标准解读

《GB/T 25887-2010 奶牛脊椎畸形综合征检测 PCR-RFLP法》是一项国家标准，专门用于指导通过PCR-RFLP（聚合酶链反应-限制性片段长度多态性）技术来检测奶牛是否携带脊椎畸形综合征相关的遗传变异。该标准详细规定了从样本采集到结果分析的一系列步骤和技术要求，确保检测过程的准确性和可靠性。

首先，在样品采集方面，标准明确了采集对象应为待测奶牛的血液或组织样本，并且对样本保存条件提出了具体要求，以保证DNA的质量和完整性，这对于后续的PCR扩增至关重要。

接着是DNA提取环节，标准推荐使用酚/氯仿抽提法或其他有效方法从生物材料中提取基因组DNA。得到的DNA需经过定量测定后稀释至适当浓度，以便于进行下一步的PCR扩增实验。

对于PCR反应体系构建及条件设置，本标准提供了详细的指南，包括引物设计原则、退火温度选择等关键参数，这些都是为了能够特异性地扩增出与脊椎畸形综合征相关联的目标片段。

完成PCR扩增之后，将产物进行RFLP分析。这一步骤涉及到使用特定的限制性内切酶切割PCR产物，然后通过凝胶电泳分离不同大小的DNA片段。根据酶切图谱可以判断个体是否存在导致脊椎畸形综合征的突变位点。

最后，在结果判读阶段，标准给出了阳性、阴性以及杂合子状态的具体定义，并强调了重复实验的重要性，以提高检测结果的准确性。


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....

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  • 现行
  • 正在执行有效
  • 2011-01-10 颁布
  • 2011-06-01 实施
©正版授权
GB/T 25887-2010奶牛脊椎畸形综合征检测PCR-RFLP法_第1页
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文档简介

ICS6502030

B43..

中华人民共和国国家标准

GB/T25887—2010

奶牛脊椎畸形综合征检测PCR-RFLP法

MethodofPCR-RFLPfordetectingcomplexvertebralmalformationindairycattle

2011-01-10发布2011-06-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T25887—2010

前言

本标准的附录为规范性附录附录附录为资料性附录

B,A、C。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口

。

本标准起草单位华中农业大学

:。

本标准主要起草人张淑君杨利国李翔胡修忠刘文举宋利军

:、、、、、。

Ⅰ

GB/T25887—2010

奶牛脊椎畸形综合征检测PCR-RFLP法

1范围

本标准规定了奶牛脊椎畸形综合征的检测技术

PCR-RFLP。

本标准适用于奶牛脊椎畸形综合征的检测与诊断

。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注日期的引用文件其随后所有

。,

的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究

(),,

是否可使用这些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本适用于本标准

。,。

分析实验室用水规格和试验方法

GB/T6682

3术语和定义

下列术语和定义适用于本标准

。

31

.

奶牛脊椎畸形综合征complexvertebralmalformationindairycattleCVM

;

奶牛的一种常染色体隐性遗传病主要表现为母牛流产胎儿早期死亡出生后不久死亡患病犊牛

,、、,

主要症状表现为颈短脊椎畸形心脏畸形腿部畸形系部呈现对称的内向僵直等

:、、、、。

32

.

SLC35A3基因SLC35A3gene

定位于牛第号染色体上在基因序列数据库中的登录号为全长

3,(GenBank)AY160683,14901bp,

为由个外显子和个内含子组成该基因编码核糖转运蛋白与脊柱发育有关是奶牛

mRNA981bp,76,,,

脊椎畸形综合征的致病基因

。

33

.

限制性片段长度多态性restrictionfragmentlengthpolymorphismRFLP

,

检测用限制性内切酶酶切后形成的特定片段的大小因此凡是可以引起酶切位点变

DNADNA。

异的突变如点突变新产生和去除酶切位点和一段的重新组织如插入和缺失造成酶切位点间

()DNA(

的长度发生变化等均可导致的产生

)RFLP。

4原理

基因第四外显子中第位碱基由突变为时其对应编码的氨基酸由缬氨酸改变

SLC35A3559GT,

为苯丙氨酸导致奶牛脊椎畸形综合征的发生采用技术检测牛样本基因组变异即

,。PCR-RFLPDNA,

采用技术扩增基因片段限制性内切酶消化扩增产物电泳检测酶切产物对

PCRSLC35A3,PCR,,

基因进行分型根据基因型判定奶牛是否携带脊椎畸形综合征的致病基因

SLC35A3,。

5扩增SLC35A3基因片段的引入酶切位

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