Cha3 药物的杂质检查

药物分析

PharmaceuticalAnalysis

第三章药物的杂质检查§3.1概述

§3.2一般杂质的检查方法§3.3特殊杂质的检查方法2023/2/1概述§3.1概述

检查有效性：以动物实验为基础，最终以临床疗效来评价；安全性：热原检查、毒性试验、刺激性试验、过敏试验、升压或降压物质检查等。纯度要求：对各类杂质的检查；制剂通则：含量均匀性，溶出度、释放度、装量差异、生物利用度的均一性；2023/2/1一、药物的纯度与要求药物的纯度指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣。概述含量测定杂质检查理化常数外观性状结构药物纯度药物纯度从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑；考虑杂质的生理作用；

药物合格不合格化学试剂不能代替药品！2023/2/1药物的杂质指药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。药物的纯度与要求例：乙酰水杨酸水杨酸2023/2/1二、杂质的来源在贮藏过程中引入合成过程中，原料不纯；有一部分原料没有反应完全；反应中间产物和副产物在精制时没有除净；在制成制剂的过程中，产生新的杂质；制剂生产过程中所用溶剂、试剂的残留；与生产器皿接触引入杂质；受外界条件的影响，发生水解、氧化、分解、聚合、异构化、发霉等变化。由生产过程中引入概述2023/2/1例：乙酰水杨酸水杨酸二羟乙基过氧化物（有毒）

麻醉乙醚例：例：差向四环素（毒性高、活性低）

四环素杂质的来源与种类2023/2/1按理化性质分类无机杂质、有机杂质、残留溶剂按毒性分类普通杂质（信号杂质）毒性杂质（有害杂质）按来源分类一般杂质、特殊杂质一般杂质是指在自然界中分布较广泛，在多种药物的生产和贮藏过程中容易引入的杂质。特殊杂质是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。杂质的来源与种类三、杂质的种类2023/2/1四、杂质的限量杂质限量

是指药物中所含杂质的最大允许量。通常用百分之几或百万分之几（ppm）来表示。杂质的量≤杂质限量合格不合格＜杂质的量概述2023/2/1杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法

标准对照法杂质对照品或纯品溶液供试品溶液在相同条件下处理平行操作比较结果颜色→比色浑浊→比浊色斑→比较色斑特点：不需知道杂质的准确含量；必须有对照品或是纯品。杂质的限量2023/2/1杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法

标准对照法例1：中国药典规定检查砷盐时，应取标准砷溶液2.0ml（每1ml相当于1ug的As）制备的标准砷斑，今依法检查溴化钠中的砷盐，规定含砷量不得超过0.0004%

，问应取供试品多少克？杂质的限量2023/2/1杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法

标准对照法例2：检查对乙酰氨基酚中的氯化物，取对乙酰氨基酚2.0g，加水100ml，加热溶解，冷却，滤过，取滤液25ml，依法检查氯化物，所产生的浑浊与标准氯化钠溶液5.0ml（每1ml相当于10ug的Cl-）制成的对照液比较，不得更浓，问氯化物的限量？杂质的限量2023/2/1杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法

灵敏度法供试品溶液特点：以该检测条件下反应的灵敏度来控制杂质限量不需对照品

试剂无正反应→合格

有正反应→不合格

杂质的限量2023/2/1杂质限量检查方法分为：标准对照法、灵敏度法、比较法

比较法供试品

测定特定的待检杂质的参数如：测定A、pH值等结果≤规定的限量特点：不需要对照品杂质的限量2023/2/1一般杂质的检查方法§3.2一般杂质的检查方法氯化物检查法硫酸盐检查法重金属检查法一般杂质的检查方法溶液颜色检查法铁盐检查法砷盐检查法易炭化物检查法溶液澄清度检查法干燥失重测定法残留溶剂测定法炽灼残渣检查法水分测定法2023/2/1（一）原理一、氯化物检查法（二）操作（标准对照法）供试品溶液标准NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml

暗处放置5min

暗处放置5min一般杂质的检查方法2023/2/1供试品溶液标准NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml

暗处放置5min

暗处放置5min（三）注意事项及讨论1.条件纳氏比色管应配对；氯化物检查法2023/2/1供试品溶液标准NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml

暗处放置5min

暗处放置5min（三）注意事项及讨论1.条件纳氏比色管应配对；酸性条件——稀硝酸；可以加速氯化银的生成；产生较好的乳浊；可避免产生碳酸银、氧化银、磷酸银沉淀。氯化物检查法2023/2/1供试品溶液标准NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml

暗处放置5min

暗处放置5min（三）注意事项及讨论1.条件纳氏比色管应配对；酸性条件——稀硝酸；稀释到40ml后加硝酸银试液；使生成白色浑浊而不是白色沉淀氯化物检查法2023/2/1供试品溶液标准NaCl溶液稀HNO310mlH2O稀HNO310mlH2O40ml40mlAgNO31mlAgNO31mlH2OH2O50ml50ml

暗处放置5min

暗处放置5min（三）注意事项及讨论1.条件纳氏比色管应配对；酸性条件——稀硝酸；稀释到40ml后加硝酸银试液；暗处放置；比浊方法：黑色背景，自上而下的观察；平行操作。

氯化物检查法2023/2/1反复过滤至澄清H2O（三）注意事项及讨论2.供试品溶液不澄清时的处理方法——过滤3.供试品溶液有色时的处理方法——内消色法/外消色法稀HNO3H2OAgNO31ml

暗处放置10min标准NaCl溶液AgNO31mlH2O无Cl-

暗处放置5min

暗处放置5min50ml50ml内消色法2倍量的供试品氯化物检查法2023/2/1（三）注意事项及讨论3.供试品溶液有色时的处理方法——内消色法/外消色法外消色法向供试品溶液中加入某种试剂，使供试品溶液的颜色褪去或与对照品溶液颜色相同后再依法检查。

4.供试品溶液显碱性时的处理方法先中和为中性后再检查；避免硝酸银在碱性条件下生成氢氧化银和氧化银。5.预先排除干扰物。氯化物检查法2023/2/1（一）原理二、硫酸盐检查法（二）操作（标准对照法）供试品溶液标准K2SO4溶液H2OH2O25%

BaCl25ml25%

BaCl25mlH2OH2O50ml50ml放置10min放置10min40ml40ml稀HCl2ml稀HCl2ml一般杂质的检查方法2023/2/1（三）注意事项及讨论1.条件纳氏比色管应配对；酸性条件——稀盐酸；比浊方法：黑色背景，自上而下的观察；平行操作。

2.供试品溶液不澄清时的处理方法——过滤3.供试品溶液有色时的处理方法——内消色法/外消色法硫酸盐检查法2023/2/1过硫酸铵

50mg过硫酸铵

50mg（一）原理三、铁盐检查法（二）操作（标准对照法）供试品溶液标准铁溶液H2OH2O30%

硫氰酸铵

3ml30%

硫氰酸铵

3mlH2OH2O50ml50ml25ml25ml稀HCl4ml稀HCl4ml35ml35ml一般杂质的检查方法2023/2/1（三）注意事项及讨论供试品溶液标准铁溶液H2OH2O25ml25ml过硫酸铵

50mg过硫酸铵

50mg稀HCl4ml稀HCl4ml35ml35ml30%

硫氰酸铵

3ml30%

硫氰酸铵

3mlH2OH2O50ml50ml纳氏比色管应配对；酸性条件——稀盐酸加过硫酸铵氧化剂：

加过量硫氰酸铵

比色方法：白色的背景上，自上而下的观察。稀盐酸可以防止铁盐水解氧化供试品中Fe2+生成Fe3+

；防止光线使硫氰酸铁还原或分解退色。增加生成的配合物的稳定性，提高灵敏度；消除Cl-、PO43-、SO42-等离子与铁盐形成配合物的干扰。铁盐检查法2023/2/1四、重金属检查法重金属指在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。Pb第一法第四法重金属含量低的药物(2～5μg)第三法使用范围微孔滤膜法硫化钠法溶于碱性水溶液而难于溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物方法硫代乙酰胺法溶于水、稀酸、乙醇的药物炽灼后的硫代乙酰胺法含芳环、杂环以及难溶于水、乙醇的药物第二法一般杂质的检查方法2023/2/1第一法硫代乙酰胺法黄色至棕黑色混悬液（一）原理（二）操作（标准对照法）供试品溶液标准铅溶液H2O醋酸盐buffer（pH3.5）2mlH2O醋酸盐buffer（pH3.5）2ml25ml25ml硫代乙酰胺

2ml摇匀放置2min硫代乙酰胺

2ml摇匀放置2min重金属检查法2023/2/1（三）注意事项及讨论1.条件用Pb(NO3)2先配制贮备液，并加入硝酸防止铅盐的水解，临用前稀释；醋酸盐缓冲液

(pH3.5)

硫代乙酰胺试液；平行操作；

比色方法：白色背景，自上而下的观察；重金属检查法——硫代乙酰胺法2023/2/12.供试品溶液有色时的处理方法——外消色法/内消色法外消色法用稀焦糖溶液调节对照管颜色与样品管颜色一致。用对测定不干扰的指示剂调节对照管颜色与样品管颜色一致。内消色法重金属检查法——硫代乙酰胺法2023/2/13.干扰物的排除方法高铁盐（Fe3+）供试品中微量高价Fe3+存在

供试品为铁盐（大量的Fe3+）药物本身能生成不溶性硫化物→加入掩蔽剂

重金属检查法——硫代乙酰胺法2023/2/1第二法炽灼后的硫代乙酰胺法

（一）原理

供试品在500-600℃炽灼破坏后，加HNO3加热处理，再按第一法进行检查。

（二）操作重金属检查法2023/2/1（三）注意事项及讨论HNO3处理后必须蒸干除尽氧化氮；炽灼温度：500—600℃；含钠盐或氟的有机药物应用铂坩埚、石英坩埚或硬质玻璃蒸发皿。重金属检查法——炽灼后硫代乙酰胺法2023/2/1第三法硫化钠法

（一）原理

（二）操作（标准对照法，比色）（三）注意事项及讨论碱性条件：NaOH显色剂：Na2S

重金属检查法黄色至棕黑色混悬液2023/2/1第四法微孔滤膜法

（一）原理：同第一法

（二）操作CABFE滤器下部滤器上盖连接头辅助滤板D滤膜(直径10mm,孔径3.0µm)垫圈(外径10mm,内径6mm)重金属检查法微孔滤膜过滤法检查重金属装置2023/2/1五、砷盐检查法古蔡氏法白田道夫法二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）奇列氏法（次磷酸法）一般杂质的检查方法2023/2/1（一）原理砷(Ⅲ)的反应：

As3++3Zn+3H+→AsH3↑+3Zn2+

AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O

AsH3+3HgBr2→3HBr+As(HgBr)3（黄色）

AsH3+2As(HgBr)3→3AsH(HgBr)2

（棕色）AsH3+As(HgBr)3→3HBr+As2Hg3（黑色）砷盐检查法——古蔡氏法2023/2/1（二）操作8cm有孔玻璃旋塞导气管AsH3发生瓶溴化汞试纸醋酸铅棉花(60mg)HClZn粒碘化钾试液酸性氯化亚锡试液生成砷斑吸收硫化氢气体古蔡氏法检砷装置砷盐检查法——古蔡氏法标准砷斑供试品砷斑2023/2/1（三）注意事项及讨论各试剂的作用HCl：提供酸性环境，反应物；加KI和酸性SnCl2的作用：做还原剂，还原砷(Ⅴ)为砷(Ⅲ)砷盐检查法——古蔡氏法

As3++3Zn+3H+→AsH3↑+3Zn2+

AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O2023/2/1（三）注意事项及讨论各试剂的作用加KI和酸性SnCl2的作用：KI被氧化生成的I2又可以被SnCl2还原为I－

I－与反应中产生的Zn2＋能形成稳定的配位离子，有利于生成AsH3的反应不断进行。砷盐检查法——古蔡氏法

As3++3Zn+3H+→AsH3↑+3Zn2+

AsO33-+3Zn+9H+→AsH3↑+3Zn2++3H2O2023/2/1（三）注意事项及讨论各试剂的作用加KI和酸性SnCl2的作用：KI和酸性SnCl2可抑制SbH3生成

锑斑，影响结果观察SnCl2可以与Zn生成锌锡齐，起去极化的作用，使氢气均匀连续发生砷盐检查法——古蔡氏法2023/2/1（三）注意事项及讨论各试剂的作用醋酸铅棉花的作用

：吸收H2S，排除硫化物干扰

砷盐检查法——古蔡氏法2023/2/1（三）注意事项及讨论2.反应的最佳条件

加Zn粒：能通过1号筛（850-1000μm）；约2g盐酸酸性下反应温度25～40℃，45min标准砷溶液2ml（1μg/ml）砷盐检查法——古蔡氏法3.供试品砷斑和标准砷斑应平行操作，并立即观察；供试品砷斑与标准砷斑比较，颜色不得更深。2023/2/1（三）注意事项及讨论4.干扰物的排除

如供试品为硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐等应在检查前加入HNO3处理，氧化成硫酸盐，再做检查；供试品若为铁盐，需先加酸性SnCl2试液，将Fe3+还原为Fe2+

砷盐检查法——古蔡氏法2023/2/1（三）注意事项及讨论4.干扰物的排除

供试品为共价键结合的砷化物，要先进行有机破坏，否则检出结果偏低或难以检出。排除方法：酸破坏法/碱破坏法酸破坏法：+稀硫酸与溴化钾，如：葡萄糖中砷盐的检查碱破坏法：+氢氧化钙，500-600℃灼烧，如：中药麻仁丸中砷盐的检查

+无水碳酸钠碱融，如：苯甲酸钠中砷盐的检查砷盐检查法——古蔡氏法2023/2/1（四）古蔡氏法的特点优点：灵敏度高。缺点：不适于含锑的药物。砷盐检查法——古蔡氏法2023/2/1五、砷盐检查法——白田道夫法一般杂质的检查方法（一）原理棕褐色的胶态砷（二）特点优点：不受锑干扰。缺点：灵敏度低。2023/2/1五、砷盐检查法——二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法）

一般杂质的检查方法（一）原理红色的胶态银红色的胶态银2023/2/1（二）操作Ag-DDC法检砷装置砷盐检查法——Ag-DDC法AsH3发生瓶醋酸铅棉花(60mg)HClZn粒碘化钾试液酸性氯化亚锡试液吸收硫化氢气体Ag-DDC2023/2/1（三）Ag-DDC法的特点优点：灵敏度高；可限量也可定量；锑干扰小缺点：吡啶有恶臭，中国药典改为Ag-DDC的三乙胺-氯仿（1.8：98.2）溶液代替，灵敏度略低。

砷盐检查法——Ag-DDC法2023/2/1五、砷盐检查法——奇列氏法（次磷酸法）一般杂质的检查方法（一）原理（二）特点优点：不受S2-、SO32-、Sb的干扰，适用于硫化物、亚硫酸盐以及含锑药物砷盐的检查缺点：灵敏度较古蔡氏法低。2023/2/1六、溶液颜色检查法一般杂质的检查方法是控制药物中有色杂质量的方法中国药典收载有三种方法：第一法目视比色法，即与标准比色液比较的方法。第二法分光光度法。第三法色差计法2023/2/1七、易炭化物检查法一般杂质的检查方法易炭化物指药物中遇硫酸易炭化或易氧化而呈色的微量有机杂质。方法：H2SO4炭化后与对照液比较。对照液：（1）“溶液颜色检查”项下的标准比色液；（2）由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液按规定方法配成的对照液；（3）高锰酸钾液。2023/2/1八、溶液澄清度检查法一般杂质的检查方法澄清度检查是检查药品溶液的混浊程度。它可以反映药物溶液中微量不溶性杂质的存在。方法：与浊度标准液比浊。浊度标准液制备原理：甲醛腙（白色混浊）肼2023/2/1溶液澄清度检查法澄清指供试品溶液的澄清度相同于所用溶剂或未超过0.5号浊度标准液。2023/2/1九、炽灼残渣检查法一般杂质的检查方法炽灼残渣指有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼，所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。0.1%～0.2%1～2mg2023/2/1十、干燥失重测定法一般杂质的检查方法干燥失重药品在规定的条件下，经干燥后所减失的量。用于检查药物中的水分及其他挥发性物质。

恒重供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下。2023/2/1干燥失重测定法分类适用范围备注常温常压干燥受热较稳定的药物105℃，一般2-4h，干燥至恒重干燥剂干燥适用于受热易分解或挥发的供试品常用干燥剂：硅胶、五氧化二磷、浓硫酸等减压干燥法适用于熔点低，受热不稳定及较难赶除水分的供试品热分析法研究其受热过程所发生的晶型转变、熔融、升华、吸附等物理变化和脱水、热分解、氧化还原等化学变化，对物质进行物理常数（如熔点和沸点）的确定、鉴别和纯度检查的方法

包括：热重分析法、差热分析法等

干燥失重测定方法：2023/2/1十一、水分测定法一般杂质的检查方法2005版中国药典二部收载两种方法：费休氏法、甲苯法

（一）费休氏法A——供试品消耗的费休试液的体积B——空白消耗的费休试液的体积F——每1ml费休试剂相当于水的重量(mg)W——供试品的重量2023/2/1水分测定法——费休氏法费休试液的配制称取碘(置硫酸干燥器内48小时以上)110g，置干燥的具塞烧瓶中，加无水吡啶160ml,注意冷却，振摇至碘全部溶解后，加无水甲醇300ml，称定重量，将烧瓶置冰浴中冷却，通入干燥的二氧化硫至重量增加72g，再加无水甲醇使成1000ml，密塞，摇匀，在暗处放置24小时。本液应遮光，密封，置阴凉干燥处保存。临用前应标定浓度2023/2/1（二）甲苯法适用于含挥发性成分的药品A——500ml的短颈圆底烧瓶；B——水分测定管；C——直形冷凝管，外管长40cm。甲苯法装置水分测定法2023/2/1十二、残留溶剂测定法一般杂质的检查方法残留溶剂指在合成原料药、辅料或制剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完全除去的有机溶剂。2023/2/1§3.3特殊杂质的检查方法特殊杂质是指在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质。原理：利用药品和杂质在理化性质及生理作用的差异

方法：色谱分析法光谱分析法化学分析法物理分析法生物学分析法特殊杂质的检查方法2023/2/1一、色谱分析法包括：薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法

（一）薄层色谱法（TLC法）1、杂质对照法

适用于已知杂质并能够得到杂质对照品的情况。例：枸橼酸乙胺嗪中N-甲基哌嗪的检查N-甲基哌嗪供试品(50mg/ml)10µlN-甲基哌嗪对照品(50mg/ml)10µl特殊杂质的检查方法2023/2/12、供试品溶液自身稀释对照法适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况例：氢化可的松中“其他甾体”的检查供试品液：3mg/ml对照液：60g/ml（供试液稀释50倍）判断：供试品溶液的杂质斑点数≯3个；

″

″颜色≯对照液主斑点颜色。薄层色谱法2023/2/13、杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用4、对照药物法当无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色和主成分颜色有差异，难以判断限量时，可以用含待检测杂质符合限度要求的与供试品相同的药物作为对照品。薄层色谱法2023/2/1内标法加校正因子法外标法加校正因子的主成分自身对照法不加校正因子的主成分自身对照法峰面积归一化法（二）高效液相色谱法（HPLC法）HPLC法检查杂质的方法有五种：特殊杂质的检查方法2023/2/11、内标法加校正因子法适用于有杂质对照品时能够测定杂质的校正因子杂质的含量测定。高效液相色谱法对照品+内标→进样，求校正因子供试品+内标→进样，求Cx内标物浓度杂质对照品浓度供试品中杂质的峰面积内标物的峰面积杂质对照品的峰面积供试品中杂质浓度2023/2/12、外标测定法适用于有对照品的杂质，而且进样量能够精确控制的情况。3、加校正因子的主成分自身对照测定法高效液相色谱法例：红霉素中红霉素B、C的检查：对照品液(0.2mg/ml)进样20μl，调灵敏度，使主峰达满量程的20%；

供试品液(4mg/ml)进样20μl，红霉素B、C校正后的A，均不得大于对照品液的主峰面积；其它单个杂质峰的峰面积之和不得大于对照品液主峰面积（5.0%）。对照品液：供试品的稀释液

2023/2/14、不加校正因子的主成分自身对照法该方法适用于没有杂质对照品的情况。高效液相色谱法对照品液：供试品的稀释液

例:甲硝唑中2-甲基-5-硝基咪唑的检查：对照品液(0.01mg/ml)进样20μl，调灵敏度，使主峰达10%～30%

样品液(0.14mg/ml)进样20μl，杂质峰的峰面积之和不得大于对照品液主峰面积的1.0%。2023/2/15、面积归一化法适用于粗略测量供试品中杂质的含量。高效液相色谱法例：利巴韦林中有关杂质的检查：对照品液(5μg/ml)进样10μl,调灵敏度，使主峰达满量程的20%～25%

样品液(0.4mg/ml)进样10μl,各杂质峰的面积之和不得超过总峰面积