凝胶色谱校正曲线制作

凝胶色谱概论

——GPC曲线研制作者：李炳源一.分析一批样品配制每瓶为单一组份窄标样，或各组份分子量差10陪以上混合窄标样建立样品表，分子量最大的为1号瓶，依次减小一.分析一批样品—标样配制警告：高分子化合物分子量越大，溶解度越小，样品配制时不可搅拌或超声，以防降解，只能放置自然溶解。水溶性样，Mp≤2k，可配置浓度2mg/ml溶解要2h;≤800k，最大可配置浓度1mg/ml；>800k0.3mg/ml放1-3d。标样密闭冷藏，冷藏不超过1月。进样量：三根水性凝胶柱串联，大分子量柱在前，小分子在后。可进样100ul.（柱>3可进量200ul，<2，进量50ul）建议定量环200ul，2414放大倍数=16.油溶性样：聚苯乙烯≤20k，四氢呋喃为溶剂，配置0.5mg/ml(0.05%WV),进样20ul，2414放大倍数=8.一.分析一批一般样品建立样品表，标明瓶号，分子量最大放在前面，依次排列2mg/ml二.填入分子量在通道中按瓶号依次选中各标样右击—改变样品—量（工具钮）进入组份编辑器—当前（工具标）填入各峰分子量保存修改1.选所有标样—改变样品2.“修改样品”—“量”3.进入组份编辑器—当前4.填入各峰分子量—第一瓶输入1号瓶每个峰分子量Mp点击当前4.填入各峰分子量—第二瓶输入2号瓶每个峰分子量Mp点击下一个4.填入各峰分子量—第三瓶输入3号瓶每个峰分子量点击确定5.保存刚才的修改三.建立数据处理方法选分子量最大窄标再现图谱向导—GPC—峰宽参数—阈值—积分区域—最小峰面积、峰宽（可不选）GPC特殊参数：相关或普适校正，多阶校正。GPC特殊参数：Vo（色谱柱：300mm×7.8mm）为5.5-6.0ml。Vt为2Vo保存方法1.再现分子量最大图谱分子量最大叠加2.用向导建立处理方法处理方法向导2.用向导建立处理方法—GPC2.用向导建立处理方法—积分参数2.用向导建立处理方法—积分参数3.GPC特殊参数—校正与多阶拟合相关与普适多阶4.GPC特殊参数—Vo与VtVo（三柱串联：300×7.8mm）为5.5-6.0ml三倍

Vt为2Vo

5.保存方法四.产生校正曲线在通道中按瓶号次序选中全部标样、再现图谱打开处理方法积分、校正计算、观察校正曲线存储校正曲线随时修正积分错误1.再现图谱2.打开处理方法3.积分、校正计算、观察校正曲线3.1第一瓶计算后的纠正曲线注意只算了第一瓶3.2第二瓶计算后的校正正曲线只算了第一、二瓶3.3第三瓶计算后的校正曲线算了第一、二、三瓶有了足够采样点后，纠正曲线为有效曲线4.存储校正曲线5.纠正无效曲线纠正积分定性错误：在组份编辑器填入分子量时，按峰位填入，如定性错误将导致分子量错误。增加采样点，将拟合阶数由5阶降为低阶检查处理方法参数是否正确，如（V05.5X3）5.1纠正无效曲线—查看积分

定性错误5.1纠正无效曲线—查看积分定性正确5.1纠正无效曲线—查看方法参数5.1纠正无效曲线—降低拟合阶数点击处理方法5.1纠正无效曲线—降低拟合阶数只算了第一瓶曲线有效第一瓶计算五.宽峰计算再现宽样谱图,打开处理方法编辑现有处理方法，产生宽峰积分参数积分、计算观看结果、分布曲线，保存处理方法。保存宽样分布曲线—需要重新打开谱图、方法、计算后—选项—另存为。1.宽峰计算—再现谱图打开处理方法2.宽峰计算—编辑现有处理方法2.宽峰计算—产生宽峰积分参数3.宽峰计算—积分、计算积分、计算、结果4.1宽峰计算—结果4.2宽峰计算—分子量分布图5.1保存宽样分布曲线—正确

结果、选项、储存分布曲线5.2保存宽样分布曲线—错误保存方法后要重新打开图谱方法再计算否则无法保存六.用寛样产生校正曲线

宽样分析后其结果（分布曲线或各分子量）可用于标化系统重新标化系统，把宽样改为宽标—用分布曲线，获得拟合更好的新的校正曲线标化新系统——用原分布曲线，获得新的校正曲线标化新系统——用统计值（各分子量），获得新的校正曲线。