标准解读
GB/T 18979-2003 是一项由中国发布的国家标准,旨在规定食品中黄曲霉毒素测定的方法。该标准结合了免疫亲和层析净化技术和高效液相色谱法(HPLC)以及荧光光度法,以高灵敏度和准确性检测食品样品中的黄曲霉毒素含量。下面是对该标准主要内容的说明:
标准适用范围
本标准适用于谷物、粮油及其制品、坚果、调味品等多种食品中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的测定。黄曲霉毒素是一类由真菌产生的有毒二次代谢产物,对人类和动物健康构成严重威胁,因此其在食品中的含量控制至关重要。
测定原理
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免疫亲和层析净化:利用黄曲霉毒素特异性抗体固定于固相载体上,形成免疫亲和柱。样品经过提取、过滤后,通过该柱时,黄曲霉毒素与抗体特异性结合而被吸附,其他杂质则被洗脱。随后使用适当的溶剂解吸,从而实现黄曲霉毒素的纯化与浓缩。
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高效液相色谱法(HPLC):净化后的样品注入HPLC系统,通过高压泵推动,在柱内根据化合物的物理化学性质分离。黄曲霉毒素各组分在柱中被分离,并依次通过荧光检测器。
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荧光光度法:由于黄曲霉毒素具有自然荧光特性,当它们通过荧光检测器时,会吸收特定波长的光并发出荧光。荧光强度与其浓度成正比,据此可定量测定样品中黄曲霉毒素的含量。
操作步骤
- 样品准备:包括粉碎、称重、提取等预处理步骤。
- 免疫亲和层析:将提取液通过亲和柱进行净化。
- 洗脱与浓缩:使用适宜溶剂洗脱结合的黄曲霉毒素,并浓缩至适合HPLC分析的体积。
- HPLC分析:将样品注入HPLC系统,进行分离。
- 荧光检测与定量:通过荧光检测器记录黄曲霉毒素的荧光信号,并与标准曲线对比进行定量分析。
重要参数与质量控制
标准中详细规定了实验所需试剂、仪器设备的具体要求,以及操作过程中的关键控制点,如提取效率、净化回收率、检测限、定量限等,确保检测结果的准确性和重复性。
结论
该标准为食品中黄曲霉毒素的检测提供了一套科学、高效的分析方法,通过结合免疫亲和层析的高选择性和HPLC-荧光检测的高度灵敏性,能够有效监测食品中这些有害物质的含量,保障食品安全。
如需获取更多详尽信息,请直接参考下方经官方授权发布的权威标准文档。
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文档简介
ICS67.050X04中华人民共和国国家标准GB/T18979--2003食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法DeterminationaflatoxinscontentinfoodCleanupbyimmunoaffinitychromatogaphyyanddeterminationbyhigh-performanceliquidchromatigraphyyandfluorometer2003-02-21发布2003-08-01实施华中民共和发布国家质量监督检验检疫总局
GB/T18979-2003前本标准由北京市质量技术监督局提出。本标准由全国食品工业标准化技术委员会归口本标准起草单位:北京市产品质量监督检验所、青岛出入境检验检疫局、国家标准物质研究中心本标准主要起草人:王品、张鹏、张艺兵、邵明武。本标准为首次发布
GB/T18979-2003食品中黄曲霉毒素的测定免疫亲和层析净化高效液相色谱法和荧光光度法范围本标准规定了免疫亲和层析净化一高效液相色谱法和免疫亲和层析净化一荧光光度法测定食品中黄曲霉毒素的条件和详细分析步骥本标准适用于玉米、花生及其制品(花生酱、花生仁、花生米)、大米、小麦、植物油脂、酱油、食醋等食品中黄曲霉毒素的测定。样品中黄曲霉毒素的检出限:免疫亲和层析净化一高效液相色谱法测定黄曲霉毒素B,以及黄曲霉毒素B,B.、G,、G。总量检出限为1Pg/kg。免疫亲和层析净化一荧光光度法测定黄曲霉毒素B、B.、Gi、G。总量检出限为1Pg/kg.酱油样品中检出限为2.5Pg/kg。免疫亲和层析净化高效液相色谱法2.1方法提要试样经过甲醇-水提取,提取液经过滤、稀释后,滤液经过含有黄曲霉毒素特异抗体的免疫亲和层析净化·此抗体对黄曲霉毒素B、B.、G,、G。具有专一性.黄曲霉毒素交联在层析介质中的抗体上。用水或吐温-20/PBS将免疫亲和柱上杂质除去,以甲醇通过免疫亲和层析柱洗脱.洗脱液通过带荧光检测器的高效液相色谱仪柱后碘溶液衍生测定黄曲霉毒素的含量。2.2试剂和溶液除非另有规定·仅使用分析纯试剂、重蒸雷水2.2.1甲醇(CH.OH):色谱纯。2.2.2甲醇-水(7+3):取70mL甲醇加30mL水.2.2.3甲醇-水(8+2):取80mL甲醇加20mL水。2.2.4甲醇-水(45+55):取45mL甲醇加55mL水2.2.5苯:色谱纯2.2.6乙清:色谱纯、2.2.7苯-乙膀(98+2):取2mL乙腈加98mL苯2.2.8氯化钠(NaCl)。2.2.9磷酸氢二钠(NaaHPO,)。2.2.10磷酸二氢钾(KH.PO,)2.2.11氯化钾(KCI)。2.2.12PBS缓冲溶液:称取8.0g氯化钠.1.2g磷酸氢二钠.0.2g磷酸二氢钾,0.2g氯化钾,用990mL纯水溶解,然后用浓盐酸调节pH值至7.0.最后用纯水稀释至1000mL.2.2.13吐温-20/PBS溶液(0.1%):取1mL吐温-20,加入PBS缓冲溶液并定容至1000mL2.2.14pH7.
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