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文档简介

定量分析与分析方法验证第一页,共六十页,2022年,8月28日

第一节

定量分析样品的前处理方法

一、概述

1.为什么要对定量分析的样品进行前处理?

含卤素有机药物R-X(F,Cl,Br,I)金属有机药物R-O-Me(有机酸或酚的含金属有机药物金属盐;结合不牢固)

有机金属药物R-Me

(结合牢固)

2.常用的处理方法不经有机破坏的分析方法药物分析中常用的分析方法经有机破坏的分析方法第二页,共六十页,2022年,8月28日含卤素有机药物

含卤素有机药物系指药物分子结构中所含卤素直接与芳环或脂肪链相连者,而不包括某些有机药物的卤酸盐或氢卤酸盐结构特点:C—X第三页,共六十页,2022年,8月28日(一)卤原子的活泼性1.卤原子与碳原子直接相连,卤原子的活泼性和它直接相连的烃基的结构有很大关系第四页,共六十页,2022年,8月28日(1)乙烯型卤和芳卤不活泼第五页,共六十页,2022年,8月28日(2)烯丙型卤和苄卤活泼(3)卤代烷型介于两者之间第六页,共六十页,2022年,8月28日2.分子中所含卤原子的个数

分子中所含卤原子的个数越多,活泼性越强,特别是同一碳上含多个卤原子或一个苯环上含多个卤原子时,活泼性增强更加明显第七页,共六十页,2022年,8月28日3.卤素的种类I>Br>Cl>F常见的含卤素有机药物第八页,共六十页,2022年,8月28日三氯叔丁醇六氯对二甲苯第九页,共六十页,2022年,8月28日泛影酸第十页,共六十页,2022年,8月28日胆影酸第十一页,共六十页,2022年,8月28日碘他拉酸第十二页,共六十页,2022年,8月28日碘番酸第十三页,共六十页,2022年,8月28日碘苯酯I第十四页,共六十页,2022年,8月28日盐酸胺碘酮第十五页,共六十页,2022年,8月28日诺氟沙星第十六页,共六十页,2022年,8月28日醋酸氟轻松第十七页,共六十页,2022年,8月28日磺溴酞钠第十八页,共六十页,2022年,8月28日含金属有机药物的分析

含金属的有机药物:金属原子不与碳原子直接相连,通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物如酒石酸锑钾、葡萄糖酸锑钠、富马酸亚铁第十九页,共六十页,2022年,8月28日

有机金属药物:金属原子直接与碳原子以共价键相连,结合比较牢固如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利第二十页,共六十页,2022年,8月28日酒石酸锑钾第二十一页,共六十页,2022年,8月28日硬脂酸镁富马酸亚铁第二十二页,共六十页,2022年,8月28日葡萄糖酸锑钠第二十三页,共六十页,2022年,8月28日卡巴胂醋酸苯汞第二十四页,共六十页,2022年,8月28日汞撒利第二十五页,共六十页,2022年,8月28日二、不经有机破坏的分析方法(一)直接测定法例如:富马酸亚铁

溶于热稀矿酸,采用铈量法,邻二氮菲作指示剂

第二十六页,共六十页,2022年,8月28日(二)经水解后测定法

1.直接回流后测定法例如:三氯叔丁醇的含量测定

CCl3-C(CH3)2-OH+4NaOH(CH3)2CO+3NaCl+HCOONa+2H2ONaCl+AgNO3AgCl+NaNO3AgNO3+NH4SCNAgSCN+NH4NO3

2.用硫酸水解后测定法例如:硬脂酸镁的含量测定

Mg(C17H35COO)2+H2SO4

MgSO4+2C17H35COOH

H2SO4+2NaOHNa2SO4

+2H2O

△△第二十七页,共六十页,2022年,8月28日(三)经氧化还原后测定法

1.碱性还原后测定例如:泛影酸的含量测定

2.酸性还原后测定例如:碘番酸的含量测定Zn还原后银量法

第二十八页,共六十页,2022年,8月28日3.利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量

(1)含锑药物例如:葡萄糖酸锑的含量测定

Sb5++2KISb3++2K+

++I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6

(2)含铁药物

2Fe3++2KI2Fe2++2K++I2I2+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6H+第二十九页,共六十页,2022年,8月28日

三、经有机破坏的分析方法

湿法破坏

药物分析中常用的有机破坏的方法有干法破坏

HNO3-HClO4法氧瓶燃烧法(一)湿法破坏HNO3-H2SO4法

H2SO4-硫酸盐法

HNO3-H2SO4-HClO4法;H2SO4-H2O2;H2SO4-KMnO4(二)干法破坏加Na2CO3或MgO以助灰化;温度控制在420℃

第三十页,共六十页,2022年,8月28日(三)氧燃瓶燃烧法

(oxygenflaskcombustionmethod)1.仪器装置500ml,1000ml,2000ml,磨口、硬质玻璃锥形瓶

2.称样固体样;液体样要求详见P1633.燃烧分解操作法

4.吸收液的选择用于X、S、Se等的鉴别、检查、含量测定时多数是H2O或H2O-NaOH;少数为H2O-NaOH-H2O2.第三十一页,共六十页,2022年,8月28日空心7mm50mm30mm尾部7mm13mm20mm25mm356mm166mm滤纸滤纸AGFEDCB氧瓶燃烧装置第三十二页,共六十页,2022年,8月28日应用示例:碘苯酯的测定第三十三页,共六十页,2022年,8月28日第二节定量分析方法特点

一、容量分析法(一)容量分析法的特点

操作简单、快速;比较准确(RSD<0.2%);仪器普通易得。第三十四页,共六十页,2022年,8月28日(二)容量分析法的计算问题

1.滴定度(T)的概念每1mlmol溶液相当于被测物质的量(mg)2.滴定度的计算a

A+b

Bc

C+d

D

T=

M

×b

/

a×B

3.百分含量的计算(1)直接滴定法D%=V×F×T/W×100%

F=实际标定的浓度/规定的浓度

(2)间接滴定法(回滴定法;剩余滴定法)

D%=(VO

VB)×F×T/W×100%第三十五页,共六十页,2022年,8月28日

二、光谱分析法

(一)紫外-可见分光光度法(200nm~760nm)

灵敏度高,可达10-4g/ml~

10-7g/ml1.特点准确度高,RSD(%)为2%~5%

仪器价格低廉,操作简单,易普及,应用范围广。

2.朗伯-比耳定律A=ECLE1%1cm=ε×10/M第三十六页,共六十页,2022年,8月28日3.仪器校正和检定

波长校正用汞灯中较强谱线237.38,253.65,275.28,296.73,313.16,334.15,365.02,404.66,425.83,546.07nm与576.96nm

或用仪器中氘灯的486.02nm与656.10nm进行校正。吸收度的检定:用K2CrO7(60mg)+0.005mol/LH2SO4液至1000ml

波长(nm)235(最小)257(最大)313(最小)350(最大)

E1%1cm124.5144.048.62106.6

杂散光检查:试剂浓度(g/ml)测定波长透光率(%)

NaI1.00220nm<0.8NaNO25.00340nm<0.8第三十七页,共六十页,2022年,8月28日4.对溶剂的要求:220~240nm241~250nm251~300nm300nm以上溶剂+吸收池A<0.41<0.20<0.10<0.05

5.测定方法要求供试品溶液的A应在0.3~0.7

对照品比较法:Cx=(Ax/Ar)Cr;含量%=Cx×D/W×100%

常用方法吸收系数法:含量%=Ax

/(E1%1cm

)r×100%

计算分光光度法:VA的三点校正法第三十八页,共六十页,2022年,8月28日

(二)荧光分光光度法

灵敏度高,可达10-10g/ml~

10-12g/ml

在低浓度进行测定,防止F与C不成正比及自熄灭作用

1.特点用基准物溶液校正仪器灵敏度,防止样品液荧光衰减灵敏度高,但干扰因素多。制备荧光衍生物,可提高其灵敏度和选择性。用样品量少,操作简单,方法快速,应用范围较广。

第三十九页,共六十页,2022年,8月28日2.荧光分析仪有二个单色光器—激发单色光器与发射单色光器;且激发光源、样品池和检测器成直角。3.含量测定常用的方法对照品比较法:Ci=(Ri-Rib)/(Rr-Rrb)×CrCh.P收载地高辛片、利血平片、洋地黄毒苷片。第四十页,共六十页,2022年,8月28日

三、色谱分析法

按分离原理分为:吸附;分配;离子交换;排阻色谱方法分类按分离方法分为:PC;TLC;柱色谱;GC,HPLC。(一)HPLC法

1.对HPLC仪器一般要求色谱柱、流动相按品种项下要求。色谱柱的理论板数:n=5.54(tR/Wh/2)22.系统性试验分离度:R=2(tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5

拖尾因子:T=W0.05h/2d1

应在0.9~

1.05

第四十一页,共六十页,2022年,8月28日

内标法加校正因子测定供试品中主成分含量3.测定方法标准曲线法外标法测定供试品中主成分含量外标一点法

应用示例:

RP-HPLC法测定盐酸黄酮哌酯片含量,用标准曲线法如头孢拉丁;头孢羟氨苄;头孢唑啉钠用外标一点法第四十二页,共六十页,2022年,8月28日

(二)GC法

1.对GC仪器一般要求载气为氮气;色谱柱为填充或毛细管柱色谱柱的理论板数:n=5.54(tR/Wh/2)22.系统性试验分离度:R=2(tR1–tR2)/(W1+W2);要大于1.5

拖尾因子:T=W0.05h/2d1

应在0.9~

1.05第四十三页,共六十页,2022年,8月28日

内标法加校正因子测定供试品中主成分含量

3.测定方法标准曲线法外标法测定供试品中主成分含量外标一点法应用示例:

Ch.P(2000)收载的月桂卓酮、维生素E及其片剂、注射剂、甲酚皂溶液等均采用GC法中的内标法加校正因子测定含量。第四十四页,共六十页,2022年,8月28日

第三节药品质量标准分析方法验证一、准确度

是指用该方法测定结果与真实值接近的程度,用回收率表示(一)含量测定方法的准确度

1.原料药可用已知纯度对照品或样品进行测定;或与已建准确度的另一方法测定的结果进行比较。

2.制剂要考察辅料对回收率的影响。采用在空白辅料中加入原料对照品的方法作回收率试验,然后计算RSD。具体做法:测定高、中、低三个浓度,n=3,共9个数据来评价回收率的RSD<2%;用UV和HPLC发时,一般回收率可达98%~102%;容量法可达99.7%~100.3%

第四十五页,共六十页,2022年,8月28日

(二)数据要求

回收率%=(测定平均值—空白值)/加入量×100%

要求制备高、中、低三浓度的样品,各测定3次。应报告已知加入量的回收率,或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。第四十六页,共六十页,2022年,8月28日

二、精密度是指在规定的测试条件下,同一个均匀样品,经多次测定结果之间的接近程度。

(一)精密度表示方法

1.偏差(deviation,d)d=测得值-平均值=Xi-X

2.标准偏差(standarddeviation,SD或S)

S=[(∑Xi–X)2/(n-1)]1/23.相对标准差(relativestandarddeviation,RSD)也称变异系数

(coefficientofvariation,CV)RSD=标准偏差/平均值×100%=S/X×100%第四十七页,共六十页,2022年,8月28日(二)重复性、中间精密度及重现性1.重复性在相同条件下,由一个分析人员测定所得结果的精密度.2.中间精密度在同一个实验室,不同时间由不同分析人员用不同设备测定结果的精密度。

3.重现性在不同实验室由不同分析人员测定结果的精密度。第四十八页,共六十页,2022年,8月28日(三)数据要求

应报告S或SD、RSD和可信限。用统计学的可信性分析(t或f)。第四十九页,共六十页,2022年,8月28日

三、专属性是指在其他成分(如杂质、降解产物、辅料等)可能存在下,采用的方法能准确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法,均应考察其专属性。

(一)鉴别反应应能与其它共存的物质或相似化合物区分,不含被测组分的样品均应呈现负反应。第五十页,共六十页,2022年,8月28日

(二)含量测定和杂质测定色谱法和其他分离法,应附代表性的图谱,以说明专属性。

图中应注明各组分的位置,色谱法中分离度应符合要求。在能获得杂质的情况下,可加到试样中,考察对结果的干扰。在杂质和降解物不能获得的情况下,可用以验证方法和药典方法进行对照;也可用对试样加速破坏的方法,比较两种方法。第五十一页,共六十页,2022年,8月28日

四、检测限(limitofdetection,

LOD)

是指试样中被测物能被检测出的最低浓度或量,是限度检验指标。它无需测定,只要指出高于或低于该规定的浓度或量即可。(一)常用的方法

1.非仪器分析目视法用已知浓度被测物,试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。

2.仪器分析方法

UV法:LOD=f.3S空

=C样/A样×

3S空

Flu法:LOD=f.3S空

=C样/(F样-F空)×

3S空

GC和HPLC法:

LOD=S/N=2或3

第五十二页,共六十页,2022年,8月28日(二)数据要求应附测试图,说明测试过程和检测限结果。第五十三页,共六十页,2022年,8月28日

五、定量限(limitofquantitation,

LOQ)

是指样品中被测物能被定量测定的最低量,其测定结果应具一定准确度和精密度。杂质和降解产物进行定量测定时,要求

LOQ.常用信噪比法确定定量限,一般以S/N=10时相应的浓度进行测定。第五十四页,共六十页,2022年,8月28日

六、线性

是指在设定的范围内,测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。

UV法:首先制备一个标准系列,浓度点n=5;A=0.3~.0.7

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