实验一 磺胺嘧啶在体小肠吸收实验

实验一磺胺嘧啶在体小肠吸收实验药学系药剂教研室一、实验要求1.掌握大鼠在体肠管循环灌流法研究药物吸收的实验方法。2.掌握药物肠管吸收的机理和计算吸收速度常数(ka)、吸收半衰期(t1/2（a）)的方法。二、仪器、试剂和动物（一）仪器恒流泵、紫外分光光度计、石英比色皿、万分之一分析天平、电子秤（称大鼠）、恒温水浴、温度计、红外线灯、玻璃插管、2mL和10mL移液管、锥形瓶、烧杯、注射器、眼科剪刀、眼科镊子、普通中号镊子、小剪刀、动物实验操作台、手术线、手术纱布、10mL容量瓶、1000mL容量瓶、10mL带塞试管、量筒、手术止血钳二、仪器、试剂和动物（二）试剂磺胺嘧啶原料药、酚红、1%NaNO2溶液、0.5%氨基磺酸铵溶液、0.1%二盐酸萘基乙二胺溶液、1mol/L盐酸、0.2mol/L氢氧化钠、生理盐水、Krebs-Ringer试剂（pH7.4）、25%乌拉坦等。（三）动物大鼠，约200g，实验前禁食一夜（自由饮水）消化道药物吸收的主要方式为被动扩散。其透过速度与膜两侧的浓度差成正比，可用下式表示：

Cp相对于CGI可忽略不计，若设DkS/h=k’上式可简化为上式说明药物膜透过速度属于表观一级速度过程。三、实验原理D为药物在膜内的扩散系数；k为药物在膜／水溶液中的分配系数；S为药物扩散的表面积；CGI为消化道内药物浓度；Cp为血液中药物浓度；h为膜的厚度三、实验原理以消化液中药物的量的变化率dX/dt表示透过速度，则：-dX/dt=kaX，积分后为根据回归方程求得t1/2=0.693/kaXn的求算Xn=Cn×Vn

在小肠吸收过程中，药物被吸收的同时水分也被吸收，使Vn不断减少，利用酚红不被吸收，测定不同时间酚红的浓度，求算Vn。三、实验原理四、实验内容1．试剂的配制Krebs-Ringer试剂(pH7.4)（已准备）：称取NaCl7.8g，KCl0.35g，CaCl20.37g，NaHCO31.37g，NaH2PO40.32g，MgCl20.02g，葡萄糖1.4g，加蒸馏水适量使成l000mL。

1%NaNO2溶液（100mL）0.5%氨基磺酸铵溶液（100mL）0.1%二盐酸萘基乙二胺溶液（200mL）1mol/L盐酸（400mL）0.2mol/L氢氧化钠（400mL）2．供试液与酚红液的配制（已准备）(1)供试液：精密称取磺胺嘧啶20mg、酚红20mg于1000mL容量瓶中，加Krebs-Ringer试剂定容，摇匀。(2)酚红液：精密称取酚红20mg于1000mL容量瓶中，加Krebs-Ringer试剂定容，摇匀。四、实验内容3．循环实验的操作(1)蠕动泵流速的调节：选择所需工作方向，按动快、慢档开关，调节流速为5mL/min和2.5mL／min。(2)恒温水浴调节：水浴温度调节为（37±0.5）℃。(3)供试液的准备：取80mL供试液加入循环装置的烧瓶中，见下图，将烧瓶置恒温水浴中预热至（37±0.5）℃。(4)生理盐水的准备：取生理盐水适量，预热至37℃备用。四、实验内容(5)大鼠麻醉：取实验前禁食一夜、体重约为200g的雄性大鼠一只，按1.2g／kg体重腹腔注射乌拉坦（约0.8mL）麻醉，并固定于固定台上。四、实验内容(6)小肠两端插管：沿大鼠腹部中线打开腹腔(约3cm)，在十二指肠上部和回肠下部各切一小口，插入直径约0.3cm的玻璃管，并用线扎紧。四、实验内容(7)肠管洗涤：用注射器将37℃的生理盐水缓缓注入肠管，洗净肠管内容物。注意：

先将肠管捋顺，确保无死结；推注时不要太快，以免涨破肠管；充分洗净后送入空气使洗涤液尽量流尽。四、实验内容(8)做成回路：将肠管两端的玻璃管按图所示与胶管连接，做成回路，开动蠕动泵，其流速为5mL/min。四、实验内容(9)取样：以5mL/min流速循环10min后，将流速调节为2.5mL/min，立即自供试液烧瓶中取样两份(1mL和0.5mL各一份)，分别作为SD和酚红“0”时间样品，另向烧瓶中补加酚红液2mL，其后每隔15min按同法取样及补加酚红液，共取样9次，停止循环。四、实验内容4．含量测定（1）SD的标准曲线：取供试液2、4、6、8、10mL分别置l0mL容量瓶中，加蒸馏水定容。四、实验内容各取1mL+1mol/LHCl5mL摇匀+0.1％NaNO21mL摇匀放置3min+0.5％氨基磺酸铵1mL摇匀放置3min+0.1％二盐酸萘基乙二胺2mL摇匀放置20min550nm的波长处测定吸收度空白液：取酚红1.0mL，加1mol/LHCl5mL，摇匀，余下操作按上法操作（2）酚红的标准曲线：精密称取酚红约25mg置250mL容量瓶中，加蒸馏水定容，分别精密吸取1、2、3、4、5、6mL置10mL容量瓶中，加蒸馏水定容，再分别吸取0.5mL置10mL带塞试管中，加0.2mol/LNaOH5mL，摇匀。照分光光度法在555nm波长处测定吸收度。以吸收度对浓度回归，得到酚红标准曲线方程。四、实验内容空白液：0.2mol/LNaOH

(3)样品测定①SD的测定：取样品lmL置l0mL带塞试管中，加入lmol/L盐酸5mL，摇匀，以下步骤按SD标准曲线项下操作，在550nm的波长处测定吸收度。②酚红的测定：取样品0.5mL置10mL带塞试管中，加入0.2mol／LNaOH5mL，在555nm波长处测定吸收度。四、实验内容5．操作注意(1)在大鼠麻醉前应做好一切准备工作。如手术器械、水浴温度的调节，试药配制并放在近处，蠕动泵流速调节等。如果蠕动泵上并未标出流速，可用量筒接流出液（蒸馏水）的方式确定流速。(2)小肠很细，小肠两端插上玻璃管后再洗涤非常容易堵塞，应先将十二指肠端插上玻璃管，回肠端找好后先用线扎紧，然后在扎线处切个小口。生理盐水(37℃)从十二指肠端插管处注入，洗涤内容物至净，再在回肠端切口处插上玻璃管。四、实验内容5．操作注意(3)插玻璃管时应注意方向，在十二指肠端向下插，回肠端向上插，以构成回路。(4)SD的测定中，加入氨基磺酸钠后要充分振摇至无气泡发生。四、实验内容五、实验结果1.分别写出SD和酚红的标准曲线回归方程和相关系数。2.SD和酚红样品浓度的计算根据SD和酚红的标准曲线方程，分别计算出SD和酚红样品的浓度，并填于下表中。3.不同时间SD剩余量的计算按下表中公式计算出不同时间的剩余药量，并求剩余药量的对数值。4.ka和t1/2（a）的计算以剩余药量的对数对相应的时间作图，可得一条直线，由直线的斜率求出ka，并计算t1/2（a）。大鼠在体小肠吸收量的计算取样时间（h）SDASD浓度酚红A酚红浓度供试液体积剩余药量循环前A0C0A’0C’0V0=80mLP0=80*C00A1C1A’1C’1V1=C’0V0/C’1P1=C1V10.25A2C2A’2C’2V2=[(V1-1.5)C’1+40]/C’2P2=C2V2+1.5C10.5A3C3A’3C’3V3=[(V2-1.5)C’2+40]/C