对位红检测及标准

对位红检测及标准第一页，共十三页，2022年，8月28日任务：对位红检测及标准检测方法一、液相色谱法高效液相色谱法凝胶净化液相色谱法反相高效液相色潽法二、分光光度法--紫外可见分光光度计第二页，共十三页，2022年，8月28日1.对位红的简介对位红亦称对硝苯胺红，常温下呈固态，密度1.50g/cm3,熔点248-252℃。是一种常用的红色颜料，属于重氮系列化工合成染色剂，主要应用于机油，蜡，油彩，汽油等工业产品。对位红的熔点即已达到250℃，明显不能采用气相色谱法来进行检验，因为样品很难汽化。所以我们采用液相色谱法来对其进行检测。第三页，共十三页，2022年，8月28日1.1高效液相色谱法优点：操作简单，灵敏可靠，结果令人满意应用范围：食品及调味品中对位红、苏丹红的检测对位红检测主要仪器与试剂：LC2010-AB型高效液相色谱仪(配有紫外可见光检测器)(Shimazdu公司,日本)。甲醇(色谱纯,美国TEDIA公司),正己烷(分析纯,成都市科龙化工试剂厂),氯仿(分析纯,重庆川东化工有限公司),丙酮(分析纯,成都市科龙化工试剂厂),无水硫酸钠(分析纯,重庆北碚化学试剂厂),苏丹红(97.5%)、苏丹红(90.0%)、苏丹红!(97.0%)、苏丹红∀(91.0%)、对位红(95.5%)标准品(Dr.EhrenstorferGmbH公司,德国),层析用氧化铝(中性,100~200目)(上海陆都化学试剂厂),1cm(内径)&5cm(高)注射器管(上海金塔医用器材有限公司)。标准溶液:精密称取苏丹红、苏丹红、苏丹红!、苏丹红∀、对位红标准品各10.0mg(按其标称含量折算),用丙酮溶解并定容至250mL,分别配成40mg/L的标准储备溶液。取标准储备溶液用丙酮配成0.16、0.32、0.64、1.28、2.56mg/L的标准系列溶液。第四页，共十三页，2022年，8月28日检测操作步骤1、流动相的配制及预处理2、标准溶液配制3、样品溶液配制4、液相色谱仪的开机5、液相色谱工作站设置6、走基线7、进样8、数据采集9、标样及试样进样第五页，共十三页，2022年，8月28日1.2凝胶净化液相色谱法优点：操作简单，填充完凝胶柱后可重复使用，实际用量少于欧盟及国标方法，并且用淋洗液替代剧毒而又昂贵的乙腈进行提取，自制凝胶柱净化富集避免了欧盟方法用乙腈直接萃取进样对色谱柱寿命的影响及杂质峰的干扰，也避免了国标方法中采用氧化铝柱净化活度难以控制的麻烦，一次进样可同时检测食品中对位红、苏丹红的含量应用范围：食品及调味品中对位红、苏丹红的检测仪器及试剂：Agilent1100高效液相色谱仪(含二极管阵列检测器、柱温箱、自动进样器)层析柱<1.6cm×50cm,填充Bio2BeadsS2X3凝胶。苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ及对位红标准品,纯度均大于95%,配制时用少量三氯甲烷溶解,乙腈定容为0.5000g·L-1储备液(按实际含量折算),使用时用乙腈稀释至所需浓度。第六页，共十三页，2022年，8月28日色谱条件色谱柱ZorbaxSB2C18(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈(A)+酸性水溶液(用乙酸调至约pH4.0);洗脱程序:0～9minA90%;9～12min;A线性变化到100%,保持5min后回到初始比例;流速1.0mL·min-1;柱温35℃;进样量20μL;二极管陈列检测器,程序可变波长见表1。第七页，共十三页，2022年，8月28日1.3反相高效液相色潽法简介：在推荐参考方法的基础上,对分离和色谱条件加以改进、优化、选择,用于几种含对位红食品采用拟定的方案进行分离检测。结果:方法的检出限为011μg/ml,标准曲线的线性相关系数(r)019999,在014-116μg/ml添加水平间,加标的回收率95%～105%,RSD019%～911%。改进的方法准确可靠,检测效率高,具有实际应用意义。应用：测定食品中对位红的残留量第八页，共十三页，2022年，8月28日仪器、试剂及色谱条件仪器设备Waters2695型高效液相色谱仪。Waters、996型二极管阵列紫外检测器。MilliQplus型超纯水器,美国Millipore公司产品。超声波清洗器。试剂对位红标准品(95%,AcrosOrganics,USA);乙腈(分析纯和色谱纯)。色谱条件色谱柱,MERCKLichrocart250-4Lichrospher100RP-18,4×250mm,5μm;流动相:水+乙腈(5+95);流速:110ml/min;检测波长:485nm;进样量:10μl。第九页，共十三页，2022年，8月28日2.1.分光光度法--紫外可见分光光度计应用范围：检定物质

根据吸收光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长虽ax和摩尔吸收系数是检定物质的常用物理参数。这在药物分析上就有着很广泛的应用。在国内外的药典中，已将众多的药物紫外吸收光谱的最大吸收波长和吸收系数载入其中，为药物分析提供了很好的手段。2.与标准物及标准图谱对照

将分析样品和标准样品以相同浓度配制在同一溶剂中，在同一条件下分别测定紫外可见吸收光谱。若两者是同一物质，则两者的光谱图应完全一致。如果没有标样，也可以和现成的标准谱图对照进行比较。这种方法要求仪器准确，精密度高，且测定条件要相同。3.比较最大吸收波长吸收系数的一致性4.纯度检验

5.推测化合物的分子结构

6.氢键强度的测定

实验证明，不同的极性溶剂产生氢键的强度也不同，这可以利用紫外光谱来判断化合物在不同溶剂中氢键强度，以确定选择哪一种溶剂。7.络合物组成及稳定常数的测定8.反应动力学研究9.在有机分析中的应用

第十页，共十三页，2022年，8月28日简介在分光光度计中，将不同波长的光连续地照射到一定浓度的样品溶液时，便可得到与众不同波长相对应的吸收强度。如以波长（λ）为横坐标，吸收强度（A）为纵坐标，就可绘出该物质的吸收光谱曲线。利用该曲线进行物质定性、定量的分析方法，称为分光光度法，也称为吸收光谱法。用紫外光源测定无色物质的方法，称为紫外分光光度法。第十一页，共十三页，2022年，8月28日测定所需仪器：UV7504型紫外可见分光光度计，