病原真菌及检验技术

病原真菌及检验技术一、感染性病原真菌1、组织胞浆菌属本属为典型的双相型真菌，37C呈酵母样细胞，25C培养形成菌丝体。重要的致病菌有荚膜组织胞浆菌及假皮疽组织胞浆菌，分别致犬、猫肉芽肿及马的淋巴管炎。①荚膜组织胞浆菌引起人兽共患病是致犬、猫和人常发的高度接触性传染性组织胞浆菌病。严重者，可损伤全身器官。淋巴瘤、白血病、霍奇金病、AIDS或用肾上腺皮质激素治疗者常可感染本菌。主要侵犯网状内皮系统，寄生在网状内皮细胞的胞浆内，使感染组织形成肉芽肿。奶牛、马、羊、猪及啮齿类动物也可自然感染，小鼠易感染。微生物特性在巨噬细胞和网状细胞内寄生时呈细小的、包有荚膜的圆球样细胞，直径I〜3卩m。在陈旧的病灶内，菌体较大，胞浆浓缩于菌体中央，与细胞壁之间出现一条空白带。22〜25C培养时，在培养基上缓慢形成丝状菌落，开始为白色，逐渐变为棕黄色。菌丝分支分隔，宽 2.5卩m产生椭圆形光滑或多刺小分生孢子， 直径2.5~3卩m随后可产生圆形或椭圆形大分生孢子，称棘状厚壁大孢子，直径8〜15卩m表面光滑、均匀间隔的，像手指一样凸起，是本菌的特征性形态.在高湿、高浓度的二氧化碳中37C培养时，在营养丰富的血培养基上，可形成湿润、有光泽、表面有皱褶的细小酵母样菌落；在肉汤中呈絮团状生长，镜检可见分支分隔的菌丝和少量孢子。镜检如发现特征性的棘厚壁大孢子，可做出诊断

活体病变组织末梢血及骨髓触片或涂片瑞氏染色，在单活体病变组织末梢血及骨髓触片或涂片瑞氏染色，在单核细胞或多形核细胞中如有小的、 呈洋葱切面样卵圆形孢子，亦可做出诊断。病料接种小鼠可引起发病死亡，并可检出本菌。补体结合反应一般在发病后2〜3周呈阳性反应。皮内变态反应试验可用于犬感染的流行病学调查。亦可采用PCR和核酸探针技术鉴定，微生物检验标本直接显微镜检查痰液标本涂片后先用甲醇固定 10min，再用姬姆萨染色镜检，如巨噬细胞发现卵圆形孢子，直径 2〜4卩的较小，一端有出芽，可疑为荚膜组织胞浆菌。抗原检测取患者痰液作免疫荧光法染色后镜检， 可快速检测其抗原，但特异性差，仅作组织胞浆菌初筛试验。(3)分离培养一一两相型将临床标本接种于含抗生素的沙氏培养基上， 25C培养，生长缓慢，4〜6周才开始生长，逐渐形成白色至棕色绒毛状菌落。当转种于血琼脂培养基上， 37C很快形成酵母型菌落。鉴定 生化反应取可疑菌落涂片染色镜检，并作脲酶试验和明胶液化试验。荚膜组织胞浆菌分解尿素；不能液化明胶。药物敏感试验组织胞浆菌对两性霉素B、酮康唑、伊曲康唑敏感。抗体检测检测血清中组织胞浆菌抗体，以补体结合试验的敏感性和特异性最高，发病2-3周阳性率可达90%，有判定价值。补体结合试验的抗体效价在1： 32以上为阳性，抗体效价4倍增长，可有助于确诊。乳胶凝集试验时，抗体效价为 1:32时可确诊。②假皮疽组织胞浆菌马属动物流行性淋巴管炎的病原， 特征为皮下淋巴管和淋巴结发炎、肿胀和皮肤溃疡。在自然情况下，马、 骡最易感，驴次之；人、犬、骆驼、牛、猪很少感染；家兔、豚鼠人工感染可引起局部脓肿。微生物特性在脓汁中该菌呈卵圆形或瓜子形， 是具有双层膜的酵母样细胞。大小为2〜3卩mK3〜5卩m一端或两端较尖，多单在或2~3个排列，菌体胞浆均匀，可见2~4个圆形、呈回旋运动的小颗粒。在培养物中呈菌丝状，分支分隔、粗细不匀，菌丝末端形成瓶状假分生孢子。本菌为需氧菌，最适生长温度25~30C,最适生长pH5〜9,常用培养基有1%葡萄糖甘露醇甘油琼脂、2%葡萄糖甘油琼脂等。不发酵多种糖类，不产生靛基质和 H2S,VP试验阴性，能凝固石蕊牛乳，液化明胶。取脓汁或分泌物，适当稀释、镜检，或取痂皮，加10%KOH处理透明后，制片镜检。必要时可进行分离培养，病料应先用青、链霉素处理12h后再接种。长出典型菌落时，用生理盐水制成悬液，接种家兔或豚鼠，观察有否脓肿，作为诊断参考。可根据是否产生变态反应做出诊断。 方法是用该菌的培养物颈部皮内注射，48〜72h后测定皮肤增厚及肿胀性质，如注射局部发生硬固的热痛肿胀，皮肤增厚超过5mm即为阳性。此法特异性强，检出率高达 80%以上。应用经高压后酒精或乙醚提取的抗原进行沉淀反应、 补体结合反应检查马血清中的抗体，也是有效的诊断方法。2、念珠菌属该菌属半知菌纲的酵母菌念珠菌属有150多个种，仅白色念珠菌是常见的病原，致人和动物的念珠菌病。白色念珠菌存在于人和动物消化道、 呼吸道和泌尿生殖道的黏膜，是机会致病菌，患念珠菌病的动物多在消化道黏膜形成乳白色伪膜斑坏死物，主要侵害家禽，特别是雏鸡。牛、猪、犬和啮齿动物也可能感染。白色念珠菌致病性条件致病皮肤粘膜感染鹅口疮，阴道炎内脏感染：肺炎、关节炎、膀胱炎，肾盂肾