液相色谱常见问题及处理方法(LC-MS)

1.高效液相色谱分析方法的建立2.高效液相色谱仪常见问题及处理方法3.制备型高效液相色谱技术4.高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）1高效液相色谱仪常见问题

及处理方法2吸滤头单向阀柱塞密封圈线路过滤器手动/自动进样器检测器泵系统3材料：不锈钢烧结，孔径10μm故障：堵塞表现：管路中不断有气泡生成措施：用5％～20％的稀硝酸，超声波清洗，再用蒸馏水清洗注意点：吸滤头拆下时不得将塑料管剪断一、吸滤头4二、高压泵5单向阀结构吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头抛光面透明塑料垫片宝石球流动相单向阀原理吸液冲程排液冲程出口单向阀进口单向阀泵头1.单向阀6故障1：宝石球粘附于垫片表现：泵无法吸液或排液，流路不通，柱压低或没有。措施：1）用针筒抽单向阀的出口以产生负压，使宝石球与垫片分开2）拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗故障2：宝石球或塑料垫片受污导致密封不好。表现：系统压力波动大措施：拆下单向阀，放入异丙醇或水中，用超声波清洗。常见故障：7故障：密封圈磨损而导致密封不良现象：系统压力波动大或漏夜措施：更换密封圈注意点：更换密封圈拆卸泵头前，柱塞杆复位（P－SET）2.柱塞密封圈流动相泵头清洗管路柱塞杆密封圈8三、手动进样阀91.构造及使用原理10故障1：转子密封损坏现象：漏液原因：

a拧的太紧b样品太脏（过滤不充分）c针头损坏或未使用液相色谱专用注射器解决措施：更换转子密封，并在使用时注意保养。故障2：载样困难原因：定量环堵塞解决措施：清洗或更换定量环2.常见故障11样品过滤：12故障：系统压力过高、峰型变差（拖尾峰、前沿峰、分叉峰），保留时间改变等。解决措施：清洗、填补、更换正相柱清洗溶剂：

正庚烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、乙醇等反相柱清洗溶剂：：

甲醇、乙腈、氯仿、异丙醇、0.05mol/L稀硫酸注意：应排除操作不当引起的假象。四、色谱柱13色谱柱的维护1.在使用新柱之前，最好用强洗脱溶剂在低流量下(0.2-0.3ml/min)冲洗30min，长时间未用的分析柱也要同样处理。2.定期使用强洗脱溶剂冲洗柱子。3.使用缓冲盐作为流动相后，要先用水（含有少量甲醇5~10%）冲洗，再用有机溶剂（甲醇）冲洗。4.净化样品。5.分离条件优化（防止鬼峰出现）。6.不使用时，两头要盖上盖子，避免固定相干枯。7.使用预柱。8.避免流动相组成及极性的剧烈变化（梯度洗脱）9、避免压力脉冲的剧烈变化14肩峰或分叉峰产生的原因：1.柱子劣化（柱头处产生不均匀的空隙）2.样品变化（生成氧化物、分解物等）判断标准：

所有的峰都产生有肩峰或分叉时则为柱子劣化。延长柱寿命方法：（更新）

1、倒（反）冲柱2、换过滤片3、修补柱头

15柱的补修填料的取出16恢复实例171.更换氘灯（紫外检测器）

判断氘灯能量：设定220nm波长，检查参比池能量，如能量低于800，需更换氘灯。（详细参照说明书）操作注意点：

不要用手直接接触氘灯表面五、检测器2.清洁样品池表现：样品池和参比池能量相差较大；检查方法：不同的仪器有具体的检查方法；措施：用针筒注入异丙醇，清洗样品池；如污染严重，拆开样品池，将透镜等放入异丙醇中超声波清洗。181.溶剂的过滤滤膜类型：

聚四氟乙烯滤膜：适用于所有溶剂，酸和盐。醋酸纤维滤膜：不适用于有机溶剂，特别适用于水基溶剂。

尼龙66滤膜：

适用于绝大多数有机溶剂和水溶液，可以用于强酸，不适用于二甲基甲酰胺。

再生纤维素滤膜：蛋白吸收低，适用于水溶性样品和有机溶剂。六、其他问题191）泵中气泡使液流波动，改变保留时间和峰面积；2）柱中气泡使流动相绕流，峰变形；3）气泡过多可使泵压力不稳甚至停止工作；4）检测器中的气泡产生基线波动，①示差折光检测器——使折射率变化②UV检测器（200nm以下）——溶解氧气有吸收③荧光检测器——溶解氧气有荧光猝灭作用2.脱气：除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡。气泡对测定的影响：脱气的方法1.超声波脱气法2.使用氟树脂膜的减压脱气法20氟树脂膜真空室往送液泵真空泵控制器流动相使用氟树脂膜的减压脱气法213.缓冲液选择缓冲液的步骤1、确定最佳分离状态时的流动相pH；2、选择具有与流动相的pH相近的pKa的缓冲液（即使浓度稀也具有较强的缓冲能力）；3、确认检测波长下缓冲液是否有较大的吸