仪器验证演讲稿

方法验证

吴卫良20100820验证一、验证的定义验证就是证明某一程序、生产过程、设备、物料、活动或系统确实能达到预期结果的有文件证明的一系列活动。下面就和大家一起共同讨论学习。二、仪器性能的验证

为了确保使用该仪器检测数据真实靠，确认该仪器的各项指标能达到该仪器所设置的性能指标，对该仪器进行必要的验证。1、输液系统液相色谱仪的输液系统一般由储液罐、脱气装置、比例控制阀和高压输液泵组成；而影响分析结果的关键是泵的性能，对泵的性能的验证即对泵流量准确度和精密度的验证。1.1泵流量准确度的验证

通过收集一定时间内不同流速的流出液，然后用称重的方法计算流出量的实际值，来判断该泵流量的准确度。

可执行标准：＜±3%

下表为水流动相的测得流速设定值V1（ml/min）

1.02.02.53.03.54.05分钟收集量（g）

收集量转换成体积(ml)实际流速V2（ml/min）流量准确度（%）（︱V2-V1︱）/V1×100%1.2泵流量精密度的验证

通过收集一定时间内1ml/min流速的流出液5次，然后用称重的方法计算流出量的实际值，来判断该泵流量的精密度。

可执行标准：＜±0.3%（0.997ml/min～1.003ml/min）下表为以水流动相的测得次数123455分钟收集量（g）收集量转换成的体积(ml)

实际每分钟流出量（ml/min）

流量精确度RSD（%）1.3泵梯度准确度的验证由梯度控制装置设定特定的洗脱程序，A溶剂为水，B溶剂为0.1%丙酮的水溶液。执行梯度程序，画出曲线变化。根据B溶剂的含量及对应的响应值，来计算梯度误差。梯度误差一般应小于1.0%。原理：因为流动相中丙酮的浓度和它在一定波长处的吸收成正比；所以根据比例阀来调节丙酮溶液的比例变化并记录相应波长下吸收线的变化，从而来确定比例阀梯度的误差。下图为在不断增加B溶剂的比例的理论吸收曲线1.4压力范围

测试方法

在进样阀的出口接一个两通，再将两通的另外一端用OD1.6的盲管封住；启动泵，使压力升至所设定的压力，观察仪器是否自动停泵。

设定值分别为：10.0Mpa、20.0Mpa、30.0Mpa

可执行标准:±0.2MPa设定值

1.5自动进样器（1）进样器影响分析结果的因素是样品进样量的准确度；（2）进样器一般有①使用微量注射器通过流通阀进样，样品进样量取决于微量注射器的刻度和操作者；②通过流通阀和定量环进样，样品进样量取决于定量环的容积；对定量环的容积验证可以通过对定量管残留量的测定进行；用高浓度的对照品进行进样，注射定量环三倍量的溶液，计算峰面积A；然后用容剂进行进样，同样注射定量环三倍量的溶液，计算峰面积B。执行标准：B/A<0.02%

③通过自动进样装置进样，样品进样量取决于自动进样装置的精密度和设置；对样品进样量的验证包括两部分：一部分是某一进样下，连续进样六次，计算峰面积和保留时间的相对标准偏差，一般不大于2%和1%；

另一部分是通过对某一样品不同进样量下进样，计算不同进样量和不同峰面积的线性关系，一般应大于0.9992UV检测器

2.1波长准确度和重复性验证

向检测器入口注入紫外吸收标准溶液，进行波长检测，利用其特征吸收波长与波长标准值进行比较，计算波长示值的误差和重复性。组号123456RSD峰面积≤2%保留时间（min）≤1%2.2噪声与漂移

可执行标准：噪声＜±1.0×10-4AU漂移＜±5.0×10-4AU/hr测试方法：将仪器各部连接好，紫外检测器调至250nm，流动相为甲醇，流速为1.0ml/min，待柱平衡稳定后，进行基线的测试，测试时间半小时，观察并记录测试结果。三、分析方法验证1、准确度准确度系指用该方法测定值与真实值之间的一致性或接近的程度，一般用回收率（%）表示。测定方法：准确度应在规定的范围内建立。制备3个不同浓度的样品，各测定3次，即测定9次，报告已知加入量的回收率（％）或测定结果平均值与真实值之差及其可信限。回收率＝（测定液平均测定值M-原样品液含量平均值P）/加入量A×100％2、精密度精密度系指在规定的测试条件下，同一均质样品，经多次取样进行一系列检测所得结果之间的接近程度（离散程度）。精密度一般用偏差、标准偏差或相对标准偏差表示。精密度可分为批内精密度和批间精密度两种。批内精密度：是同一次测定的精密度。通常采用高、中、低三种浓度的同一样品各7-10份，每种浓度的样品按所拟定的分析方法操作，一次开机后，一一测定。计算每种浓度样品的SD值或RSD值。批间精密度：是不同次测定的精密度。通常采用高、中、低三种浓度的同一样品，每种浓度配制7-10份，置冰箱冷冻。自配制样品之日开始，按所拟定的分析方法操作，每天取出一份测定，计算每种浓度样品的SD值或RSD值。3、检测限

是指分析方法能够从背景信号中区分出被分析物时，所需样品中药物的最低量，可以不用准确定量。LOD是一种限度检验效能指标，它既反映方法与仪器的灵敏度和噪音的大小，也表明样品经处理后空白(本底)值的高低。要根据采用的方法来确定检测限。当用仪器分析方法时，可用已知浓度的样品与空白试验对照，记录测得的被测药物信号强度S与噪音(或背景信号)强度N，以能达到S／N＝2或S／N＝3时的样品最低药浓为LOD；也可通过多次空白试验，求得其背景响应的标准差，将三倍空白标准差(即3δ空或3S空)作为检测限的估计值。为使计算得到的LOD值与实际测得的LOD值一致，可应用校正系数(f)来校正，然后依之制备相应检测限浓度的样品，反复测试来确定LOD。4、定量限是指在保证具有一定可靠性(一定准确度和精密度)的前提下，分析方法能够测定出的样品中分析物的最低量。它反映了分析方法测定低药物浓度样品时具有的可靠性。它与上述的检测限的差别在于：定量限要定量测定某一分析物在样品介质中的最低量，且定量限规定的最低量应该符合一定的精密度和准确度的要求。确定定量限的方法也因所用方法不同而异。如用仪器分析方法时，则往往将多次空白试验测得的背景响应的标准差(即空白标准差)乘以10，作为定量限的估计值，然后，再通过分析适当数量已知接近定量限或以定量限制备的样品来验证。5、专属性

专属性系指在其他成分（如杂质、降解产物、辅料等）可能存在下，采用的方法能正确测定出被测物的特性。鉴别反应、杂质检查、含量测定方法均应考察其专属性。如方法不够专属，应采用多个方法予以补充。1、鉴别反应鉴别试验应确证被分析物符合其特征。专属性试验要求证明能与可能共存的物质或结构相似化合物区分，需确证含被分析物的样品呈正反应（可与已知对照物比较），而不含被测成分的样品呈负反应，以及结构相似或组分中的有关化合物，也应呈负反应。2、杂质检查在杂质可获得的情况下，可向供试品中加入一定量的杂质，证明杂质与共存物质能得到分离和检出，并具有适当的准确度与精密度。在杂质或降解产物不能获得的情况下，专属性可通过与另一种已证明是合适的、分离或检测原理不同、或具较强分辨能力的方法进行结果比较来确定。必要时可采用二极管阵列检测和质谱检测，进行色谱峰纯度检查。

3、含量测定

在杂质可获得的情况下，对于主成分含量测定可在供试品中加入杂质或辅料，考察测定结果是否受干扰，并与未加杂质和辅料的试样比较测定结果。

在杂质或降解产物不能获得的情况下，可采用另一个经验证了的或药典方法进行比较，比对两种方法测定的结果。也可采用破坏性试验（强光照射，高温，高湿，酸、碱水解及氧化），得到含有杂质或降解产物的试样，用两种方法进行含量测定比较测定结果。必要时进行色谱峰纯度检查，证明含量测定成分的色谱峰中不包含其他成分。

6、线性与范围线性系指在设计的范围内，检测结果与试样中被分析物的浓度（量）直接呈线性比例关系的能力。范围系指能够达到一定的准确度、精密度和线性，测试方法适用的试样中被分析物的高低限浓度或量的区间。所谓线性范围是指利用一种方法在取得精密度、准确度均符合要求的试验果，而且成线性的供试物浓度的变化范围，其最大量与最小量之间的间隔。线性与范围的确定可用作图法(响应值Y／浓度X)或计算回归方程(Y＝a+bX)来研究建立。

每次作标准曲线时，方法应与分析方法考核时完全一致。标准浓度应包括一定梯度的5-8个浓度，每个浓度只需测定一次；标准曲线应覆盖样品可能的浓度范围，对于含量测定要求一般浓度上限为样品最高浓度的120％，下限为样品最低浓度的80％；目前仍广泛采用相关系数(r)表示标准曲线的线性度、并控制r≥0.9900。对照品的LOQ必须包括在线性范围内（LOQ测量限度）。7、耐用性(robustness)耐用性系指测定条件发生细小变动时，