尿液分析仪检验的原理与方法

尿液分析仪检验的原理与方法尿液潜血检查是尿液检验中一个必不可少的项目，常用的检验方法有尿液分析仪潜血反应和尿液显微镜检查红细胞（镜检RBC）两种。由于显微镜检查对鉴别肾小球性与非肾小球血尿有重要的临床价值，故有学者提出显微镜检查是尿液红细胞检验的“金标准”，是尿液分析仪无法替代的。但是，近年来随着尿液分析仪的迅速普及，测量参数向着快速、简便、准确的方向发展，为临床提供了更好的诊断依据；显微镜检查耗时费力，许多人不愿意做尿液沉渣检查。因而在一些医院尿液显微镜检查有逐渐被尿液分析仪替代的趋势。为此，笔者对400例门诊患者的随机尿样，用尿液分析仪潜血反应和尿液显微镜检查红细胞两种方法进行检验，并对两种方法的符合程度进行比较。原理与方法1、原理。尿液分析仪使用的是干化学试纸法，是根据多联试带上各模块与尿液成分发生化学反应后颜色变化的深浅来检测尿液中的某化学物质，如直接检测红细胞、白细胞的胞质内涵物，间接推断细胞的有无。尿液分析仪潜血反应原理是：血红蛋白(Hb)中亚铁血红素的过氧化物酶样活性可使过氧化物分解释放出新生态［O］，后者氧化底物邻甲苯胺变成邻联甲苯胺发生由黄色f草绿色f深蓝色的颜色变化。尿液显微镜检查则是通过显微镜的放大作用直接将细胞等有形成分直观真实地呈现在镜下，是对底物的真实反映。2、方法尿液分析仪检测尿潜血于混匀的10ml新鲜尿液中浸入尿试纸条1s后取出，上仪器进行测定，自动打印结果。镜检取尿液10ml于试管中，以1500r/min离心5min，弃去上清液，留沉淀0.2ml。充分混匀后，取出约20Pl于载玻片上，加盖玻片(2.0cmX2.0cm)，然后用较弱的光线以低倍镜观察全貌，以免漏掉量少而有意义的物体，再用高倍镜辨认细胞。结果报告为：X个/高倍视野（HP）。结果分析由于两种检验方法的原理不同，影响它们的因素也不同，因而两种检验方法的结果存在一定的差异。1、假阳性。即尿液分析仪潜血反应阳性，镜检阴性，其常见原因有：（1）血红蛋白（Hb）尿液分析仪潜血反应既能与完整的RBC发生阳性反应，也可与RBC溶解释放的Hb发生阳性反应，而显微镜只能检出尿中未溶解的RBC。健康人尿中Hb含量极微，定性为阴性。疾病时，尿中Hb有两个来源：一是发生血管内溶血，血浆Hb超过了结合珠蛋白的结合能力，游离Hb从尿中排出。另一个是尿路（尤其是上尿路）出血，RBC在高渗或（和）低渗时破坏Hb逸出。此时，尿液分析仪潜血反应阳性，但尿沉渣镜检不见RBC或仅见RBC碎片。（2） 肌红蛋白（Mb）分子中也含有血红素基团，具有过氧化物酶活性°Mb主要存在于心肌和骨骼肌组织中，正常人尿中含量甚微，不能检出。当心肌或骨骼肌发生严重损伤时，血浆Mb增高，经肾脏排泄，使尿液Mb含量增高，故潜血反应呈阳性，镜检RBC为阴性。（3） 某些患者尿液中含有对热不稳定酶，也可使试剂块发生颜色改变，出现潜血反应阳性，镜检为阴性。（4） 某些氧化性污染物，例如次氯酸盐会导致潜血反应假阳性。（5）菌尿尿液是细菌良好的培养基，菌尿时有些细菌会产生氧化性物质，使得试剂块发生颜色变化，导致潜血反应阳性，镜检RBC为阴性。此外，微生物过氧化酶的侵入也可引起假阳性。（6）长时间存放及高温实验证明，标本不新鲜，存放时间长或高温存放，使潜血反应的阳性率相对增高，而RBC镜检相应减少，测试结果极有可能出现假阳性。因此，建议尿液标本存放时间不得超过4h。（7）尿试纸条的超期使用或被污染以及不妥善保存和操作方法的不正确，均可造成测试结果假阳性。（8）尿液分析仪灵敏度过高（0.2mg/dl出现++），“级差”范围太大（0.8〜50mg/dl级为+++），常会遇到仪器测试为++，而镜检测试红细胞为阴性，临床上又找不到任何导致血红蛋白尿原因的情况。2、假阴性。即镜检阳性，尿液分析仪潜血反应阴性，其常见原因有:（1）食物或药物的影响：由于饮食或药物使尿液呈碱性时，RBC溶解破裂，形成褐色颗粒，潜血反应呈阳性，而镜检呈阴性。（2）VitC尿液中大量存在时，能竞争性夺取反应产生的氧，引起假阴性反应。（3）高比重、高蛋白尿样降低了试剂块潜血反应的灵敏度，使潜血反应出现假阴性。（4）尿液中黏液成分增多，使RBC被包裹起来，试剂接触不到Hb，而使潜血反应呈现假阴性。3、离心对结果的影响。离心时如速度过快，可使有形成分破坏；但速度过慢，当每毫升尿液中的RBC在5000以下时，沉渣中可能找不到RBC，以至把隐匿型肾小球肾炎漏掉，因而在对检验结果有怀疑时，可用潜血反应证实。分析结论尿液分析仪法检测尿中红细胞异常敏感，有时可与镜检结果存在差异，要充分考虑影响测定结果因素，并结合临床进行全面分析，原则上尿液分析仪潜血反应阳性结果都应以显微镜法复检，这是做好尿液检验质量保证的重要环