杂环类药物的分析

第八章杂环类药物的分析第一节吡啶类药物第二节喹啉类药物第三节托烷类药物第四节吩噻嗪类药物

第五节苯并二氮杂卓类药物第六节含量测定返回主目录基本要求练习与思考

一、基本结构与化学性质（一）典型药物的结构

硫酸阿托品氢溴酸东莨菪碱（atropinesulfate）(copolaminehydrobromide）第三节托烷类药物（二）主要化学性质1.水解性本类药物分子结构中具有酯的结构，易水解。以阿托品为例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)。2.碱性

阿托品和东莨菪碱的结构中，五元脂环上含有叔胺氮原子,具有较强的碱性,易与酸成盐。如阿托品的pKb1为4.35。3.旋光性氢溴酸东莨菪碱结构中含有不对称碳原子，呈左旋体，比旋度为-24ο至-27ο，而阿托品结构中虽然也含有不对称碳原子，但因外消旋化而为消旋体，无旋光性。利用此性质可区别阿托品与东莨菪碱。

4.生物碱沉淀反应本类药物具有碱性，可与生物碱沉淀剂生成沉淀。如：阿托品+氯化汞醇试液黄色沉淀东莨菪碱+氯化汞醇试液白色沉淀生物碱水解莨菪酸发烟硝酸三硝基衍生物(黄色)KOH（C2H5OH）深紫色的醌型产物5.Vitali反应《中国药典》2015版二、鉴别试验1、红外分光光度法2、Vitali反应3、硫酸盐（或氢溴酸盐）1、红外吸收图谱应与对照图谱一致2、显托烷类鉴别反应3、显硫酸盐（硫酸阿托品）或氢溴酸盐（氢溴酸山莨菪碱盐）的鉴别反应三、杂质检查（二）检查方法（一）检查项目按照中国药典要求检查酸度、其他生物碱、干燥失重等中国药典（2015版）对含量测定有相关规定

如：原料非水滴定法制剂紫外-可见分光光度法（波长420nm）四、含量测定第四节吩噻嗪类药物一、基本结构与化学性质（一）结构特点与典型药物奋乃静癸氟奋乃静盐酸氟奋乃静盐酸三氟拉嗪（二）主要化学性质1.紫外和红外吸收光谱特征硫氮杂蒽母核为共轭三环л系统

三个最大吸收峰别在：205nm、254nm、300nm由于2位、10位上的取代基不同，可引起最大吸收峰的位移。

硫氮杂蒽母核的硫为二价，易氧化为砜和亚砜，其紫外吸收光谱有明显不同，它们具有四个峰值。另外，取代基R和R’的不同，则可产生不同的红外光谱2.还原性二价硫易氧化，遇不同氧化剂如硫酸、硝酸、三氯化铁试液及过氧化氢等，随着取代基的不同，而呈不同的颜色。

3.与金属离子络合呈色

本类药物中未被氧化的硫，可与钯离子形成配位化合物，其氧化产物则无此反应。此性质可用于鉴别和含量测定，并具有专属性，可消除氧化产物的干扰。4.弱碱性母核上N原子的碱性极弱，侧链N原子的碱性较强，易于酸成盐，可用非水滴定法测定含量。

（一）紫外特征吸收和红外吸收光谱

本类药物可用UV和IR鉴别，Ch.P中UV鉴别实例如下：

药物名称溶剂浓度（μg/ml）λmax（nm）AE1%1cm盐酸氯丙嗪盐酸（9→1000）52540.46915306——盐酸异丙嗪盐酸（0.01mol/L）6249—883~937奋乃静无水乙醇72580.65—癸氟奋乃静乙醇10260——盐酸氟奋乃静盐酸（9→1000）10255—553~593盐酸三氟拉嗪盐酸（1→20）10256—630盐酸硫利达嗪乙醇8264与315——二、鉴别试验

（二）显色反应

1.与氧化剂的显色反应

药物名称硫酸硝酸过氧化氢

盐酸氯丙嗪显红色,渐变淡黄色—盐酸异丙嗪显樱桃红色,放置生成红色沉淀,加热即溶解,后颜色渐变深溶液由红色转变为橙黄色奋乃静——显深红色;放置后红色渐褪去盐酸氟奋乃静显淡红色,温热——后变成红褐色盐酸三氟拉嗪—生成微带红色的白色沉淀;放—置后,红色变深,加热后变黄色

盐酸硫利达嗪显蓝色—

—

2.与钯离子络合显色反应

利用分子结构中未被氧化的硫与金属钯离子络合形成有色络合物，如与癸氟奋乃静形成红色络合物。（一）检查项目

盐酸氯丙嗪和盐酸异丙嗪的检查项目基本相同三、杂质检查（二）检查方法因杂质对照不易获得，故采用自身稀释对照的HPLC注意事项

避光操作，现用现配四、含量测定返回原料药制剂盐酸异丙嗪非水滴定法HPLC盐酸氯丙嗪非水滴定法紫外-可见分光光度法第五节苯并二氮杂卓类药物一、结构特征与典型药物NNClH3CO地西泮第五节苯并二氮杂卓类药物一、结构特征与典型药物NNClH3CO地西泮123456789阿普唑仑奥沙西泮氯氮卓NNNCH3OClH一、主要性质1、弱碱性七元杂环上的N原子具有强碱性，但苯基的取代使碱性降低。因此采用非水滴定法测定含量。2、水解性七元杂环上的N原子具有强碱性，但在强酸性溶液中可水解。一、主要性质3、紫外吸收特征2个苯环、1个七元杂环可形成较长的共轭体系，因而有紫外吸收，可用于鉴别和含量测定。总结弱碱性（杂环上具有N原子）水解性(强酸条件下N-C=O)紫外吸收特征（共轭体系）二、鉴别试验中国药典规定方法1、硫酸-荧光反应（溶于硫酸，紫外光下显黄绿色）2、紫外-可见分光光度法（共轭体系）3、红外分光光度法4、有机氯化物（7位上接了CL原子）1.硫酸-荧光反应

本类药物溶于硫酸后，在紫外光（365nm）下，显不同颜色的荧光。例如：

地西泮黄绿色

黄色氯氮卓黄色

紫色艾司唑仑+H2SO4亮绿色+稀硫酸天蓝色硝西泮淡蓝色

蓝绿色奥沙西泮淡黄绿色补充

氯化铜焰色反应

分子结构中含有氯元素的药物，在铜网上燃烧发出CuCl2绿色火焰。此反应药典未用于本类药物鉴别。三、含量测定原料药非水滴定法制剂HPLC降解产物的检查

地西泮注射液列入此项检查，因本品在贮藏过程中有可能分解成2-甲氨基-5-氯-二苯甲酮等杂质。采用HPLC法进行检查。返回小知识含量测定(一)非水溶液滴定法应用实例

1.游离弱碱性药物测定

异烟肼、尼可刹米、地西泮及氯氮卓等。基于这些药物分子结构中氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法直接测定其含量。由于这些药物的碱性强弱不同，测定时所采用溶剂、指示剂及其指示终点的方法也不尽相同。

药物名称取样量(g)溶剂指示剂终点颜色

尼可刹米0.15冰醋酸10ml结晶紫蓝绿色地西泮0.2冰醋酸、酸酐10ml结晶紫绿色氯氮卓0.3冰醋酸10ml结晶紫蓝色（二）钯离子比色法优点：钯离子比色法可选择性地用于未被氧化的吩噻嗪类药物的测定。max~500nm吩噻嗪类药物

+Pd2+pH2±0.1红色络合物在max处测定A，以对照法定量（一）直接分光光度法

供试品不需提取分离，溶于适当的溶剂中即可进行含量测定。

1.奥沙西泮原料的测定在229nm，采用标准对照法测定。

2.盐酸异丙嗪片的测定在249nm，采用E1cm1%＝910测定。

3.盐酸异丙嗪注射液的测定

测定波长的选择：注射液处方加VC作抗氧剂，可还原异丙嗪红色氧化产物，从而防止异丙嗪氧化变色。VC在盐酸异丙嗪最大吸收波长249nm处有吸收，干扰注测定。因此选用299nm波长测定盐酸异丙嗪注射液的含量时，维生素C在此波长处则不产生干扰,但E1cm1%＝108。三、紫外分光光度法(二)萃取后分光光度法盐酸氯丙嗪注射液盐酸氯丙嗪氨水碱化氯丙嗪乙醚提取乙醚层盐酸提取盐酸氯丙嗪max254±1nm处测定A，E1cm1%＝915（三）萃取-双波长分光光度法

本法是USP（24）收载的方法，用于盐酸氯丙嗪注射液的含量测定，主要用来校正样品中氧化物对测定的干扰。测定原理利用氯丙嗪的最λmax为254nm，其氧化物在此波长也有吸收，同时在277nm氧化物也有吸收，且其A254=A277.而氯丙嗪在此波长无吸收。因此，可由两波长处测得△A计算氯丙嗪含量。四、气相色谱法（一）硫酸阿托品片的含量测定

USP(24)采用的方法。以后马托品作为内标,采用标准对照法。

测定方法

(1)内标溶液的制备：(2)供试品溶液与对照品溶液的制备：(3)色谱系统：色谱柱为1.8m×2mm的玻璃柱；担体为与碳酸钠混合于900℃熔融后，经酸和碱处理的硅烷化藻土；固定相为3%的OV-17（即50%甲基，50%苯基的聚硅氧烷）；载气为氮气，流速为25ml/min；检测器为氢火焰离子化检测器。

(4)系统适用性试验：取对照品溶液1μl，进样6次，所得的对照品和内标峰面积之比的RSD不大于2.0%；对照品峰和内标峰的分辨率Rs＜4.0；T＜2.0。

(5)测定方法：取供试液和对照液各进样1μl，记录各峰面积，用下式计算所取片粉中硫酸阿托品[(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O]的重量:[(C17H23NO3)2·H2SO4·H2O]的重(mg)=(694.85/676.83)(W/10)(Ru/Rs)（二）人血浆中硝苯地平的气相色谱法测定及药代动力学研究

(一)反相高效液相色谱法

1.地西泮注射液的反相HPLC法

地西泮注射液曾用萃取后分光光度法测定含量，因萃取不完全，及有关物质和分解产物等对测定有干扰，故中国药典自1995版改用HPLC法。此法操作简便，可消除干扰。注射液中地西泮的平均回收率为99.4%，相对标准偏差为0.8%。

(1)色谱条件与系统适用性试验：ODSC18；流动相为甲醇-水(70:30)；检测波长为254nm。n＞1500，R＞1.5。

(2)内标溶液的制备：取萘50mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。五、高效液相色谱法

(3)测定方法：取地西泮对照品约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液与内标溶液各5ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀。吸取5μl～10μl进样，记录色谱图；另取本品适量(约相当于地西泮5mg），同法测定，按内标法以峰面积计算，即得。2.高效液相色谱法测定硫酸阿托品片的含量

色谱条件:色谱柱为SpherisorbC185μm流动相为0.025mol/L磷酸(三乙胺调pH为3.0)-乙腈(80:20)；柱温为30℃；检测波长为215nm；n=5880。

线性关系：精取硫酸阿托品适量，用流动相制备成22.4、44.8、67.2、89.6、112μg/ml溶液，进样3次，每次20μl，所得峰面积与浓度绘制标准曲线，呈良好的线性关系，其相关系数r=0.9995，其线性范围为22.4μg/ml～112μg/ml。

回收率试验：

样品测定：

3.高效液相色谱法测定血浆中地西泮浓度

本法以艾司唑仑为内标，用氯仿-异丙醇混合溶剂提取，氮气流吹干，用甲醇溶解后进样，测定了剖腹产产妇及胎儿血浆中地西泮浓度。其回收率在92.86%～98.77%之间；日内与日间精密度（RSD）分别为1.61%～3.00%和2.18%～5.18%。该法具有