实验培养基的配制

实验培养基的配制第一页，共二十三页，2022年，8月28日重要考点3：培养基的配制组内合作：1、说出培养基配制流程；2、讨论消毒与灭菌的区别，小结常用灭菌方法。第二页，共二十三页，2022年，8月28日1、计算2、称量牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0gH2O1000mL琼脂2.0g第三页，共二十三页，2022年，8月28日3、熔化4、调节pH第四页，共二十三页，2022年，8月28日5、分装第五页，共二十三页，2022年，8月28日6、灭菌第六页，共二十三页，2022年，8月28日灭菌——高压灭菌1.05kg/cm2、121℃，15—30min灭菌锅高压灭菌作用：杀死所有活的微生物及芽孢第七页，共二十三页，2022年，8月28日（补充：倒“平板”）超净工作台第八页，共二十三页，2022年，8月28日倒平板约50℃防止培养皿盖上的水珠滴落污染培养基灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基第九页，共二十三页，2022年，8月28日7、恒温培养（恒温培养箱）第十页，共二十三页，2022年，8月28日培养基的配制

称量

熔化

灭菌

调节pH

分装加热熔化琼脂（搅拌）倒入三角烧瓶，与其他器具一起放入灭菌锅高压灭菌定容调节PH至计算恒温培养第十一页，共二十三页，2022年，8月28日（一般需要作无菌检查）核心：保证无菌操作超净工作台超净工作台、酒精灯火焰旁操作第十二页，共二十三页，2022年，8月28日分析与讨论1、如何检验培养基是无菌的？2、常用灭菌方法有哪些？将未接种的培养基放在恒温培养箱中适宜条件下培养2-3d，如果无菌落产生，则培养基是无菌的。高压（蒸气）灭菌灼烧灭菌用于培养基、培养皿、锥形瓶等用于接种环等金属器具第十三页，共二十三页，2022年，8月28日3、消毒与灭菌的区别（1）消毒（如巴氏消毒法62℃，30min、酒精擦拭等）仅杀死活的微生物，不能杀死芽孢。（2）灭菌（高压灭菌1.05kg/cm2、121℃、15-30min；灼烧灭菌、干热灭菌等）能杀死所有微生物及其芽孢。第十四页，共二十三页，2022年，8月28日微生物重点实验2——微生物的培养掌握划线法接种方法与作用第十五页，共二十三页，2022年，8月28日单个菌体2.特征：大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。3.功能：1.定义：补充：菌落鉴定菌种的重要依据固体培养基上大量繁殖子细胞群体菌落是由单个细胞分裂形成的种群第十六页，共二十三页，2022年，8月28日常用工具图示接种环玻璃刮铲第十七页，共二十三页，2022年，8月28日微生物（如大肠杆菌）的培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算2.称量3.熔化4.调节pH5.分装6.灭菌7.恒温培养第十八页，共二十三页，2022年，8月28日二.大肠杆菌的培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡培养大肠杆菌：（超净工作台上、酒精灯火焰旁进行）划线法菌种1.接种：接种环划线法接种冷却后刮取菌苔划线法接种：使接种物逐渐稀释，培养后出现单个菌落第十九页，共二十三页，2022年，8月28日枯草杆菌菌落菌落灰白色，较大，边缘比较粗糙大肠杆菌菌落菌落灰白色，圆形，透明或半透明滕黄八叠球菌菌落菌落黄色，圆形、边缘光滑第二十页，共二十三页，2022年，8月28日问题讨论为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上的微生物污染培养物杀死残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时接种物逐渐稀释，培养后得到单个菌落。避免接种环上的细菌污染环境和感染操作者。第二十一页，共二十三页，2022年，8月28日划线法二.大肠杆菌的培养：㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基㈡培养大肠杆菌：1.接种：2.培养：将接种后的平板倒置放入37℃恒温箱中培养2～3d第二十二页，共二十三页，2022年，8月28日Q：为什么划线法接种能观察到单个菌落？划线法接种时，使接种物逐渐稀释