L）滴定度：每lml盐酸滴定液（0.1mol/L）相当于16.62mg的C8H15NaO2二、应用与实例

（二）非水溶液滴定法溶剂：非水介质非水碱量法：有机碱及其氢卤酸盐、磷酸盐、硫酸盐或有机酸盐、以及有机酸碱金属盐类滴定液：高氯酸滴定液（0.1mol/L）溶剂：冰醋酸二、应用与实例

（二）非水溶液滴定法1.有机弱碱Kb≥10-10：冰醋酸介质Kb＜10-10：冰醋酸-醋酐的混合溶液为介质，且随着醋酐用量的增加，滴定范围显著增大2.有机酸碱金属盐的滴定：高氯酸滴定液直接滴定二、应用与实例

（二）非水溶液滴定法3.有机碱的氢卤酸盐：3～5ml醋酸汞冰醋酸溶液4.有机碱的硫酸盐：只能滴定至HSO4-的程度5.有机碱的硝酸盐：电位法指示终点6.有机碱的有机酸盐：冰醋酸或冰醋酸-醋酐的混合溶剂，结晶紫为指示剂，高氯酸为滴定液二、应用与实例

（二）非水溶液滴定法实例盐酸可乐定含量测定溶剂：冰醋酸+醋酸汞滴定液：高氯酸滴定液（0.1mol/L）指示剂：结晶紫滴定终点：蓝绿色滴定度：每1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相当于26.66mg的C9H9Cl2N3•HCl。有机碱氢卤酸盐二、应用与实例

（三）氧化还原滴定法1.碘量法（1）基本原理滴定液：碘滴定液直接碘量法剩余碘量法置换碘量法指示剂：淀粉定过量碘滴定液滴定液：硫代硫酸钠用于强氧化剂测定KI+硫代硫酸钠碘量法二、应用与实例

（三）氧化还原滴定法1.碘量法（2）应用

实例一安乃近片含量测定—直接碘量法溶剂：乙醇与0.01mol/L盐酸溶液滴定液：碘滴定液（0.05mol/L）终点：浅黄色（或带紫色）在30秒钟内不褪滴定度：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于17.57mg的C13H16N3NaO4S•H2O二、应用与实例

（三）氧化还原滴定法1.碘量法（2）应用

实例二右旋糖酐20葡萄糖注射液中葡萄糖的含量测定—剩余碘量法溶剂：定过量（0.05mol/L）碘滴定液滴定液：硫代硫酸钠滴定液（0.1mol/L）指示剂：淀粉，近终点加入，滴定至蓝色消失滴定度：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相当于9.909mg的C6H12O6•H2O二、应用与实例

（三）氧化还原滴定法2.亚硝酸钠滴定法（1）基本原理二、应用与实例

（三）氧化还原滴定法2.亚硝酸钠滴定法（2）应用加入过量的盐酸在室温条件（10～30℃）下滴定滴定时加入溴化钾作为催化剂二、应用与实例

（三）氧化还原滴定法2.亚硝酸钠滴定法（2）应用滴定的方式：一次性加入大部分指示终点的方法：永停滴定法二、应用与实例

（三）氧化还原滴定法2.亚硝酸钠滴定法（2）应用实例盐酸克仑特罗含量测定溶剂：盐酸溶液（1→2）滴定液：亚硝酸钠滴定液（0.05mol/L）滴定度：每lml亚硝酸钠滴定液（0.05mol/L）相当于15.68mg的C12H18Cl2N2O·HCI芳香第一胺第二节

紫外-可见分光光度法分光光度法是通过测定物质在特定波长处或一定波长范围内的吸光度或发光强度，对该物质进行定性和定量分析的方法朗伯-比尔定律：单色光辐射穿过被测物质溶液时，在一定的浓度范围内被该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度成正比一、基本原理

朗伯-比尔定律一、基本原理

百分吸收系数：在一定波长下，溶液浓度为1%（g/ml），液层厚度为1cm时的吸光度数值为100ml溶液中所含被测物质的重量（按干燥品或无水物计算）（g）液层厚度，cm含有共轭体系、芳香环等发色基团，均可在紫外区（200～400nm）或可见光区（400～760nm）产生吸收药物在可见光区若无吸收，但在一定条件下加入显色试剂或经过处理显色后，能对可见光产生吸收。二、应用

空白对照：配制供试品溶液的同批溶剂检测波长：最大吸收波长吸光度数值：0.3~0.7123二、应用

（一）测定方法1.对照品比较法二、应用为供试品溶液的浓度为供试品溶液的吸光度为对照品溶液的浓度为对照品溶液的吸光度2.吸收系数法在规定的波长处测定其吸光度，以该品种在规定条件下的吸收系数计算含量3.比色法供试品本身在紫外-可见区没有强吸收，或在紫外区虽有吸收但为了避免干扰或提高灵敏度，可加入适当的显色剂显色后测定二、应用4.标准曲线法以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量二、应用（二）仪器的校正和检定二、应用光源单色器吸收池检测器（二）仪器的校正和检定1.波长：常用汞灯中的较强谱线、氘灯的谱线、钬玻璃尖锐吸收峰、高氯酸钬溶液2.吸光度的准确度：重铬酸钾的硫酸溶液二、应用（二）仪器的校正和检定3.杂散光的检查二、应用（三）对溶剂的要求含有杂原子的有机溶剂，使用范围不能小于截止使用波长二、应用三、实例（一）奥沙西泮片含量测定20片，精密称定研细片粉，W200ml量瓶150ml甲醇奥沙西泮溶解定容，摇匀过滤5ml续滤液100ml量瓶乙醇稀释，定容UV检测波长：229nm吸收系数：1252吸收系数法三、实例（二）呋喃唑酮含量测定约20mg，精密称定研细250ml量瓶+40ml二甲基甲酰紫溶解定容精密量取10ml100ml量瓶水定容对照品：呋喃唑酮检测波长：367nm对照品比较第三节

色谱分析法在《中国药典》现行版中，使用的色谱法有高效液相色谱法、气相色谱法、离子色谱、凝胶色谱等

一、高效液相色谱法（一）基本原理一、高效液相色谱法（二）应用1.对仪器的一般要求(1)色谱柱反相：十八烷基硅烷键合硅胶正相：硅胶离子交换：离子交换填充剂分子排阻：凝胶或高分子多孔微球C18硅胶表面填料直径15nm以下＜2000＞2000样品分子量一、高效液相色谱法填料直径30nm以上温度要求：≤40℃流动相pH：2~8一、高效液相色谱法（二）应用1.对仪器的一般要求(2)检测器二极管阵列检测器荧光检测器蒸发光散射检测器123示差折光检测器电化学检测器质谱检测器456一、高效液相色谱法（二）应用1.对仪器的一般要求(3)流动相甲醇-水乙腈-水尽可能少用含有缓冲液的流动相一、高效液相色谱法（二）应用2.高效液相色谱系统适用性试验（1）色谱柱的理论板数（n）

一、高效液相色谱法（二）应用2.高效液相色谱系统适用性试验（2）分离度（R）

除另有规定外，定量分析时分离度应大于1.5一、高效液相色谱法（二）应用2.高效液相色谱系统适用性试验（3）重复性（R）

连续进样，峰面积，RSD≯2.0%一、高效液相色谱法（二）应用2.高效液相色谱系统适用性试验（4）拖尾因子（T）T：0.95～1.05一、高效液相色谱法（二）应用3.测定方法（1）内标法对照品+内标对照品峰AR

内标物峰As

6min8min一、高效液相色谱法（二）应用3.测定方法（1）内标法供试品+内标供试品峰Ax内标物峰As

6min8min一、高效液相色谱法（二）应用3.测定方法（2）外标法R：对照品X：供试品一、高效液相色谱法（二）应用3.测定方法（3）加校正因子的主成分自身对照法（4）不加校正因子的主成分自身对照法（5）面积归一化法一、高效液相色谱法（三）实例一、丙酸氯倍他索乳膏含量测定色谱条件与系统适用性试验：固定相：C18

流动相：甲醇-水（65∶35）检测波长：240nm理论板数：不低于2000分离度：丙酸氯倍他索峰与内标物质峰符合要求一、高效液相色谱法（三）实例一、丙酸氯倍他索乳膏含量测定内标溶液：0.15mg/ml醋酸氟氢松测定法：供试+内标，对照+内标，按峰面积计算方法：内标法一、高效液相色谱法（三）实例二、法莫替丁片含量测定色谱条件与系统适用性试验：固定相：C18

流动相：庚烷磺酸钠-乙腈-甲醇（78:19:3）检测波长：254nm理论板数：不低于1400分离度：法莫替丁与相邻杂质峰符合要求一、高效液相色谱法（三）实例二、法莫替丁片含量测定供试品：对照品：法莫替丁测定法：按峰面积计算方法：外标法二、气相色谱法（一）基本原理二、气相色谱法（二）应用1.对仪器的一般要求（1）载气源：氦气、氮气、氢气，纯度99.99%以上（2）进样部分：采用溶液直接进样或顶空进样（3）色谱柱：填充柱或毛细管柱（4）柱温箱：控温精度应在±1℃，且温度波动小于每小时0.1℃二、气相色谱法（二）应用1.对仪器的一般要求（5）检测器：火焰离子化检测器（FID）、热导检测器（TCD）、氮磷检测器（NPD）、电子捕获检测器（ECD）、质谱检测器（MS）等

（6）数据处理系统：记录仪、积分仪以及计算机工作站等

二、气相色谱法（二）应用2.系统适用性试验3.测定法（1）内标法（2）外标法（3）面积归一化法（4）标准溶液加入法测定供试品中某个杂质或主成分含量

（三）实例各种制剂中乙醇的含量测定色谱条件与系统适用性试验载体：直径为0.25～0.18mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球柱温：120～150℃理论板数：按正丙醇峰计算应不低于700分离度：乙醇峰与正丙醇的分离度应大于2.0二、气相色谱法（三）实例各种制剂中乙醇的含量测定校正因子：无水乙醇+正丙醇（内标），计算校正因子，RSD≤2.0%测定法：供试品+正丙醇方法：内标法二、气相色谱法三、液相-质谱联用技术及其应用简介液相-质谱联用技术（LC-MS）是20世纪90年代发展起来的综合分析技术，先分离，再按质荷比（m/z）将离子分离、检测的分析方法，LC的高分离效能与MS的高灵敏度、高选择性使之成为目前发展最迅速的分析手段之一。千里光中毒性成分阿多尼弗林碱的检查色谱、质谱条件与系统适用性试验固定相：C18流动相：乙腈-0.5%甲酸溶液（7:93)

检测器：ESI正离子模式下，质荷比（m/z)为366离子进行检测理论板数：按阿多尼弗林碱峰计算应不低于8000三、液相-质谱联用技术及其应用简介千里光中毒性成分阿多尼弗林碱的检查校正因子：0.2μg/ml野百合碱对照品为内标，0.1μg/ml阿多尼弗林碱对照品为对照，计算校正因子测定法：供试品+内标溶液本品按干燥品计算，含阿多尼弗林碱（C18H23NO7)不得过0.004%。三、液相-质谱联用技术及其应用简介第四节

分析方法的验证验证的目的：证明采用的方法适合于相应检测要求

需验证的分析项目：鉴别试验、杂质检查、有效成分含量测定药品溶出度、释放度

指标:精密度，准确度，检测限，定量限，选择性，线性与范围，耐用性一、分析方法验证的内容（一）准确度用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度表示方法：用回收率（%）表示在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价一、分析方法验证的内容（一）准确度1.含量测定方法的准确度2.杂质定量测定的准确度3．数据要求

在规定范围内，至少用9个测定结果进行评价。设计3个不同浓度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液一、分析方法验证的内容（二）精密度同一样品多次测量值之间相互接近的程度表示方法：偏差、标准偏差（SD）或相对标准偏差（RSD）1.重复性：同一实验室，同一人多次测定的精密度2.中间精密度：同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度3.重现性：不同实验室，不同人测定的精密度一、分析方法验证的内容（三）专属性有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性（四）检测限指试样中被测物能被检测出的最低量信噪比法(S:N=3:1)一、分析方法验证的内容（五）定量限指试样中被测物能被定量测定的最低量，常用信噪比法确定定量限。一般以信噪比为10∶1时相应浓度或注入仪器的量确定定量限。（六）线性待测物浓度与响应值成线性关系的浓度范围线性关系：Y=a+bx（r=0.9999)线性程度：相关系数一、分析方法验证的内容（七）范围指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。（八）耐用性指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影响的承受程度一、分析方法验证的内容检验项目和验证内容①已有重现性验证，不需验证中间精密度②如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充③视具体情况予以验证第五节

定量分析有关计算原料药的含量用百分含量表示：制剂的含量则用标示量的百分含量表示：片剂表示量百分含量：注射剂剂表示量百分含量：其他剂型如何表示？（一）滴定分析法（一）滴定分析法呋塞米原料药含量测定取本品0.4988g（干燥品），加乙醇30ml，微温使溶解，放冷，加甲酚红指示液4滴与麝香草酚蓝指示液1滴，用氢氧化钠滴定液（0.1003mol/L）滴定至溶液显紫红色，消耗氢氧化钠滴定液（0.1003mol/L）14.86ml；并将滴定的结果用空白试验校正，消耗氢氧化钠滴定液（0.1003mol/L）0.05ml。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于33.07mg的呋塞米。按干燥品计算，含C12H11ClN2O5S不得少于99.0%。呋塞米原料药含量测定（一）滴定分析法由于98.48%＜99.0%，故本品含量不合格（一）滴定分析法司可巴比妥钠原料药含量测定取本品0.1041g（干燥品），置250ml碘瓶中，加水10m1，振摇使溶解，精密加溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加盐酸5m1，立即密塞并振摇1min，在暗处静置15min后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液10m1，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正。每1ml溴滴定液（0.05mo1/L）相当于13.01mg的C12H17N2NaO3。按干燥品计算，含C12H17N2NaO3不得少于98.5%。已知样品消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L）17.20ml，空白实验消耗硫代硫酸钠滴定液（0.1012mol/L）25.02ml（一）滴定分析法司可巴比妥钠原料药含量测定测定结果大于98.5%，故本品含量合格（一）滴定分析法甲苯磺丁脲片剂（标示量0.5g）的含量测定取甲苯磺丁脲10片，精密称定为5.948g，研细，精密称取片粉0.5996g，加中性乙醇25ml，微热，使其溶解，放冷，加酚酞指示剂3滴，用氢氧化钠滴定液（0.1008mol/L）滴定至粉红色，消耗量18.47ml。每1ml氢氧化钠滴定液（0.1mol/L）相当于27.04mg的甲苯磺丁脲。《中国药典》现行版规定本品含甲苯磺丁脲应为标示量的95.0%～105%。试计算本品的标示量百分含量，并判断是否符合规定。（一）滴定分析法甲苯磺丁脲片剂（标示量0.5g）的含量测定本品含量合格(二）分光光度法(二）分光光度法对乙酰氨基酚原料药含量测定精密称取对乙酰氨基酚0.0411g，置250ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液50ml，加水至刻度，摇匀，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氢氧化钠溶液10ml，加水至刻度，摇匀。依照分光光度法，在257nm波长处测得吸收度为0.582。按C8H9NO2的百分吸收系数为715计算对乙酰氨基酚的百分含量(二）分光光度法对乙酰氨基酚原料药含量测定(二）分光光度法甲氧苄啶注射液（规格2ml：0.1g）含量测定精密量取本品1ml，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度，摇匀。照紫外-可见分光光度法，在271nm波长处测定吸光度为0.420。另取甲氧苄啶对照品适量0.05134g，置25ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度，精密量取1ml置100ml量瓶中，用稀醋酸稀释至刻度，摇匀。在271nm波长处测