临床免疫学检验：17 移殖免疫及检测

第二十六章移植免疫及其免疫检测P339第一节移植免疫学transplantationimmunology一.概述

器官移植成功于20世纪50年代除大脑外，其他器官均有移植的例子器官移植的发展依赖于：显微外科技术、脏器冻存技术、移植免疫学理论和技术（一）概念移植（transplantation）：

把具有正常结构和功能的器官或细胞种植到另一部位或个体，以替代功能已衰竭了的器官或细胞，借以恢复和重建机体生理功能的技术，这一过程叫移植。移植已成为临床上重要的治疗手段之一。

（二）移植的种类

按移植物来源不同及供、受体基因的差异分为四类移植类型与移植物间的关系

基因型个体种系移植物命运临床病例自体移植同同同长期存活自体植皮同基因移植

同异同长期存活同卵双生间肾移植同种异体移植异异同无免疫学措施短期内被排斥异种移植异异异迅速排斥临床上大多数器官移植二.排斥反应的种类及发生机制（P350）（一）机理：实质是免疫应答1.原因：

供、受体间HLAⅠ类、Ⅱ类抗原的差异差异越大排斥越强。

DR—最重要

A、B、DQ、DP—次重要2.机制：

排斥反应的发生以细胞免疫为主，也有体液免疫参与（1）CTL的细胞毒作用：溶解实质细胞和血管内皮细胞（2）NK细胞的自然杀伤作用（3）抗体介导的细胞毒作用：破坏实质细胞和血管内皮细胞（4）细胞因子介导的炎症作用（二）排斥反应的临床分类分两大类：

宿主抗移植物反应移植物抗宿主反应

宿主抗移植物反应初次反应再次反应急性排斥反应慢性排斥反应超急性排斥反应以肾移植为例介绍各种排斥反应1.超急性排斥反应：移植后48小时内出现的移植肾无功能的情况表现：肾由鲜红变为青紫，血流停止。显微镜下可见肾小血管坏死，微血栓形成，间质水肿出血，皮质广泛坏死。机理：受者体内预存有抗供体细胞的抗体（针对HLA），抗体与供体细胞的HLAAg结合，激活补体，细胞破坏；补体活化产物使血小板凝聚，释放凝血因子XⅡ，产生血管内凝血预存抗体产生的原因：多次输血，血液透析，多次妊娠，再次移植。个别原因不明，可能与曾感染某些病毒细菌有关，产生同种异型抗体。避免方法：移植前取受体血清与供体细胞进行细胞毒试验CDC试验，complementdependentcytotoxicity检测受者血清中是否预存有抗供体细胞的抗体。检测方法：

受体血清+供体Lc＋补体→

观察淋巴细胞死亡情况，死亡率大于10%，应放弃此供体2.急性排斥反应临床上最多见，发生在移植后数周-数月临床表现：原因不明发烧，血压上升，进行性肾功能损害，肾区压痛显微镜：肾小血管腔内及周围大量淋巴细胞浸润，间质水肿，内壁坏死，血栓形成机理：供、受者HLAAg型别不完全一致早期以细胞免疫为主（CTL直接杀伤、活化的Th1介导的迟发型超敏反应）晚期体液免疫为主（抗体介导的细胞毒作用，NK）避免方法：尽可能选择HLAAg型别一致的供体3.慢性排斥反应移植术后数月-数年发生表现：渐进型肾功能衰竭，蛋白尿、高血压（类似慢性肾炎表现）显微镜：呈局限性细胞浸润，间质纤维化，基底膜增厚，小血管内膜增生，管腔逐渐狭窄机理：供、受者HLAAg型别不完全一致体液免疫为主（Ⅳ型超敏反应引起的免疫损伤；特异性Ab活化补体及通过ADCC作用破坏血管内皮细胞；急性排斥反应引起的退行性病变等）避免方法：尽可能选择HLAAg型别一致的供体移植物抗宿主反应

多发生在骨髓移植中移植物中免疫活性细胞攻击宿主临床表现：宿主的淋巴系统、造血系统、单核吞噬系统、皮肤、消化道、肝脏等均受到损伤，出现：皮疹、腹泻、消化不良、血细胞减少、肝脾肿大、肝功受损等全身情况下降，易继发感染死亡。

产生原因：（1)供、受者HLAAg型别不完全一致（2）移植物中含有大量的免疫活性细胞，尤其是TLC（3）受体免疫活性细胞处于反应无能状态在骨髓移植中可发生移植物抗宿主反应，也可发生宿主抗移植物反应，主要取决哪一方的力量强。第二节HLA配型与应用分析（P341）移植成功的四要素：

1.移植物选择

2.器官保存

3.外科手术

4.免疫抑制剂使用一.选择供体的一般要求1.一般情况（1）移植物组织器官、细胞健康（2）供者无传染病（3）年龄相仿（4）供体器官与受区的大小接近接近2.ABO血型相容相容

最好一致，遵照输血原则3.HLA型别尽可能差异小二.移植前选择供体的检测（一）交叉配合试验（P345）1.预存抗体检测—检测测受体血清中有无抗供体细胞的抗体（1）补体依赖的细胞毒试验（complementdependentcytotoxicity,CDC

试验)检测方法：受体血清+供体Lc＋补体观察细胞死亡情况，大于10%应放弃此供体2.淋巴细胞交叉配合受者LC+供者LC观察二者LC的增殖转化程度细胞增殖反应程度与供、受体HLA抗原相容性呈负相关双向、单向培养均可。（二）HLA型别检测（P341)1.血清学方法（Serologicallydefinedantigen,

SD抗原）（1）检测位点：A、B、C、DR、DQ（2）检测细胞：检测A、B、C位点—用总淋巴细胞检测DR、DQ位点—用B淋巴细胞（3）方法：CDC试验（4）原理：用抗相应位点抗原的抗体（标准分型血清）与待测细胞结合，在补体作用下，有相应HLA抗原的细胞死亡，结果为阳性，即细胞上有与抗体相应的HLA抗原。作为分型试剂的标准分型血清应具备以下条件：特异性强、重复性好、结果清楚、反应快（几分钟就出结果）

2.细胞分型法（lymphocytedefinedantigen,

LD抗原）

检测位点：DP

待测细胞：BLC

方法：混合淋巴细胞培养试验（mixedlymphocyte

culture,MLC)

分双向与单向混合培养两种方法双向淋巴细胞混合培养试验：供BLC+受BLC培养由于细胞表面HLA抗原不同，双方细胞受对方异种抗原刺激而活化，使细胞发生增殖、转化成为淋巴母细胞。增殖转化强度与两者抗原的差异呈正比，即差异越小，反应越小；差异越大，反应越大。由于双方均可发生反应，所以称为双向。

此试验的缺点是并不能定出各自HLA的型别。

+增殖分化双向混合淋巴细胞培养试验原理异种抗原刺激异种抗原刺激增殖分化供受单向混合淋巴细胞培养试验

此种试验是将供、受者一方的淋巴细胞先处理，使其失去增殖分化能力，称这种细胞为刺激细胞（其表面的抗原仍可刺激对方淋巴细胞）。另一方淋巴细胞为反应细胞（被刺激后可发生反应）。将这两种细胞混合培养，刺激细胞表面含有与反应细胞不同的抗原就可以刺激反应细胞发生反应。这种试验中只有一方细胞可以反应（增殖分化），故称为单向混合淋巴细胞培养试验。细胞分型法就是用此种试验。刺激细胞：用X线或丝裂霉素处理。

刺激细胞（保留免疫原性，但不发生增殖分化）反应细胞+增殖分化单向混合淋巴细胞培养试验原理异种抗原刺激（1）阴性分型法原理：标准纯合子分型细胞（已知DP位点是什么型，如DPw3）经处理后成为刺激细胞,这种细胞作为分型试剂。当其与待测细胞混合培养时，如待测细胞DP位点有与分型细胞相同的基因（表面有相同的抗原），则不受刺激，反应为阴性；当待测细胞发生增殖分化时，不能定型。这种方法阴性时才能定型，故称为阴性分型法。DPw3++增殖：DP位点是什么型别不清楚不增殖分化说明反应细胞上有DPw3单向MLC的阴性分型法混合培养DPw3纯合子分型细胞刺激细胞

反应细胞（待查细胞）（2）阳性分型法（预致敏细胞分型法）预致敏细胞的制备：取仅有一条单倍型相异的两个体淋巴细胞进行MLC，其中一个处理为刺激细胞，另一个细胞为反应细胞。两者混合培养后，反应细胞已被刺激细胞上不同的DP位点（已知）刺激，即成为预致敏细胞（对该DP位点的型别有所记忆），将其冻存作为分型试剂。

试验时将待测的淋巴细胞处理为刺激细胞，与预致敏细胞混合培养，如待测细胞上的DP位点编码的抗原与预致敏细胞所识别的特异性相同，预致敏细胞会迅速发生增殖分化（二次刺激，24h内），有这种反应即为阳性，说明待测细胞上含有预致敏细胞所能识别的DP位点的抗原。阳性结果就能分出型别，故称阳性分型法。此法优点：快；缺点：预致敏细胞难得到三．排斥反应的免疫学监测（P352)

目的：尽早发现排斥反应，临床采取措施，抑制排斥反应1.T细胞功能检测—3H-TdR四小时掺入法

如患者即将发生排斥反应，实际体内淋巴细胞已被同种异型抗原刺激，已有增殖分化。取出患者淋巴细胞，加入3H-TdR，培养4小时，收获细胞，测cpm，根据cpm值推测T细胞的致敏状态。优点：四小时得结果。（2）外周血T细胞及其亚群检测

采用免疫荧光法进行外周血T细胞计数；采用流式细胞仪检测CD4+/CD8+

，原来低，现在升高，＞1.2，预示急性排斥反应发生；＜

1.