全自动电泳培训

Experion全自动电泳技术

张姣时代联想生物科技有限公司内容全自动电泳的原理全自动电泳的结构组成全自动电泳系统的应用全自动电泳的实验流程全自动电泳的软件演示电泳是实验室最常用的技术蛋白质电泳核酸电泳传统电泳局限性时间长有毒试剂操作繁琐提供的数据有限全新的电泳解决方案时间短可自动化安全无毒节省样品数据分析准确、可靠

Experion全自动电泳

Bio-Rad在蛋白、核酸分离及分析上的优势先进的芯片电泳技术完美结合Experion™全自动电泳系统

创新的电泳解决方案Experion全自动电泳技术原理微流体芯片分离技术芯片组成：一个底座和一个附在底部的小玻璃板玻璃板上刻有许多的微通道，以优化过的网络模式排列微通道中充满液态凝胶电泳工作站对整个通道网络上的电压和电流进行控制，引导样本通过这些微通道进行分离和检测激光诱导荧光检测技术灵敏度和专一性好Experion芯片结构微流体芯片结构123475869101112/LGel-StainL/SEGel-StainGelInjectionintersectionSeparationchannelDetectorlocation0.4mA0.2mA0mA0mA0mA0mA-3mA0mA0mA2000V0mA0.6mAseparationinjectiondetector微流芯片分离技术0.2mA0.4mA0mA0mA0mA0mA825V0mA825V2000V825V0.2mAseparationinjectiondetector微流芯片分离技术LoadingChannel1SeparationChannel2LaserDetectornext微流芯片分离技术分析试剂制胶工作站涡旋工作站全自动电泳工作站Experion仪器组成数据分析软件Experion™RNAStdSenssRNA标准芯片Experion™Pro260Pro260芯片Experion™RNAHighSensRNA高灵敏度芯片DNA芯片

Kitswith10or25chips

试剂和芯片分析试剂AnalysisKitsPrimingStationElectrophoresisStationSoftwareVortexStation芯片设计点样孔均有明确标识指示您进行正确的制胶及上样重新设计的通道结构全面改善分辨性能醒目的压力和时间设置条件，便于制胶工作站的设置分析试剂盒组成RNA分析试剂盒Experion™RNAStdSenssExperion™RNAHighSensDNA1K/12k分析试剂盒Pro260蛋白质分析试剂盒Experion™Pro260制胶工作站AnalysisKitsPrimingStationElectrophoresisStationSoftwareVortexStation用于制备样本分析的芯片，制胶工作站对芯片的装填孔施加压力，并使用预先测定的时间和压力设置将凝胶染色溶液注入到芯片微通道的网格中。制胶工作站液晶显示屏(带有预设的时间和压力以及整合定时器)控制按钮开盖控制杆制胶工作站制胶密封设备整合活塞泵芯片平台涡旋工作站AnalysisKitsPrimingStationElectrophoresisStationSoftwareVortexStation确保样本和用于RNA分析的加样缓冲液(试剂盒中配备)在芯片孔中完全混合。涡旋工作站涡旋适配器，可安全的固定芯片1分钟计时器开关电泳工作站AnalysisKitsPrimingStationElectrophoresisStationSoftwareVortexStation电泳工作站对整个通道网络上的电压和电流进行控制，引导样本通过这些微通道，完成电泳分离、染色、条带检测等过程电泳工作站绿色盖子“开盖”托电源指示电源按钮橡胶底架电极部件电极线芯片平台自动控制及分析软件AnalysisKitsPrimingStationElectrophoresisStationSoftwareVortexStation完成电泳工作站的控制、电泳结果的数据分析在结果列表中进行自动计算样品信息分子量大小比较总面积的百分比下拉列表显示统计信息:平均分子量,浓度%样品间的变异系数自动控制及分析软件对蛋白/RNA/DNA样品的定量分析与ladder中的标准品进行比较的相对定量结果与用户处定义标准品的绝对蛋白质量软件自动计算和检测自动控制及分析软件

Experion工作流程（30分钟）选择芯片自动制胶涡旋（RNA电泳时）芯片电泳数据分析

1.使用前清洗电极

2.gel的过滤和gel-stain溶液的准备

3.

RNALadder和样品的准备

4.将gel-stain置入芯片制胶

5.芯片加样，漩涡震荡

6.进行RNA检测

7.清洗电极实验程序简介Experion操作（以RNA分析为例）电极清洗是日常工作1．在清洗芯片中加入800ul的清洗液，并确保在该芯片中没有气泡。如果发现有气泡，则应轻轻赶走气泡，并标注该清洗芯片为RNA专用清洗芯片。2.打开全自动电泳仪的盖子，并将清洗芯片嵌入芯片平台。3.关上盖子，清洗芯片应静置2分钟。4.在清洗芯片中加入800ulDEPC水，并做好标记。5.打开盖子，取出清洗芯片，再在该芯片中加入800ulDEPC水，如此反复用DEPC水清洗，共4次以上。6.关上盖子，在全自动电泳仪中安置清洗芯片停留5分钟，清洗电极。7.清洗后，倒去清洗芯片中的水，并重新加入800ulDEPC水，重复第6步清洗。8.打开盖子，取出清洗芯片。9.打开全自动电泳仪的盖子30-60秒，使电极上的水份蒸发干净。10.实验完毕后，请将清洗芯片中的DEPC水倒去。Experion操作（以RNA分析为例）制备gel-Stain1使用前将RNA胶（RNAgel），RNAstain和上样buffer（loadingbuffer）从冰箱中取出，避光，并在室温平衡15-20分钟。2振荡RNAstain（蓝色帽），离心3-5秒钟，确保染色剂（stain）中的DMSO完全溶解3在过滤离心管（spinfiltertube）加入600ulRNAgel（绿色帽）4将上述（1）胶1，500g离心10分钟。使所有胶都过滤后，丢弃已用的过滤离心管（spinfiltertube）。已过滤的胶可以在4周内使用，4周后过滤的胶，如要再使用须再过滤。5在无RNase的EP管中加入65ul已经过滤好的胶和1ulRNAstain（蓝色帽），振荡混匀，并避光备用。（足够1个芯片）6旋紧RNAStain管的盖子。由于二甲基亚砜（DMSO）为高度的光敏感，所以应避光保存。制备好的Gel-stain溶液应在一周内使用。7RNA样品和RNALadder,70℃变性2min，冰上5min。芯片制胶1.从包装盒中取出一块RNA芯片，按芯片上箭头所指方向和位置嵌入至置胶工作站的芯片平台；2.在GS孔中垂直加入9ulGel-stain，枪头应深入加样孔，加样时防止加入气泡；3.按RNA芯片上所示，设置工作模式：压力为B和置胶时间为1；4.启动START按钮，置胶工作站工作信息会在液晶显示屏上显示。整个置胶过程为30秒钟，在置胶过程中，切勿打开盖子。加样品和RNALadder1.将9ulgel-stain加入其他标有GS的孔中；2.在标有G的孔中，加入9ul过滤好的胶；3.上样buffer和sensitivityenhancer在使用前，要充分振荡；4.在标有SE的加样孔中加入6ulsensitivityenhancer；5.在每一个样品孔和标记有L的ladder孔中，加入5ul上样buffer（Loadingbuffer），即使待检测样品少于11个，也要把所有的加样孔都加满，没有样品的加样孔，要以Loadingbuffer代之，否则实验结果有误；6.加1ul变性的RNALadder至标记有L的加样孔中；7.在每一个样品孔中加1ul待测样品或Loadingbuffer；8.将加好样的芯片置于振荡器（vortexstaion）中悬浮，振荡1分钟，而后从振荡器中取出；9.加样后的芯片，要在5分钟内进行样品检测，否则样品溶液会蒸发，导致实验结果不准确

芯片内电泳30分钟AB100ng/µL1.6523S/16SRatioin“A”1.0423S/16SRatioin“B”Analysis:E.coliTotalRNASample:ProkTotalRNATotalRNA分析示例样品结束后清洗电极1.在清洗芯片中加入800ulDEPC水，轻轻拍击芯片，将加样孔中的气泡赶出2.打开全自动电泳仪的盖子，将清洗芯片放置进全自动电泳仪。3.关上盖子，让清洗芯片停留在全自动电泳仪中1分钟。4.打开盖子，取出清洗芯片，倒出芯片中的DEPC水。5.让全自动电泳仪的盖子打开30秒钟，吹干电极，而后关上盖子。6.为防止污染电极，清洗芯片使用完后，重新用DEPC水清洗该芯片。数据分析：RNAQualityIndicator蛋白质表达

优化蛋白质表达方法比较蛋白质表达模式基于蛋白质表达选择克隆ExperionTMSystem蛋白质纯化监测及优化蛋白质纯化

分析蛋白质纯度和产量

DNA、RNA分析RNA特性研究浓度检测定量PCR分析DNA芯片分析Experion应用应用一：蛋白电泳检测摸索蛋白最佳诱导、表达的时间蛋白层析后纯度检测传统的SDS费时费力全自动电泳与任何品牌或型号的层析设备搭配，方便、快捷SDS纯度100%??在蛋白质纯化中的应用ShownaresamplesfromanIMACpurificationofHis-taggedDihydrofolate

Reductase(DHFR)proteinseparatedusingtheExperionsystemorbySDSLoadFlowThruElution

Wash%purityMWExperionRNA极易降解，使得定量PCR结果的可信度下降传统的方法是PAGE电泳，当28S/16S≥1.8时，认为样品完好方法费时费力，且需消耗较多样品应用二：RNA电泳检测RNAQualityIndicator(RQI)定量PCR前的检测NGS:WhereExperionFits(RNAandDNAassays)DNAlibraryShearAmplifyTotalRNAextractionRTtocDNASequence(e.g.Illumina,Roche,ABIsolid)CheckRNAIntegrityusingRNAchips.CheckDNAsmearToensureshearingProducedfragmentsizeRangeofinterest.Rangeofdesiredshearedsizevariesbasedonthenextgensequencingplatform.CustomersusingDNAchipRNAchip.BaylorCollegeofMedicine:sheareddscDNArunonDNA12KassayNote:TheselibrarieswereshearedandpreparedwithIllumina'sadapterssotheimageisthefinalcDNAlibrarybeforeitgoesonthesequencer.常见问题（troubleshooting）电泳、漩涡震荡、制胶工作站1、全自动电泳时屏幕显示“IVCheckFailure”或“Chiperror”芯片中1个或多个加样孔没有正确加样，或者电极没有完全被溶液所覆盖。因此，所有加样孔必须加满，没有加样品的孔须补