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文档简介
有关核酸提取与鉴定的最基本实验2021/6/201哺乳动物细胞总RNA的提取与纯化经典方法:异硫氰酸胍-酸酚法实验原理:高浓度强变性剂异硫氰酸胍作用:a.可使细胞结构迅速破坏,释放出RNA,包括核糖体RNA。b.使RNA酶失活,使释放出的RNA不被RNA酶降解。采用酸性苯酚/氯仿/异戊醇抽提细胞裂解物时,蛋白质变性不溶,而在酸性pH条件下,DNA溶于酚相中,RNA仍留于水相中。取水相用冰异丙醇沉淀,70%乙醇洗涤晾干后即可得到高质量总RNA。商品化方法:trizol法2021/6/202trizol法实验步骤1.提取组织RNA时,每50~100mg组织(已研磨成粉沫)用1mlTrizol试剂进行裂解;提取细胞RNA时,先离心沉淀细胞,每5-10×106个细胞加1mlTrizol后,反复用枪吹打或剧烈振荡以裂解细胞;2.将上述组织或细胞的Trizol裂解液转入EP管中,在室温15~30℃下放置5分钟;3.在上述EP管中,按照每1mlTrizol加0.2ml氯仿的量加入氯仿,盖紧管口,用力震荡15秒,室温下(15℃~30℃)放置2~3分钟,12000g(2℃~8℃)离心15分钟;2021/6/2034.取上层水相置于新EP管中,按照每1mlTrizol加0.5ml异丙醇的量加入异丙醇,在室温下(15℃~30℃)放置10分钟,12000g(2℃~8℃)离心10分钟;5.弃上清,按照每1mlTrizol加1ml75%乙醇进行洗涤,涡旋混合,7500g(2℃~8℃)离心5分钟,弃上清;6.沉淀的RNA在室温下自然干燥数分钟,用Rnase-freewater溶解RNA沉淀。2021/6/204病毒RNA的提取1、取鸡胚尿囊液,加入5-10倍体积Trizol液,混匀;2、室温放置5分钟,然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,盖紧管口,用手剧烈摇荡离心管15秒;3、取上层水相于新EP管,按每1mlTrizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇,室温放置10分钟,12000g离心10分钟;2021/6/2054、弃去上清液,按每1mlTrizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇,混匀,4℃下7500g离心5分钟;5、重复第4步;6、小心弃去上清液,然后室温干燥5-10分钟,注意不要干燥过分,否则会降低RNA的溶解度;7、将RNA溶于Rnase-freewater中,紫外定量。2021/6/206附:磁珠分离mRNA试剂盒1、1.5mlEP管中加入500µL待提取样品,加入400µL核酸提取液,震荡10秒;2、将EP管置于60℃保温10分钟;
3、将EP管置于室温放置10分钟,转移到磁珠分离器上,静置5分钟;待磁珠吸附于管壁后,吸净管中的气泡和液体,保留磁珠;4、向管中加入1ml洗涤液,取下后震荡10秒,再置于磁珠分离器上,静置5分钟;重复步骤3,共用洗涤液漂洗2次,最后尽量吸净液体;2021/6/207
5、若后续试验无特殊要求,加入50µLDEPC处理H2O,震荡,使磁珠悬浮即可;
6、若需要将磁珠洗脱下来,可向管中加入50ul洗脱液(DEPC处理H2O或Long-termRNAStorageBuffer),取下并震荡10秒,再将管置于恒温装置上60℃保温5分钟;
7.立即将上述EP管重新置于磁珠分离装置上,静置3分钟,保持样品处理管于磁珠分离装置上,取出清液(弃磁珠),即为提取的RNA。2021/6/208RNA抽提注意事项1、器皿处理,塑料用DEPC浸泡,玻璃用高温处理。2、样本要求:新鲜。3、操作温度:尽可能在低温下操作,如液氮里或冰浴上。4、操作过程防污染(口罩手套、环境干净)。5、每一步操作注意点:匀浆(完全)萃取(吸取上层的60%-70%)沉淀、洗涤按操作规程干燥(不能用真空干燥,要自然干燥)6、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上,RNA在70%乙醇中可在4℃保存一周,-20℃保存一年。2021/6/209细菌质粒DNA的提取与纯化2021/6/2010细菌的收获收获1)将2ml含抗生素的LB加入到容量为15ml并通气良好(不盖紧)的试管中,然后接入一单菌落,于30℃剧烈振摇下培养过夜。2)将1.5ml培养物倒入EP管中,于4℃以12000g离心60秒。3)吸去培养液,使细菌沉淀尽可能干燥,注意吸头远离细菌沉淀。2021/6/2011细菌质粒DNA的提取与纯化(碱裂解法)1)将细菌沉淀,所得重悬于100µL用冰预冷的溶液I中,剧烈振荡。溶液I50mmol/L葡萄糖25mmol/LTris.Cl(pH8.0)10mmol/LEDTA(pH8.0)溶液I可成批配制,每瓶约100ml,在10lbf/in2(6.895×104Pa)高压下蒸气灭菌15分钟,贮存于4℃。须确使细菌沉淀在溶液I中完全分散,将两个微量离心管的管底部互相接触震荡,可使沉淀迅速分散。2021/6/20122)加200µL新配制的溶液Ⅱ。溶液Ⅱ0.2mol/LNaOH(临用前用10mol/L贮存液现用现稀释)、1%SDS盖紧管口,快速颠倒离心管5次,以混合内容物。应确保离心管的整个内表面均与溶液Ⅱ接触。不要振荡,将离心管放置于冰上。3)加150µL用冰预冷的溶液Ⅲ溶液Ⅲ5mol/L乙酸钾60ml冰乙酸11.5ml水28.5ml盖紧管口,将EP管倒置后振荡10秒钟,溶液Ⅲ在粘稠的细菌裂解物中分散均匀,之后将管置于冰上3-5分钟。2021/6/20134)用微量离心机于4℃12000g离心5分种,将上清转移到新EP管中。5)可做可不做:加等量酚:氯仿,振荡混匀,于4℃以12000g离心2分钟,将上清转移到另一新EP管中。有些工作者认为不必用酚:氯仿进行抽提,然而由于一些未知的原因,省略这一步,往往会影响限制酶切反应。6)用2倍休积的乙醇于室温沉淀DNA.振荡混合,于室温放置2分钟。7)用微量离心机于4℃以12000g离心5分钟。8)小心吸去上清液,将EP管倒置于一张纸巾上,以使所有液体流出,将附于管壁的液滴除尽。注意吸头远离核酸沉淀。9)用1ml70%乙醇于4℃洗涤双链DNA沉淀,按步骤8)所述方法去掉上清,在空气中使核酸沉淀干燥10分钟。2021/6/2014碱裂解法提取细菌质粒DNA的原理溶液Ⅰ:悬浮50mmol/L葡萄糖25mmlol/LTris·Cl(PH8.0)10mmol/LEDTA(PH8.0)在10lbf/in2(6.895×104pa)高压下蒸汽灭菌15分钟,贮存于4℃溶液I的作用:50mM葡萄糖:加了葡萄糖后悬浮后的大肠杆菌不会快速沉积到管子的底部Tris-Cl溶液:控制好溶液的pHEDTA:是Ca2+和Mg2+等二价金属离子的螯合剂2021/6/2015溶液Ⅱ:裂解0.4mol/LNaOH2%SDS临用前配制,1:1混合破细胞壁的主要是碱,而不是SDS,所以才叫碱法抽提。NaOH是最佳的溶解细胞的试剂,不管是大肠杆菌还是哺乳动物细胞,碰到了碱都会几乎在瞬间就溶解,这是由于细胞膜发生了从bilayer(双层膜)结构向micelle(微囊)结构的相变化所导致。SDS:结合蛋白质2021/6/2016溶液Ⅲ:沉淀5mol/L乙酸钾60ml冰乙酸11.5ml水28.5ml溶液Ⅲ加入后,钾离子置换了SDS中的钠离子形成了不溶性的PDS,而SDS由于与蛋白质结合,钾钠离子置换所产生的大量沉淀将绝大部分蛋白质沉淀了,大肠杆菌的基因组DNA因为与蛋白质结合也一起被共沉淀了。2M的醋酸:中和氢氧化钠,因为长时间的碱性条件会打断DNA,基因组DNA一旦发生断裂,只要是50-100kb大小的片断就没有办法再被PDS共沉淀了。2021/6/2017由于还有很多蛋白质不能被沉淀,因此要用酚/氯仿/异戊醇进行抽提:1、酚:萃取蛋白2、氯仿:调节液体密度3、异戊醇:消泡剂。2021/6/2018回收后的水相含有足够多的盐,因此只要加入2倍体积的乙醇。高浓度的盐会水合大量的水分子,因此DNA分子之间就容易形成氢键而发生沉淀。如果感觉发生了盐的沉淀,就用70%的乙醇多洗几次。2021/6/2019操作注意事项第一步:混匀要完全。第二步:时间不能过长,千万不要这时候去接电话,因为在这样的碱性条件下基因组DNA片断会慢慢断裂;必须温柔混合,不然基因组DNA的断裂会导致抽提的质粒纯度大幅下降。第三步:冰上操作,严格按操作规程做。2021/6/20201.此法制备的高拷贝数质粒产量一般约为:每毫升原细菌培养物3-5μg。2.如果要通过限制酶切割反应来分析DNA,可取1μlDNA溶液加到另一含8μl水的微量离心管内,加1μl10×限制酶缓冲液和1单位所需限制酶,37℃温育1-2小时。将剩余的DNA贮存于-20℃。3.此方法按比例放大可适用于100ml细菌培养物。2021/6/2021细菌基因组DNA提取纯化CTAB/NaCl法:细菌基因组DNA的制备
一、材料
细菌培养物。
二、试剂
1、CTAB十六烷基三甲基溴化铵/NaCl溶液:4.1g
NaCl溶解于80ml
H2O,缓慢加入10g
CTAB,加水至100ml。
2、其它试剂:氯仿:异戊醇(24:1),酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),异丙醇,70%
乙醇,TE,10%
SDS,蛋白酶
K
(20mg/ml或粉剂),5mol/L
NaCl。2021/6/20221、将菌株接种于LB培养基,37℃震荡培养过夜。2、取1.5ml培养物12000r/min离心2min。3、弃上清,沉淀物中加入567µL的TE缓冲液,反复吹打使之重新悬浮,加入30µL10%SDS和15ul的蛋白酶K,混匀,于37℃温育1h.4、加入100µL5mol/LNaCl,充分混匀,再加入80ulCTAB/NaCl溶液,混匀后于65℃温育10min。
5、加入等体积的酚/氯仿/异戊醇混匀,离心4-5min,将上清转入新EP管中,加入0.6-0.8倍体积的异丙醇,轻轻混合直到DNA沉淀下来,沉淀可稍加离心。6、沉淀用1ml的70%乙醇洗涤后,离心弃乙醇。2021/6/2023哺乳动物细胞DNA的提取与纯化盐析法原理:细胞中的DNA和RNA分别与蛋白质相结合,形成脱氧核糖核蛋白及核糖核蛋白。在细胞破碎后,这两种核蛋白将混杂在一起。因此,要制备DNA首先要将这两种核蛋白分开。已知这两种核蛋白在不同浓度的盐溶液中具有不同的溶解度,如在0.15mol/LNaC1的稀盐溶液中核糖核蛋白的溶解度最大,脱氧核糖核蛋白的溶解度则最小(仅约为在纯水中的1%);而在lmol/LNaCl的浓盐溶液中,脱氧核糖核蛋白的溶解度增大,至少是在纯水中的2倍,核糖核蛋白的溶解度则明显降低。根据这种特性,调整盐浓度即可把这两种核蛋白分开。因此,在细胞破碎后,用稀盐溶液,反复清洗,所得沉淀即为脱氧核糖核蛋白成分。2021/6/2024分离得到的脱氧核糖核蛋白,用十二烷基硫酸钠(SDS)使蛋白质成分变性,使DNA游离出来,再用含有异戊醇的氯仿沉淀除去变性蛋白质。最后根据DNA只溶于水而不溶于有机溶剂的特点,加入95%的乙醇即可从溶液中把DNA沉淀出来,获得产品。2021/6/2025细胞破碎时,细胞内的脱氧核糖核酸酶(DNase)立即开始降解DNA,如不及时采取抑制措施,最后将会得不到任何DNA。为此,如在本实验中加入柠檬酸盐、EDTA等螯合剂以除DNase必需的Mg2+离子,使DNase活性降低,并要求整个操作均在4℃以下进行,最后加入SDS使所有的蛋白质(包括DNase)变性。如果希望获得更大分子的DNA,则在细胞破碎后,及时加入SDS使蛋白质(包括DNase)变性,并加入蛋白酶K,降解所有的蛋白质成为碎片或氨基酸,及时阻止DNase的降解作用。2021/6/2026DNA分子很大、很长,在水中呈黏稠状,但DNA链的双螺旋结构不宜小角度的折叠,使之DNA分子具有刚性,即分子是僵直的(stiff),小角度的折叠和压挤等剪切力,将使DNA断裂成碎片。为保证获得大分子DNA,操作时应避免剧烈振摇,或过大的离心力。转移吸取DNA时不可用过细的吸头,不可猛吸猛吹,更不能用细的吸头反复吹吸。2021/6/2027试剂及器材(1)0.15mol/LNaCl–0.015mol/LpH7.0柠檬酸钠溶液:称取8.77gNaCl,4.41g柠檬酸三钠(Na3C6H507·2H20),用约800ml蒸馏水溶解,调节pH至7.0,最后定容至1000ml。(2)0.15mol/LNaCl–0.1mol/LEDTANa2溶液:称取8.77gNaCl,37.2gEDTANa2溶于约800ml蒸馏水中,以NaOH调pH至8.0,最后定容至1000ml。(3)5%(W/V)十二烷基硫酸钠(SDS)溶液:称取5gSDS溶于45%(V/V)100ml的乙醇中。
(4)氯仿–异戊醇溶液:按氯仿:异戊醇=24:1配制。5)pH8.0TE缓冲液或0.01mol/LNaOH:120mol/LTris–HCl,lmol/LEDTANa2。或取NaOH0.4g加蒸馏水至1000ml。
(6)95%(V/V)乙醇1000ml。(7)75%(V/V)乙醇1000ml。(8)组织捣碎机。(9)玻璃匀浆器。(10)冷冻离心机。(11)冰、粗盐。2021/6/2028实验步骤(1)本实验以兔肝脏作材料(其他动物肝脏也可)。实验前将兔饥饿24h以上,以避免糖原的干扰。(2)用烧杯(500ml)装1/3体积的冰,加入少量水及约20g食盐,制成冰盐水。(3)将经过饥饿的兔颈部放血致死,迅速开腹取出肝脏,称取约10g浸入在冰盐水预冷的0.15mol/LNaCl–0.015mol/L柠檬酸钠溶液中。除去脂肪、血块等杂物,再用少量溶液反复洗涤几次,直至组织块无血为止。(4)将洗净的组织剪成碎块。先加入20ml0.15mol/LNaCl–0.015mol/L柠檬酸钠溶液,放在组织捣碎机中迅速捣成匀浆,再放入玻璃匀浆器中匀浆2~3次,使细胞充分破碎。最后加入0.15mol/LNaCl–0.015mol–L柠檬酸钠溶液至50ml。(5)匀浆液于4℃6000r/min离心15min,弃上清。在沉淀中加入4倍体积冷的0.15mol/LNaCl–0.015mol/L柠檬酸钠溶液,搅匀,按上述条件,离心弃上清。如此重复操作2~3次。最后弃去上清,留沉淀。2021/6/2029(6)将沉淀物(约5m1)悬浮于5倍体积的pH8.0,0.015mol/LNaCl–0.1mol/L
EDTANa2溶液中,搅匀,然后边搅拌边慢慢滴加5%SDS溶液,直至SDS的最终浓度达1%为止(应加多少毫升?)。(此时溶液变得十分黏稠,若不黏稠应重做。)然后,加入固体NaCl使最终浓度达1mol/L。继续搅拌30~45min,以确保NaCl全部溶解,此时可见溶液粘稠度下降。(7)将上述混合溶液倒于一个300ml的带塞三角瓶中,加入等体积的氯仿–异戊醇,振荡10min。室温3000r/min离心10min(为什么可以在室温操作?),此时可见离心液分为3层:上层为水溶液,中层为变性蛋白块,下层为氯仿–异戊醇。小心吸取上层水相,记录体积,放入三角瓶中,向水相中加入等体积氯仿–异戊醇,振荡,离心,如此重复抽提2–3次,除净蛋白质。(8)最后1次离心后,小心吸取上层溶液(不要吸取下层氯仿),记录体积,放入干燥小烧杯中,加入2倍体积预冷的95%乙醇。边加边用玻璃棒慢慢搅拌,随着乙醇的不断加入可见溶液出现黏稠状物质,将黏稠丝状物尽可能多的缠在玻璃棒上。黏稠丝状物即是DNA。(9)将所得的DNA从玻璃棒上取下,用75%乙醇洗2次,置于干燥器中抽干,称取重量,计算产率。(10)按200μg/ml的浓度称取一定量DNA,溶于0.01mol/LNaOH溶液或pH8.0TE缓冲液中(干燥DNA不易溶解,应在测定前几天预先溶解)。2021/6/2030有机溶剂抽提法1、切取组织5g左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越好)。
2、倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。
3、加1ml
10%
SDS,
混匀,此时样品变得很粘稠。
4、加50ul或1mg
蛋白酶
K,
37℃保温1-2h,
直至组织完全溶解。
5、加1ml
5mol/L
NaCl,
混匀,5000rpm离心数秒钟。
6、取上清液于新EP管中,用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提。待分层后,3000rpm离心
5分钟。
7、取上层水相至另一新EP管,
加2倍体积乙醚抽提(在通风橱中)。
8、移去上层乙醚,保留下层水相。
9、加1/10
体积3mol/L
NaAc,
及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。室温下静置10-20分钟,DNA沉淀形成白色絮状物。
10、用玻璃棒钩出DNA沉淀,70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1ml
TE中,-20℃保存。
11、如果DNA溶液中有不溶解颗粒,可在5000rpm短暂离心,取上清;
如要除去其中的RNA,可加5µL
RNaseA(10μg/µL),
37℃保温30分钟,
用酚抽提后,
按步骤9-10重沉淀DNA。
2021/6/2031SDS法实验原理:DNA主要存在于细胞核中。通过研磨和SDS作用破碎细胞;苯酚和氯仿可使蛋白质变性,用其混合液(酚:氯仿:异戊醇)重复抽提,使蛋白质变性,然后离心除去变性蛋白质;RNase降解RNA,从而得到纯净的DNA分子。
2021/6/2032试剂配制1、Tris–HCL1mol/LPH8.050ml
40mlddH2O,6.057g固体Tris放入烧杯中溶解,用浓盐酸调PH值到8.0,ddH2O定容至50ml,高压灭菌后,降至室温,4℃保存备用。
2、生理盐水:0.85%NaCL100ml
在20mlddH2O中溶解0.85g固体NaCL,定容至100ml,摇匀后,贴上标签,高压灭菌后,降至室温,4℃保存备用。
3、EDTA0.5mol/LPH8.050ml
将9.08g的EDTA·Na2·2H2O溶解于40mlddH2O,用1g的NaOH颗粒(慢慢加入)调PH值到8.0,定容至50ml,如果EDTA难溶,先加NaOH溶解,然后逐步加EDTA·Na2·2H2O。
4、TES缓冲液(释放DNA)100ml
将0.5844g的5mol/lNaCl溶解于80mlddH2O,在分别加入1ml的0.5mol/lEDTA、0.2ml的Tris-HCl(pH=8.0),加定容至100ml,摇匀后,贴上标签,高压灭菌后,降至室温,4℃保存备用。
2021/6/20335、10%SDS(变性剂破细胞壁)100ml
将10g的十二烷基硫酸钠(SDS)溶解于80mlddH2O中,于68℃加热溶解,用浓HCl调至PH=7.2,定容至100ml,摇匀后,贴上标签,4℃保存备用。
6、蛋白酶K(降解蛋白质):20mg/mL无菌三蒸水溶解。
7、RNA酶(降解RNA):将胰RNA酶(RNA酶A)溶于10mmol/L的Tris·CL(PH7.5)、15mmol/LNaCL中,配成10mg/ml的浓度,于100℃加热15min,缓慢冷却至室温,分装成小份存于–20℃。
8.氯仿:异戊醇=24:1100ml
按24:1的比例加入氯仿、异戊醇,摇匀,转到准备好的瓶中,贴上标签,4℃保存备用。
9.TE缓冲液(溶解DNA)PH8.050ml
将0.5ml的10mmolTris-HCl(PH8.0)、0.1ml的0.5mol/lEDTA(PH8.0)加入到50ml的容量瓶中,调PH8.0定容至50ml摇匀后,贴上标签,高压灭菌后,降至室温,4℃保存备用。
2021/6/2034实验步骤1.组织块解冻,用生理盐水洗去血污,剪取约0.5g组织,放入1.5mlEP管中,剪碎。
2.加入0.45mlTES混匀,再加入50ulSDS(10%),5.0ul蛋白酶K(20mg/ml),充分混匀后,于56°C保温4-6h,每2h摇1次。
3.于室温加入等体积饱和酚(500ul),颠倒混匀,10000r/min离心10min,分离水相和有机相,小心吸取上层含DNA的水相到新的1.5mlEP管。
4.加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),颠倒混匀,10000r/min,离心10min,取上层转移到新的1.5mlEP管中。
5.加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),颠倒混匀,10000r/min,离心10min,取上清液到新的1.5mlEP管中。
6.加入2.5倍体积的-20°C预冷的无水乙醇沉淀DNA,观察现象。
7.12000r/mim,离心10min,弃乙醇。
8.-20°C保存的75%乙醇洗涤,10000r/min,离心5分钟,去乙醇,55°C干燥DNA。
9.加入适量TE溶解DNA(根据DNA的量),-20°C保存备用。2021/6/2035注意事项1.抽提每一步用力要柔和,防止机械剪切力对DNA的损伤。
2.取上层清液时,注意不要吸起中间的蛋白质层。
3.乙醇漂洗去除乙醇时,不要荡起DNA。
4.离心后,不要晃动离心管,拿管要稳,斜面朝外。2021/6/2036核酸样品纯度测定DNA模板的纯度、含量测定260nm1OD双链DNA50μg/ml单链DNA40μg/mlOD260nm/OD280nm≈1.8RNA模板的纯度、含量测定260nm1OD单链RNA40μg/mlOD260nm/OD280nm≈2.02021/6/2037DNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理带电粒子在电场中可以按固定方向移动的现象,称为电泳。DNA分子在pH值高于其等电点的缓冲液中带负电荷,在电场中向正极移动,缓冲液pH值偏离等电点愈远,其所带的电荷愈多。在一定的电场强度下,不同的DNA片段的迁移速度不一样。其迁移速度主要取决于DNA的分子大小、所带电荷量等,分子量愈小、带电荷量愈多,迁移速度愈快,相同分子量的不同构型的DNA分子,其迁移速度也不一样。超螺旋质粒DNA的泳动速度最快,线状质粒DNA次之,复制中间体质粒DNA泳动速度最慢。另外,同一种DNA分子,在高浓度琼脂糖胶中泳动速度较慢,在低浓度琼脂糖胶中泳动速度较快。2021/6/2038实验步骤1、琼脂糖胶液的制备:称取1g琼脂糖,置于三角烧瓶中,加入100mlpH8.3Tris-硼酸EDTA缓冲液,加热,琼脂全部融化后溶液变澄清,取出摇匀,即为1%琼脂。(也可加溴化乙啶2.5ul)
2、凝胶板的制备
用橡皮膏将凝胶塑料托盘短边缺口封住,置工作台面上(将样品槽模板(即梳子)插进托盆长边上的凹槽内(距一端约1.5cm),梳子底边与托盘表面保持0.5一1mm的间隙。待琼脂糖冷至65℃左右,加入4μl荧光指示剂。混匀后小心地倒入托盘内,使凝胶缓慢地展开直至在托盘表面形成一层厚度均匀胶层.其内不存有气泡.室温下静置0.5一lh。待凝固完全后,在梳齿附近加入少量缓冲液润湿凝胶,双手均匀用力轻轻拔出样品槽模板(注意勿使样品槽破裂)。2021/6/20393、取下封边的橡皮膏,将凝胶连同托盘放人电泳槽中,用缓冲液先填满加样槽,防
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