转基因食品的毒理学评价及检验

转基因食品的毒理学评价及检验食品安全性毒理学评价的作用就是从毒理学的角度，研究食品中可能含有的有毒有害物质对食用者的作用机理，检验和评价食品（包括食品添加剂）的安全性或安全范围，从而达到确保人类健康的目的。按照食品毒理学评价的方法对转基因食品进行评价，从而了解该食品的毒理学特性与食用安全性。转基因食品毒理学评价的必要性转基因食品是否会由于导入了外源基因而产生对人体有毒的物质，是人们对转基因食品产生恐惧的重要方面。对转基因食品的毒理学评价是转基因食品上市前重要的评价环节。毒理学评价参数和安全限值1、半数致死量(medianlethaldose，LD50)

2、绝对致死剂量（absolutelethaldose，LD100）3、最小致死剂量（minimallethaldose，MLD或MLC或LD01）4、最大耐受剂量（maximaltolerancedose，MTD或LD0或LC0）5、最小有作用剂量(minimaleffectivedose)或称阈剂量或阈浓度6、最大无作用剂量(maximalno-effectivedose)安全限值

(1)每日容许摄入量(acceptabledailyintake，ADI)是以体重表达的每日容许摄入量，以此量终生摄入无可测量的健康危险性(标准人为60kg)。(2)可耐受摄入量(tolerableintake，TI)是由IPCS(国际化学品安全规划署)提出的，是指没有可估计的有害健康的危险性对一种物质终生摄入的容许量。(3)参考剂量和参考浓度是美国环境保护局(EPA)对非致癌物质进行危险性评价提出的概念。参考剂量(referencedose，RfD)和参考浓度(referenceconcentration，RfC)，是指一种日平均剂量和估计值。(4)最高容许浓度(maximalallowableconcenrtation，MAC):系指某一外源化学物可以在环境中存在而不致对人体造成任何损害作用的浓度。不确定系数和安全系数安全系数(safetyfactor，SF):是根据所得的最大无有害作用剂量(NOAEL)提出安全限值时，为解决由动物实验资料外推至人的不确定因素及人群毒性资料本身所包含的不确定因素而设置的转换系数。安全系数一般采用100，据认为安全系数100是为物种间差异(10)和个体间差异(10)两个安全系数的乘积。不确定系数(UF)：为求得可耐受摄入量(TI)说明关键研究(pivotalstudy)的适宜性(可信性)，物种间外推，在人个体间变异，全部资料的适宜性(充分性)和毒性的性质的各个因子的乘积。将临界效应(critica1effect)的NOAEL或LOAEL除以不确定系数即求得安全限值。有效作用剂量与作用关系示意图最小有效量（阈剂量）致死量最大有效量（极量）最小致死量最小中毒量无效量常用量（治疗量）剂量效应致死作用中毒作用中毒量转基因食品毒理学评价转基因食品的毒理学安全性评价主要从两方面着手，一是外源基因表达产物是否具有的毒性检测和评价；二是对转基因食品的全食品毒性检测和评价。外源基因表达产物的检测一般依照传统化学物质的安全性评价方法。对外源基因表达蛋白的检测评价一般有3个指标：一是，通过与国际权威大型公共数据库中已知的毒性蛋白进行核酸和蛋白质氨基酸序列的同源性比较，分析是否具有潜在的毒性；二是，在加热条件下和胃肠消化液中，检测分析外源基因表达蛋白质是否稳定或抗消化；三是，外源基因表达产物的急性经口毒性试验。全食品的毒理学检测也是采用传统化学物质的评价手段，一般采用亚慢性毒性试验来评价转基因食品的整体的安全性。食品安全性毒理学评价标准我国传统食品安全性毒理学评价程序和试验方法（共十二个标准），可用作转基因食品整体毒理学评价GB15193.1-2003食品安全性毒理学评价程序

GB15193.3-2003急性毒性试验

GB15193.9-2003显性致死试验

GB15193.12-2003体外哺乳类细胞(V79/HGPRT)基因突变试验

GB15193.13-200330天和90天喂养试验

GB15193.14-2003致畸试验

GB15193.17-2003慢性毒性和致癌试验

GB15193.18-2003日容许摄入量(ADI)的制定

GB15193.19-2003致突变物、致畸物和致癌物的处理方法

GB15193.20-2003TK基因突变试验

GB15193.21-2003受试物处理方法食品安全性毒理学评价规范第一部分

评价程序主题内容与适用范围对受试物的要求对受试物处理的要求保健食品安全性毒理学评价试验的四个阶段和内容不同保健食品选择毒性试验的原则要求保健食品安全性毒理学评价试验的目的和结果判定保健食品毒理学安全性评价时应考虑的问题第二部分

评价方法

急性毒性试验鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验骨髓细胞微核试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验小鼠精子畸变试验小鼠睾丸染色体畸变试验显性致死试验非程序性DNA合成试验果蝇伴性隐性致死试验体外哺乳类细胞（V79/HGPRT）基因突变试验TK基因突变试验30天和90天喂养试验致畸试验繁殖试验代谢试验慢性毒性和致癌试验日容许摄入量（ADI）致突变物，致畸物和致癌物的处理方法毒理学评价阶段毒理学评价的四个阶段第一阶段：急性毒性试验经口急性毒性试验：LD50，联合急性毒性，一次最大耐受量试验第二阶段：遗传毒性试验，30天喂养试验，传统致畸试验遗传毒性试验：原核细胞和真核细胞，体内试验和体外试验相结合Ames或基因突变试验；微核试验或染色体畸变试验；精子畸变试验等第三阶段：亚慢性毒性试验

90天喂养试验、繁殖试验、代谢试验第四阶段：慢性毒性试验（包括致癌试验）第一阶段：急性毒性试验：它是一次性投较大剂量后观察动物的变化，观察期大约为１周，从而判定动物的致死量（ＬＤ）和半致死量（ＬＤ５０）。半致死量是指实验动物死亡一半的投药量。如果投药量大于5000mg/kg，无死亡，可认为该品毒性较低，无需做致死量精确测定。半数致死量(LD50)与毒性分级毒性级别大鼠口服LD50

mg/kg相当于人的致死剂量

mg/kg相当于人的致死剂量

g/人极

毒

<1稍尝

0.05剧

毒

1—50

500—4000

0.5中等毒

51—500

4000—30000

5低

毒

501—5000

30000—250000

50实际无毒

5001—15000

250000—500000500无

毒

>15000

>500000

2500

第二阶段：遗传毒性试验，30天喂养试验，传统致畸试验遗传毒性试验的组合应该考虑原核细胞与真核细胞、体内试验与体外试验相结合的原则。从Ames试验或V79/HGPRT基因突变试验、骨髓细胞微核试验或哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验、TK基因突变试验或小鼠精子畸形分析（或睾丸染色体畸变分析试验）中分别各选一项。

①基因突变试验：鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验（Ames试验）为首选，其次考虑选用V79/HGPRT基因突变试验，必要时可另选其它试验。②骨髓细胞微核试验或哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验。③TK基因突变试验。④小鼠精子畸形分析或睾丸染色体畸变分析。⑤其它备选遗传毒性试验：显性致死试验、果蝇伴性隐性致死试验，非程序性DNA合成试验。⑥30天喂养试验。⑦传统致畸试验。第三阶段：亚慢性毒性实验：实验期在３个月左右，检验该品的毒性对机体的重要器官或生理功能的影响包括繁殖和致畸实验

第四阶段：慢性毒性实验：

考查少量该品长期对机体的影响，确定最大无作用量（ＭＮＬ），一般以寿命较短敏感的动物的一生为一个试验阶段，如用大白鼠试验２年小白鼠试验1.5年。可以按照新原料安全性毒理学试验项目的选择标准对转基因食品毒理学实验项目进行选择①无食用史需做四阶段试验②局部地区有食用史需做三阶段试验

其中，100倍<摄入量<300倍需做第四阶段试验③有食用史需做二阶段试验

经评价后下一阶段试验④广泛食用的原料二阶段试验（食用史包括地区、年代、人群、食用量、频率等情况）⑤已知化学物:

⑤-1可只做二阶段实验的包括已有权威机构进行系统的毒理学安全性评价有资料证明所用原料与其一致

⑤-2如试验结果与权威机构进行的评价不一致，需进入下阶段的试验⑥有新原料的食品:根据试验结果综合分析。重要毒理学实验项目急性经口毒性试验鼠伤寒沙门氏菌（Ames）试验骨髓细胞微核试验哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验小鼠精子畸形试验小鼠睾丸染色体畸变试验30天喂养试验我国对转基因生物及其产品的管理1993年科技部发布了《基因工程安全管理办法》，主要从技术角度对转基因生物进行宏观管理。1996年7月我国农