动物细胞培养和核移植

1、细胞全能性的定义？原因？2、植物组织培养的原理？基本流程？条件？培养基成分？3、脱分化、再分化的实质？俞伤组织的特点？4、植物体细胞杂交技术的原理？去壁的方法？诱导原生质体融合的方法？原生质体融合的实质？原生质体融合完成的标志？植物体细胞杂交技术完成的标志？优势？5、植物繁殖的新途径有？列举微型繁殖、人工种子的优点？如何使作物脱毒？6、作物新品种的培育包括？单倍体育种的流程？优点？7、怎样培育突变体？8、怎样进行细胞产物的工厂化生产？动物细胞培养和核移植技术专题2动物细胞工程动物细胞培养动物细胞融合生产单克隆抗体动物细胞核移植动物细胞工程常用技术其中动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础动物细胞培养1.动物细胞培养概念：从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。2、原理：细胞增殖动物组织块制成细胞悬液传代培养胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞幼龄动物的器官组织或胚胎用胰蛋白酶等处理贴壁细胞适宜条件，原代培养3、动物细胞培养的过程细胞增殖能力强，分裂旺盛，容易培养使细胞与培养液充分接触，利于吸收营养，排出代谢废物加入培养液细胞间的物质主要是蛋白质细胞生长特点：细胞贴壁、接触抑制强调：动物细胞生长特性（一）：细胞贴壁：在悬液中分散的细胞贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。培养瓶或培养皿壁要求：表面光滑、无毒、易于贴附。接触抑制：贴壁生长的细胞生长到表面相互接触后，细胞停止分裂增殖（形成一个单层）。接触抑制强调：动物细胞生长特性（二）：原代培养：动物组织消化后的初次培养称为原代培养。传代培养：贴满瓶壁的细胞，需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。10-50代，增值缓慢，以至停止，部分细胞的细胞核型可能发生变化；50代以后，少部分细胞克服细胞寿命的自然极限，获得不死性，即变为癌细胞。强调：原代培养与传代培养总结：动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织、器官制成细胞悬液剪碎，用胰蛋白酶处理10代细胞转入培养瓶50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液稀释传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。传代10-50代左右，增长缓慢以至于完全停止，部分细胞核型可能发生变化分瓶传代培养培养细胞特点：细胞贴壁、接触抑制50代后，少部分细胞获得不死性，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。原代培养4、动物细胞培养的条件:1）无菌无毒

的环境：

适宜的温度：36.5±0.5℃适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4液体合成培养基：葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等；通常还需加入血浆、血清等天然成分。4）气体环境：2）营养：3）温度和pH：“95％空气+5％CO2”的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的PH首先对培养液和所有培养用具无菌处理；通常培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；此外定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。5、动物细胞培养技术的应用（阅读课本46-47页）:1）生物制品的生产如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体2）基因工程技术中常用的受体细胞3）检测有毒物质，判断某种物质的毒性4）细胞的生理、药理、病理研究

如用于筛选抗癌药物

比较项目植物组织培养动物细胞培养原理培养基性质培养基特有成分培养结果细胞的全能性细胞增殖植物组织培养和动物细胞培养的比较固体培养基液体培养基蔗糖植物激素葡萄糖动物血清大量产生细胞或细胞产物获得新个体或细胞产品1、动物细胞培养能否像植物组织培养那样最终培养成新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体2、怎样利用动物的细胞获得完整的动物个体？动物细胞核移植想一想二、动物体细胞核移植技术

和克隆动物

将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中。使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。1、动物核移植：克隆：指从一个共同的祖先，通过无性繁殖的方式产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子，细胞或个体。克隆包括三个层次

分子水平：如PCR扩增DNA

细胞水平：如动物细胞培养

个体水平：如克隆动物1、动物细胞工程常用的技术手段有哪些？其中哪项技术是其他技术的基础？2、动物细胞培养的原理、过程？其中制成细胞悬液的目的？3、动物细胞生长的特性？4、原代培养和传代培养有什么区别？5、动物细胞培养的条件？培养箱中加入5%的二氧化碳的目的是什么？6、动物细胞培养技术的应用？7、动物核移植的概念、原理？◆取供体细胞传代培养10代以内的细胞.为什么？◆用的是减Ⅱ中期细胞，为什么？◆胚胎移植2、核移植流程供体：优质高产奶牛受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养）

1.体积大，易操作。2.含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型供体细胞（供核）细胞培养体细胞

卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质）去核无核卵母细胞注入细胞融合重组细胞构建重组胚胎胚胎移植代孕母体生出与供体奶牛遗传物质基本相同的犊牛归纳:1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植2.生殖方式：无性生殖核移植过程3、你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？不是。1）克隆动物的细胞质遗传物质来自于受体卵母细胞；2）生物的性状不仅与遗传物质有关，还受环境影响3.体细胞核移植技术的应用前景1、在畜牧业中可以加速家畜遗传改良的进程.2、保护濒危物种.3、医药卫生领域生产医用蛋白质及组织器官的移植.4、了解胚胎发育和衰老过程；追踪研究疾病的发展过程和治疗疾病4、体细胞核移植技术存在的问题

（阅读课本50页）成功率低动物幼体产出概率＜10％克隆动物存在着健康问题克隆动物的食品安全性问题存在争议知识结构

动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养动物体细胞核移植技术和克隆动物核移植技术和克隆动物的概念体细胞核移植技术的过程体细胞核移植技术的应用前景体细胞核移植技术存在的问题1、动物细胞工程技术的基础是A.动物细胞融合B.单克隆抗体C.胚胎移植D.动物细胞培养D2、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这