GB/T 25878-2010对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)检测PCR法

ICS6502030

B41..

中华人民共和国国家标准

GB/T25878—2010

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒

IHHNV检测PCR法

()

PolmerasechainreactionPCRmethodforinfectioushodermaland

y()yp

haematooieticnecrosisvirusIHHNV

p()

2011-01-10发布2011-06-01实施

中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布

中国国家标准化管理委员会

GB/T25878—2010

前言

本标准的附录和附录为资料性附录

AB。

本标准由中华人民共和国农业部提出

。

本标准由全国水产标准化技术委员会归口

。

本标准起草单位中国水产科学研究院黄海水产研究所农业部全国水产技术推广总站

:、。

本标准主要起草人黄倢杨冰朱泽闻宋晓玲孙喜模赵红萍刘莉

:、、、、、、。

Ⅰ

GB/T25878—2010

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒

IHHNV检测PCR法

()

警告使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验本标准并未指出所有可能的安全问题

:,。

使用者有责任采取适当的安全和健康措施并保证符合国家有关法规规定的条件

,。

1范围

本标准规定了对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒聚合酶链式反应检测方法的

(IHHNV)(PCR)

原理所需试剂和材料仪器和设备操作步骤和结果判定

、、、。

本标准适用于对虾环境生物饵料生物和其他各种非生物样品中传染性皮下及造血组织坏死病毒

、、

的定性检测不适于对病毒量或感染活性的估测以及宿主感染程度的评估

(IHHNV)。。

2规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款凡是注日期的引用文件其随后所有

。,

的修改单不包括勘误的内容或修订版均不适用于本标准然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究

(),,

是否可使用这些文件的最新版本凡是不注日期的引用文件其最新版本适用于本标准

。,。

斑节对虾杆状病毒诊断规程第部分压片显微镜检查法

SC/T7202.1—20071:

斑节对虾杆状病毒诊断规程第部分检测法

SC/T7202.2—20072:PCR

3原理

31对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒及其流行特征

.

传染性皮下及造血组织坏死病毒

(infectioushypodermalandhaematopoieticnecrosisvirus,

粒子大小为是无囊膜二十面体在氯化铯中的浮力密度为含线

IHHNV)20nm~22nm,,1.40g/mL,

状单链长度为衣壳由个分子质量分别为的多肽组成

DNA,4.1kb,474kD、47kD、39kD、37.5kD。

可感染世界各地的养殖对虾其感染细角滨对虾Litopenaeusstylirostris会引起急性传

IHHNV,()

染病和高死亡率稚虾受到的危害最严重感染凡纳滨对虾Litopenaeusvannamei

(90%),。IHHNV()

会引起慢性矮小残缺综合症主要影响是患病对虾生长缓慢畸形受感染存活对虾终生带毒

“”(RDS),,,,

通过垂直和水平传播

。

32技术原理

.

的聚合酶链式反应是以的一段个碱基

IHHNV(polymerasechainreaction,PCR)IHHNV389(b)

长度的特异性序列作为模板以与模板两端序列互补的一对特异性寡核苷酸序列作为引物在四

DNA,,

种脱氧核糖核苷三磷酸存在下利用依赖的聚合酶的合成作用经过数十次变性退火和延

,DNADNA,、

伸的反应循环使模板上介于两个引物之间的片段得到特异性地级数扩增再通过电泳等手段检

,DNA,

测到被特异性扩增的片段从而揭示微量的存在

,IHHNVDNA。

4试剂和材料

41所需试剂除引物阳性对照和阴性对照以外按照中第章的规定

.、,SC/T7202.2—20075。

42引物保存

.100ng/μLF:5′-CGG-AAC-ACA-ACC-CGA-CTT-TA-3′,-20℃。

43引物保存

.100ng/μL