【课件】1.2微生物的培育技术及应用（二 微生物的选择培养和计数）课件高二下学期生物人教版选择性必修3

自然界中微生物数量繁多，种类庞杂，要想从中分离出需要的特定微生物并不容易，尤其当要分离的微生物在混合的菌群中不是优势种群时，仅通过一般的平板划线法或稀释涂布平板法很难实现。该怎么办呢？二、微生物的选择培养和计数本节聚焦1.怎样运用生物与环境相适应的观点来解释选择培养的原理？2.如何通过调整培养基的配方来有目的地培养某种微生物？3.测定微生物数量的常用方法有哪些？二、微生物的选择培养和计数资料1973年，科学家从美国黄石国家公园的热泉中筛选出水生栖热菌(Thermusaquaticus)，进而从这种菌中提取出耐高温的DNA聚合酶。这种酶目前已被广泛用于体外扩增DNA片段的聚合酶链式反应(PCR)。提示1：这是因为水生栖热菌能在70~80℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。提示2：实验室中微生物的筛选，也可以应用同样的原理，即人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时抑制或阻止其他微生物的生长。讨论1.为什么水生栖热菌能从热泉中被筛选出来呢？2.以上例子给我们在分离纯化微生物带来什么启示？二、微生物的选择培养和计数

在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，称为选择培养基。（一）选择培养基1.概念二、微生物的选择培养和计数类型条件分离得到的菌种（1）改变培养条件（2）添加某种化学物质（3）营养缺陷70～80℃的高温水生栖热菌（一）选择培养基2.类型加入青霉素酵母菌、霉菌等真菌高浓度食盐金黄色葡萄球菌不加碳源不加氮源自养型微生物固氮菌培养基中加氨苄青霉素没有氨苄青霉素抗性的细菌具有氨苄青霉素抗性的菌落培养基应有菌落没有氨苄青霉素抗性的细菌被淘汰怎样选择出抗氨苄青霉素能力的细菌?（一）选择培养基二、微生物的选择培养和计数选择培养基配方的设计

尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。

讨论：1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？提示：设计一种选择培养基,用尿素作为唯一氮源,可以将分解尿素的细菌分离出来。。二、微生物的选择培养和计数选择培养基配方的设计

尿素［CO(NH2)2］含氮量高，化学性质稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，再被转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以作为细菌生长的氮源。

讨论：1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点？提示：这种培养基与普通培养基相比，只是用尿素作为唯一氮源，培养基的其他营养成分基本相同。二、微生物的选择培养和计数选择培养基配方的设计牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g蒸馏水定容到1000mlKH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000ml培养基一

讨论1.从物理性质看两种培养基属于哪类？依据是什么？2.从用途上来讲，哪个属于选择培养基？将得到何种细菌？3.两种培养基中共有哪些成分？哪些作为碳源、氮源？培养基二二、微生物的选择培养和计数选择培养基配方的设计牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g蒸馏水定容到1000mlKH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000ml培养基一

讨论1.从物理性质看两种培养基属于哪类？依据是什么？培养基的主要用途是什么？培养基二提示：都属于固体培养基。依据是添加了凝固剂琼脂，且比例为1.5%-2%。培养基的主要用途是分离、鉴定、计数。二、微生物的选择培养和计数选择培养基配方的设计牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g蒸馏水定容到1000mlKH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000ml培养基一

讨论2.从用途上来讲，哪个属于选择培养基？将得到何种细菌？培养基二提示：培养基二属于选择培养基；其可获得能分解尿素的微生物。二、微生物的选择培养和计数选择培养基配方的设计牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl5.0g琼脂20.0g蒸馏水定容到1000mlKH2PO41.4gNaH2PO42.1gMgSO4·7H2O0.2g葡萄糖10.0g尿素CO(NH2)21.0g琼脂15.0g蒸馏水定容到1000ml培养基一

讨论3.两种培养基中共有哪些成分？哪些作为碳源、氮源？培养基二提示：共有成分：碳源、氮源、无机盐、水培养基一的碳源为_______，氮源为_______；培养基二的碳源为_______，氮源为_______；牛肉膏蛋白胨葡萄糖尿素二、微生物的选择培养和计数

由以上分析，可知如何分离土壤中能分解尿素的细菌，然则，可否能估算出1g土壤中的有多少分解尿素的细菌呢？要如何解决？提示：不能，需要对土壤进行适当的处理以及科学的测定微生物数量的方法。由于土壤中细菌的数量庞大，要想得到能分解尿素的细菌的出培养物，必须对土壤进行充分稀释，然后再将菌液涂布在制备好的选择培养基上，也就是要采用稀释涂布平板法。二、微生物的选择培养和计数（二）微生物的选择培养二、微生物的选择培养和计数1.方法应采用稀释涂布平板法。2.方法概述由于土壤细菌的数量庞大，要想得到特定微生物的纯培养物，必须要对土壤进行充分稀释，然后再将菌液涂布到制备好的选择培养基上。两个基本操作：梯度稀释和涂布平板。二、微生物的选择培养和计数（二）微生物的选择培养3.实验的具体操作（2）土壤取样

从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。

取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。（1）制备培养基制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。二、微生物的选择培养和计数（二）微生物的选择培养（3）样品梯度稀释3.实验的具体操作在火焰旁称取土壤10g，加入90ml无菌水中，摇匀，制成稀释10倍的土壤菌液。

分别取1ml上清液，加入盛有9ml无菌水的试管中，制成不同稀释倍数的菌液。取6支试管，分别加入9ml无菌水。二、微生物的选择培养和计数（二）微生物的选择培养3.实验的具体操作（3）样品梯度稀释1ⅹ1071ⅹ1051ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ1049mL无菌水1ⅹ1090mL无菌水1mL1mL1mL1mL1mL1mL10g二、微生物的选择培养和计数（二）微生物的选择培养3.实验的具体操作（4）取样涂布平板①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中1ⅹ1071ⅹ1051ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ104②取0.1mL菌液，滴加到培养基表面③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8-10s。④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀

待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，放入30～37℃的恒温培养箱中培养1～2d，在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落。（二）微生物的选择培养3.实验的具体操作（5）培养与观察二、微生物的选择培养和计数二、微生物的选择培养和计数（二）微生物的选择培养3.实验的具体操作放入37℃恒温箱中培养1～2d（5）培养与观察稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照恒温培养箱二、微生物的选择培养和计数（二）微生物的选择培养

培养时要将一个未接种的培养基和一个已接种的培养基放在一起培养，为什么？未接种的培养基表面是否有菌落生长很关键，如果无菌落生长，说明了什么？提示：培养未接种的培养基的作用是对照。未接种的培养基在恒温箱中保温一段时间后。如果无菌落生长，说明培养基制备成功、合格，未受到污染。二、微生物的选择培养和计数（二）微生物的选择培养3.实验的具体操作二、微生物的选择培养和计数（二）微生物的选择培养注意事项：1.10g土样加入盛有90mL无菌水中后，已稀释10倍，在计算时，不要忽略；2.由于使用的是选择培养基，所以一般情况下，获得的单菌落即目的菌，但因为有些微生物可以利用目的菌的代谢产物来生长繁殖，所以还需要进一步验证；3.过程中所有操作都应在酒精灯火焰旁进行；4.将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后再放在火焰上灼烧；不要将过热的涂布器放在盛有酒精的烧杯中，以免引燃酒精。常用微生物分离方法比较比较平板划线法稀释涂布平板法工具接种环涂布器原理在数次划线后培养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落特点方法简单，但不适宜计数单菌落更易分开，可以计数，但操作复杂结果共同点使培养基上形成由单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落二、微生物的选择培养和计数问：以上两张图分别是平板划线法和稀释涂布平板法培养细菌的结果。如果要对菌落进行计数，则哪种方法可行？为什么？得到的细菌数量是确切的细菌数量吗？二、微生物的选择培养和计数（三）微生物的数量测定1.间接计数法——稀释涂布平板法（1）原理

当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照二、微生物的选择培养和计数（三）微生物的数量测定1.间接计数法——稀释涂布平板法（2）计数原则①一般选择菌落数为30～300的平板计数。②在同一稀释度下，应至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值。③适当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键。稀释103倍稀释104倍稀释105倍空白对照二、微生物的选择培养和计数（三）微生物的数量测定1.间接计数法——稀释涂布平板法（3）结果分析①统计的菌落数往往比活菌的实际数目少；②统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。原因：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。二、微生物的选择培养和计数（三）微生物的数量测定1.间接计数法——稀释涂布平板法（4）计算公式每g样品中的菌落数＝(C÷V)×MC代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)；M代表稀释倍数。

例1.某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每g样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL)()A.2.34×108B.2.34×109

C.234D.23.4B二、微生物的选择培养和计数（三）微生物的数量测定1.间接计数法——稀释涂布平板法（5）使用范围

可以用来测定土壤、水、食品等样品中的细菌、酵母菌、芽孢和孢子等的数量，但不适于测定样品中的放线菌、丝状真菌等丝状体微生物的数量。二、微生物的选择培养和计数（三）微生物的数量测定2.直接计数法（1）计数板计数法（2）比浊法血细胞计数板和细菌计数板二、微生物的选择培养和计数提出问题作出假设设计实验实验思路预测实验培养液中酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？①培养液中的酵母菌数量一开始呈“______”型增长；②随着时间推移，由于营养物质的______、有害代谢产物的__________、pH的_________，酵母菌数量呈_________型增长。J消耗积累改变S自变量：________________________因变量：________________________无关变量：_______________________时间酵母菌数量培养液的体积等培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验进行实验实验结果实验结论培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路1.如何计数？如何计算？2.从试管中析出培养液进行计数之前，为什么要将试管轻轻震荡几次？3.实验需要设置对照吗？为什么？4.需要重复实验吗？5.怎样设计表格记录结果？6.如果一个小方格内酵母菌数过多？难以数清，应采取怎样的措施？7.对于压在小方格界限上的酵母菌，应当怎样计数？1.如何计数？如何计算？酵母菌培养液（1）血细胞计数板

（2）抽样检测法一定体积的培养液稀释培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路（1）血细胞计数板

培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路（1）血细胞计数板

计数池计数室1mm0.1mm

每块计数板由H形凹槽分为两个同样的计数池。每个计数池分为9个大方格，其中间的一大方格又称为计数室，微生物的计数就在此大方格中进行。

每个计数室面积1mm2，液体高度0.1mm，所含液体体积为0.1mm3。培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路计数室（1）血细胞计数板

16个中方格25个中方格25个小方格16个小方格16×25一个计数室有小方格：400，每个小方格的面积：1/4000mm2。25×16每个计数室（大方格）共4000个小方格，总体积为0.1mm3。培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路每个计数室（大方格）共400个小方格，总体积为0.1mm3。16个中方格25个中方格16个小方格25个小方格（1）血细胞计数板

培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路思考1.如何对培养液进行稀释？1ⅹ101ⅹ1071ⅹ1051ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ104培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路对样方的计数原则是2.如何统计结果思考培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路（1）血细胞计数板

1.规格：每个计数室（大方格）共400小格（16或25个中方格），其面积是1mm2，总体积为0.1mm3。2.计数：方格内+相邻两边及顶角（取多个方格求平均值）。3.计算酵母菌细胞个数/mL=每个小方格平均细胞数×400×稀释倍数10-40.1mm3=0.1×10-3cm3=10-4mL培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路16个中方格25个中方格16个小方格25个小方格（1）血细胞计数板

酵母菌细胞个数/mL=每个中方格平均细胞数×1610-4×稀释倍数25酵母菌细胞个数/mL=每个小方格平均细胞数×40010-4×稀释倍数培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路（1）血细胞计数板

培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路（2）抽样检测法培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路（2）抽样检测法1.将盖玻片放在计数室上；2.吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行深入，多余的滤液用滤纸吸去；3.静置片刻，待酵母菌全部沉降到计数室底部，将血细胞计数板置于载物台上夹稳；4.观察并计数一个小方格内的酵母菌数量，估算试管中酵母菌的总量。（方格内及相邻两边）（取几个方格，然后求均值）培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路1.若先将培养液滴在计数板上，再盖上盖玻片，则实验结果_______（填“偏大、偏小或不变”）；2.若酵母菌未全部沉降到计数室底部就观察计数，则实验结果_______（填“偏大、偏小或不变”）。培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路（2）抽样检测法培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路2.从试管中析出培养液进行计数之前，为什么要将试管轻轻震荡几次？提示：事酵母菌分布均匀，以保证估算的准确性，减少误差。提示：不需要另设对照组，本实验的对照类型是自身对照。4.需要重复实验吗？3.实验需要设置对照吗？为什么？提示：不需要，计数时取多个方格求平均值。培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验设计实验—实验思路5.怎样设计表格记录结果？培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验6.如果一个小方格内酵母菌数过多？难以数清，应采取怎样的措施？7.对于压在小方格界限上的酵母菌，应当怎样计数？设计实验—实验思路提示：增大稀释倍数。设计实验—预测结果培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验进行实验液体培养基、无菌、适宜温度（25℃）酵母菌的培养计数（抽样调查法）重复前两步试管轻轻震荡（使酵母菌均匀分布，减小误差）血细胞计数板+光学显微镜（有时需定量稀释）连续7天（每天固定时段进行计数）实验结果实验结论

酵母菌种群数量的变化呈“S”形曲线增长，但是在增长后期多了衰亡期。培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验培养液中酵母菌种群数量的变化探究实验

一般情况下，计数所得酵母菌种群数量，比实际值大还是小？为什么？提示：会比实际要大。因为在计数所得的数据包含了死菌和活菌。如何克服以上难题？提示：区分死菌和活菌。可采用台盼蓝对酵母菌进行染色。能被染成蓝色的则为死菌，不能被染色的则是活菌。在此条件下，计数酵母菌时，只需计数不被染色的酵母菌。

酵母菌是属于真核生物，可以用血细胞计数板对其进行种群数量的计数。血细胞计数板只适用于真核细胞的计数。要对细菌（原核细胞）进行计数则需要细菌计数板。二、微生物的选择培养和计数血细胞计数板和细菌计数板有没有却别？（三）微生物的数量测定2.直接计数法（1）计数板计数法血细胞计数板和细菌计数板血细胞计数板和细菌计数板有没有却别？

它们的区别就是计数室的高度不同，细菌计数板计数室的高度是0.02mm2。故细菌计数板计数细菌的计算是：细菌细胞个数/mL=每个小方格平均细胞数×4002×10-5×稀释倍数0.02mm3=0.02×10-3cm3=2×10-5mL二、微生物的选择培养和计数（三）微生物的数量测定2.直接计数法（1）计数板计数法血细胞计数板和细菌计数板（三）微生物的数量测定2.直接计数法（1）计数板计数法血细胞计数板和细菌计数板（2）比浊法

也是一种直接计数法，能快速地测定菌悬液中细胞数量。由于菌悬液中的单细胞微生物的细菌浓度与光密度成正比，与透光度成反比，因此可以借助分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，进而将未知细胞的菌悬液的光密度与已知细胞数的相比，就可以换算出未知菌悬液所含的细胞数。以上两种方法都无法区分死菌和活菌。二、微生物的选择培养和计数土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验提出问题作出假设设计实验实验思路预测实验进行实验实验结果实验结论

土壤中含有能分解尿素的细菌，我们如何分离它们？每克土壤样品究竟含有多少这样的细菌？

利用以尿素作为唯一碳源的选择培养基，可以分离。自变量：________________________因变量：__________________________无关变量：______________________________尿素能分解尿素细菌的生长情况培养时间、培养基的pH、温度等设计实验—实验思路1.土壤取样2.制备培养基3.样品稀释与取样涂布4.微生物的培养与观察设计实验—预测实验土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验进行实验1.实验目的（1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌。（2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌。2.实验原理绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，利用以尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分离尿素的细菌。葡萄糖10.0g尿素1.0gKH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO4·7H2O0.2g琼脂15.0g蒸馏水1000ml①提供无机盐；②调节pH。CO(NH2)2+H2O脲酶2NH3+CO2常见的分解尿素的微生物：芽孢杆菌、小球菌、棒状杆菌等细菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验进行实验注意事项：取土样时用的铁铲和取样袋在使用前都需要灭菌。操作完成后，一定要洗手。3.实验步骤（1）土壤取样①取样地点要求：酸碱度接近中性的潮湿土壤。细菌适宜在该环境中生长。②取样过程：铲去表层土（一般3cm左右）。细菌绝大部分分布在距地表3～8cm的土壤层。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验进行实验3.实验步骤①测细菌数：一般用104、105、106稀释液。②测放线菌：一般用103、104、105稀释液。③测真菌数：一般用102、103、104稀释液。（2）样品的稀释与涂布平板

不同微生物在土壤中含量不同，分离不同的微生物采用不同的稀释度，以保证获得菌落数在30～300之间适于计数的平板。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验

在初次实验中，对于稀释的范围没有把握，怎样做才能保证从中选择出菌落数在30～300的平板进行计数？

选用稀释范围更大的稀释液进行平板培养；例如可以将1×103-1×107倍稀释的稀释液分别涂布平板上培养，以保证能从中选择出菌落数为30-300的平板进行计算。思考土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验

每个浓度至少设置4个平板，1、2、3平板是选择培养基（实验组，三个重复），4为牛肉膏蛋白胨培养基（用以判断选择培养基是否具有选择作用）；整个实验还要设置2个平板：不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，以验证培养基中是否含有杂菌。进行实验3.实验步骤（2）样品的稀释与涂布平板土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验注意事项：本实验使用的平板和试管较多，为了避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时应该注明组别、培养日期和平板上培养样品的稀释度等。进行实验3.实验步骤（2）样品的稀释与涂布平板土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验①培养条件：不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在30～37℃的温度下培养1～2d。②观察：每隔24h统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果。防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。③一般来说，在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征，如形状、大小和颜色等。（3）微生物的培养与观察进行实验3.实验步骤土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验结果分析与评价

每个浓度至少设置4个平板，1、2、3平板是选择培养基（实验组，三个重复），4为牛肉膏蛋白胨培养基（用以判断选择培养基是否具有选择作用）；整个实验还要设置2个平板：不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，以验证培养基中是否含有杂菌。1.说出下列各组培养基目的。（1）3组接种得选择培养基：（2）1组接种的牛肉膏蛋白胨培养基：

对土壤中分解尿素的细菌分离和计数。

判断选择培养基是否具有选择作用。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验结果分析与评价

每个浓度至少设置4个平板，1、2、3平板是选择培养基（实验组，三个重复），4为牛肉膏蛋白胨培养基（用以判断选择培养基是否具有选择作用）；整个实验还要设置2个平板：不涂布稀释液的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基，以验证培养基中是否含有杂菌。1.说出下列各组培养基目的。（3）不接种的选择培养基：（4）不接种的牛肉膏蛋白胨培养基：

验证选择培养基中是否含有杂菌。

验证牛肉膏蛋白胨培养基中是否含有杂菌。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验结果分析与评价2.说出以下现象对应的结果分析。现象分析未涂布培养基上无菌落生长未涂布培养基上有菌落生长牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数目明显多于选择培养基上的菌落数木培养基未被杂菌污染培养基被杂菌污染选择培养基具有选择作用土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验结果分析与评价3.结合对照组，分析培养物中是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。提示：如果没有接种的培养基上没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。如果接种后的完全培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，说明选择培养基筛选出了一些尿素分解菌。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验结果分析与评价

4.你是否获得了某一稀释度下菌落数为30~300的平板？在这一稀释度下，是否至少有2个平板的菌落数接近？提示：如果得到了两个或多个菌落数为30～300的平板，说明稀释度合适，操作比较成功，能够进行菌落的计数。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验结果分析与评价

5.你统计的每克土样中能分解尿素的细菌的菌落数是多少？与其他同学统计的结果接近吗？如果差异很大,可能是什么原因引起的？提示：如果是用同一土样进行的操作，数据应该比较接近。如果差异很大，就需要从操作是否规范、培养基配制是否合理等方面查找原因。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验

本活动只是初步筛选了能分解尿素的细菌,对分离的菌种进行鉴定还需要借助生物化学的方法。你可以查阅相关资料,进一步设计实验来鉴定自己分高的菌种。进一步探究土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验进一步探究1.原理

细菌合成的脲酶将尿素分解为氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，因此可以通过检测培养基pH的变化来判断是否发生了该化学反应，进而判断该菌是否为尿素分解细菌。土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养某种细菌后，如果pH升高，指示剂将变红：（1）液体培养基可以直接看液体的变色情况；（2）固体培养基上可以观察菌落周围是否出现红色环带，红色环带直径与菌落直径比值越大，说明分解能力越强。进一步探究2.方法土壤中分解尿素的细菌的分离和计数探究实验二、微生物的选择培养和计数到社会中去1.空气中微生物总数的检测？2.水中细菌总数的检测？3.牛奶中细菌的分离与计数？4.土壤中真菌（或放线菌）的分离与计数？练习与应用一、概念检测

1.研究人员用无机盐、琼脂和石油配制的培养基从被石油污染的土壤中筛选出了一种石油降解菌。判断下列相关表述