微生物实验-细菌培养、接种

第二次实验课内容1.细菌培养法（录象）2.基础培养基制备（讲解示教）3.细菌接种法（一份/组）讲解4.人体、物品中细菌检查（一份/组）讲解5.飞沫、空气中细菌检查（一份/桌）讲解6.观察细菌代谢产物（讲解）7.第一次实验报告评讲基础培养基的制备去筋膜黄牛肉绞碎500g加入1000ml蒸馏水直接煮沸2小时调整酸碱度至pH7.6过滤，补足失水重新校正pH一次分装，高压灭菌，15磅（121.3℃）15～20分钟检菌如无细菌生长（液体透明）即可应用脱脂纱布过滤，按比例加入1％蛋白胨、0.5%NaCl，0.1%K2HPO4加热溶解补足水至1000ml4℃浸泡过夜煮沸半小时人体、物品中细菌检查手衣发钱材料：普通平板（1份/组）盖上，标记,置37℃，18-24h后观察。飞沫、空气中细菌检查材料：血平板

（1份/组）距口15—20cm用力咳嗽三次置空气中（避日光照射）30分钟飞沫空气盖上，标记,置37℃，18-24h后观察。结果观察——血平板

表皮葡萄球菌在血琼脂平板培养基上形成不溶血的菌落。甲型溶血性链球菌形成的α溶血现象也称为甲型溶血现象或草绿色溶血现象，属于不完全溶血。金黄色葡萄球菌形成的β溶血现象也称为乙型溶血现象，属于完全溶血。细菌培养接种法——平板划线法

菌种：混合菌液材料：普通平板用具：接种环方法：分区划线1区2区3区4区原始区域半固体培养基斜面培养基

细菌培养接种法--斜面接种、液体接种、半固体菌种：大肠杆菌或葡萄球菌斜面材料：斜面、液体、半固体培养基用具：接种环、接种针液体培养基结果观察——普通平板

普通琼脂平板培养基上，大肠埃希菌形成菌苔和菌落生长现象。注意：大小、颜色、透明度、凸起度、表面干燥或湿润、光滑或粗糙、边缘是否整齐及血平板上的溶血情况。结果观察——液体培养基

结果观察——斜面培养基

琼脂斜面培养基上大肠埃希菌形成的菌苔生长现象菌苔（mossy）指细菌生长繁殖后，在培养基表面形成的一层培养物结果观察——半固体培养基

1、扩散生长：具有动力的细菌,可见培养物扩散和培养基变混浊。即有鞭毛的细菌：由穿刺线向外扩散生长（羽毛状或云雾状）2、原位生长：没有动力的细菌，可见培养物没有扩散，培养基仍然澄清。即无鞭毛的细菌：沿穿刺线生长

2

112细菌代谢产物观察

细菌的酶不一样，对营养物质的分解能力不一样，产生的代谢产物也不一样。常见：糖发酵试验吲哚（indol）试验甲基红（methylred）实验VP（Voges-Proskauer）试验枸橼酸盐利用（citrateutilization）试验尿素酶试验硫化氢试验糖发酵试验不同细菌分解糖类的能力和代谢产物不同。

甲基红（methylred）实验M-甲基红（methylred）实验葡萄糖→丙酮酸→乙酰甲基甲醇甲基红-葡萄糖→丙酮酸甲基红+吲哚（indol）试验I-吲哚（indol）试验色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚↑

对二甲基氨基苯甲醛枸橼酸盐利用试验C-枸橼酸盐利用（citrateutilization）试验利用枸橼酸盐生长+不能利用-

硫化氢试验硫化氢试验（醋酸铅培养基）某些细菌分解含硫氨基酸，生成H2S，H2S遇铁盐（如硫化亚铁、醋酸铅等），则形成黑褐色硫化铁（铅）沉淀物，而呈黑色为（＋）。

尿素酶试验

产生氨使培养基变碱，

指示剂显红色，为阳性。

如：变形杆菌为阳性。IMViC试验I-吲哚（indol）试验M-甲基红（methylred）试验V-VP（Voges-Proskauer）试验C-枸橼酸盐利用（citrateutilization）试验IMViC试验

IMViC试验大肠埃希菌++--

产气杆菌

--++IMViC试验：是吲哚、甲基红、V-P以及枸橼酸盐利用试验四者的合称。常用于肠道杆菌的鉴定。实验小结1、三类培养基液体培养基——用于增菌；

均匀混浊、沉淀、表面生长半固体培养基——观察动力；保存菌种（6个

月）；穿刺线，扩散生长固体培养基——分离纯化；保存菌种（1个月）

菌落、菌苔2、IMViC试验第三次实验课内容1、热力对细菌和芽胞的