阿司匹林肠溶片

实训四阿司匹林肠溶片的含量测定高效液相色谱法基本理论知识高效液相色谱仪的组成高效液相色谱仪的操作实训操作：高效液相色谱法测定阿司匹林肠溶片的含量液相色谱：经典液相色谱法

高效液相色谱法高效液相色谱法经典柱色谱法高压输送流动相无外加压力固定相粒度小、分布均匀固定相粒度大、分布不均色谱柱长度固定，内径小色谱柱长度差别大，内径大安装了在线检测器未安装在线检测器分离效能高，分析速度快分离效能低，分析速度慢高效液相色谱法的特点一、固定相：填充剂1.特点：颗粒细且均匀传质快机械强度高，能耐高压化学稳定性好，不与流动相发生化学反应高效液相色谱的基本原理2.化学键合相：用化学反应的方法将固定液的官能团键合在载体表面，多用硅胶作为载体。（1）非极性键合相非极性烃基，如C18﹑C8﹑C1与苯基等键合在硅胶表面。用于反相色谱。ODS键合相（2）弱极性键合相醚基和二羟基等键合相用于反相或正相色谱（3）极性键合相：常用氨基﹑氰基键合相（氰乙硅烷基≡Si(CH2)2CN)键合硅胶一般用于正相色谱3.化学键合相的特点使用过程中不流失化学稳定性好适于梯度洗脱载样量大注意：流动相的pH一般应在2-8，否则会引起硅胶溶解。二、流动相：洗脱剂1.要求与固定相不发生化学反应对试样有适宜的溶解度纯度高，粘度小。与检测器相适应。2.流动相对分离的影响n由色谱柱（固定相）性能决定α主要受溶剂种类的影响，α=K2/K1=k2/k1k受溶剂配比的影响。

3.洗脱方式等度洗脱（等浓度洗脱）

流动相所用的溶剂种类与配比恒定。梯度洗脱

在一定分析周期内，按一定程序，不断改变流动相的浓度配比。提高分离效果。4.流动相的强度和选择性流动性的极性与洗脱能力正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强反相色谱首选纯溶剂：甲醇、乙腈和水的组合。三、反相键合相色谱的分离条件固定相非极性键合相，如ODS流动相以水为基础溶剂，加入甲醇、乙腈等极性调节剂弱酸、弱碱或缓冲盐作为离子抑制剂加入0.1%－1%的醋酸盐、磷酸盐可减少残余硅醇基的作用储液罐控制系统脱气泵进样阀色谱柱检测器收集器数据处理系统自动进样仪器的重要组件高压输液泵输送流动相柱塞往复泵多元梯度洗脱装置进样器六通进样阀自动进样器色谱柱高效液相色谱系统中最重要的组件包括柱管和固定相主要柱参数：柱长、柱内径、粒径检测器紫外检测器（UV）：应用最为普遍固定波长、可变波长、二极管阵列（DAD）蒸发光散射检测器：ELSD仪器的操作过滤溶剂、流动相并超声脱气排气（开关、溶剂冲洗、Drain旋钮、Purge）溶剂、流动相冲柱（更换溶剂时要重新排气）打开检测器和色谱工作站（设置参数）进样（过滤、反复润洗进样针、旋转手柄）记录数据（保留时间、峰面积）平衡系统关闭仪器溶剂过滤装置PowerDrain(Open)PurgePumpPower实训操作肠溶片：查阅药典（色谱条件；方法）乙腈冲柱0.5h，流动相冲柱0.5h，进样供试品，对照品的配制记录峰面积乙腈：水（10：90）冲柱1h，乙腈冲柱0.5h实验数据测定波长（nm）流速（ml/min）进样量（μl）停止时间（min）流动相组成27611015保留时间（min）峰面积对照品

？？

供试品

？

？c=0.0100g/mL,W