蟾蜍泌尿系统与生殖系统的解剖实习

基础生物学技术试验蟾蜍“双毁髓”手术技术、剑突透明软骨取材、染色、光镜下显微观察；蟾蜍泌尿系统与生殖系统的解剖实习实验目的1、掌握蟾蜍的握拿方法，掌握动物探针的使用。2、掌握蟾蜍“双毁髓”手术技术。3、两栖类动物（小动物）解剖技术。尤其掌握手术剪的使用。4、蟾蜍剑突、透明软骨的取材、苏木精染色、光镜下观察。5、蟾蜍体腔切开，观察泌尿系统与生殖系统，相互之间的比邻关系。6、取出“泌尿系统与生殖系统”，于解剖盘空白处，拍照后，插入实验报告。二、实验原理1、蟾蜍“双毁髓”技术的生理意义：双毁髓技术是通过破坏蟾蜍的脑髓和脊髓从而达到麻醉蟾蜍的目的的一种生物技术方法。由于蟾蜍属低等动物，因而在其在神经系统被破坏的条件下循环系统依然正常工作。这种操作可以最大限度的减轻实验给蟾蜍带来的疼痛感同时保证蟾蜍的生命体征完整，使机体更接近正常条件，且排除了神经系统对实验结果的影响，减少了蟾蜍的反射动作与疼痛感，降低了实验操作的难度的同时也将对蟾蜍的影响减到了最小，并使实验者在解剖过程中可以更清晰地观察到活体蟾蜍体内器官的形态。如果对其进行单纯的杀死，会导致蟾蜍体内器官的衰竭、肌肉的僵硬，给实验观察带来误差，不便于操作与观察。注意，是否进行神经系统的破坏需根据具体实验决定，如需神经系统参与的实验则不能进行双毁髓，同时双毁髓只适用于低等动物，高等动物需要药物麻醉。2、其他类型动物麻醉方法：全身麻醉（1）吸入法用一块圆玻璃板和一个钟罩或一个密闭的玻璃箱作为挥发性麻醉剂的容器，多选用乙醚作麻药。麻醉时用几个棉球，将乙醚倒可其中，迅速转入钟罩或箱内，让其挥发，然后把待麻醉动物投入，约隔4-6分钟即可麻醉，麻醉后应立即取出，并准备一个蘸有乙醚的棉球小烧杯，在动物麻醚变浅时给套在鼻上使其补吸麻药。本法最适于大、小鼠的短期操作性实验的麻醉，当然也可用于较大的动物只是要求有麻醉口罩或较大的玻璃箱罢了。由于乙醚燃点很低，遇火极易燃烧，所以在使用时，一定要远离炎源。（2）腹腔和静脉给药麻醉法非挥发性和中药麻醉剂均可用作腹腔和静脉注射麻醉，操作简便，是实验室最常采用的方法之一。腹腔给药麻醉多用于大小鼠和豚鼠，较大的动物如兔、狗等则多用静脉给药进行麻醉。由于各麻醉剂的作用长短以及毒性的差别。所以在腹腔和静脉麻醉时，一定控制药物的浓度和注射量局部麻醉（1）猫的局部麻醉一般应用0.5-1.0%盐酸普鲁卡因注射。粘膜表面麻醉宜用2%盐酸可卡因。（2）兔在眼球手术时，可于结膜囊滴入0.02%盐酸可卡因溶液，数秒钟即可出现麻醉。（3）狗的局部麻醉用0.5-1%盐酸普鲁卡因注射。眼鼻、咽喉表面麻醉可用2%盐酸可卡因。3、透明软骨透明软骨的陷窝细胞，是同源细胞（有丝分裂）。4、动物肾脏类型：前肾：所有脊椎动物在胚胎期都发生前肾，但只有圆口动物以前肾作为永久性肾脏，鱼类和两栖类在幼体时期有分泌和排泄作用。中肾：鱼类和两栖类的永久性肾脏，在爬行类、鸟类和哺乳类中，只有胚胎期和幼体时期有作用，到成长期就退化了。中肾发送的地位在前肾后方。后肾：爬行类、鸟类和哺乳类的永久性肾脏，发生在中肾后方。后肾形状不一，随动物的种类而不同6、三、动物与器材实验动物：大蟾蜍实验器材：解剖盘、大头针、骨剪、直头解剖剪、眼科剪、镊子、眼科镊、动物探针。实验试剂：甲基蓝染料四、方法与步骤1、握拿蟾蜍方法：将蟾蜍后腿夹于小指与无名指之间，前腿夹于中指与无名指之间，食指按住蟾蜍头部，拇指将蟾蜍坐骨向上推。2、用金属探针在两耳腺中点沿头背中线向后移动，直到触到一凹陷，即枕骨大孔。食指按压蟾蜍头部同时探针由凹陷处垂直插入1mm，再将探针由枕骨大孔向前平行插入颅腔并搅动，摧毁脑组织。3、将解剖针从颅腔抽出，沿枕骨大孔刺入脊柱，破坏脊神经使得蟾蜍麻醉。4、将蟾蜍腹部朝上置于解剖盘上，四肢伸展后大头针固定，用镊子提起腹部中央皮肤后解剖剪剪出一小口，将解剖剪伸进小口，以前三分之一刃口向前剪开至下颚处，向后剪至泄殖孔前方。5、用眼科剪拨起剑突前段，剪下前段的剑突软骨置于玻片上，用甲基蓝染色后放在显微镜下观察软骨细胞。6、用镊子提起腹部肌肉，解剖剪剪开，向左右分开，可以观察到仍在跳动的心脏及心脏上方的肝脏。7、将各个器官向一侧翻开，找到黄色的脂肪体。用眼科剪，镊子将泌尿生殖系统从蛙体分离出来。8、观察泌尿生殖系统，找到各个部位所在及形态。9、处理掉蟾蜍，清洁器具，整理实验台，清洁手部。五、实验结果1、剑突软骨细胞图2、泌尿生殖系统肾脏米勒氏管吴氏管毕氏器精巢肾脏米勒氏管吴氏管毕氏器精巢毕氏器米勒氏管精巢脂肪体脂肪体毕氏器米勒氏管精巢脂肪体脂肪体六、实验结论1、剑突软骨细胞染色后可见圆形图案，说明甲基蓝将细胞膜进行了染色，观察到的是细胞边界。2、部分较为成功的切片可观察到两核细胞，说明正在进行有丝分裂。3、蟾蜍为中肾，其泌尿生殖系统由脂肪体、毕氏器、肾脏、精巢、精尿管、米勒氏管、输尿管、膀胱和泄殖腔组成。由于蟾蜍输尿管兼输精故称精尿管。4、精巢：有1对，位于肾脏腹面内侧，接近白色，长卵圆形。输精小管和输精管：提起精巢，可见精巢内侧发出输精小管，进入肾脏前端。米氏管：为退化的输卵管，体腔中细长而盘曲的白色管。5、雄性生殖腺是位于肾脏内侧的一对长圆形或卵圆形精巢，成熟精子由输精小管通入肾脏前部，再通过输尿管，开口于泄殖腔。雌性生殖腺是一对多叶的囊状卵巢。成熟卵子落入体腔，进入输卵管前端的喇叭口，再经输卵管至泄殖腔，由泄殖孔排出。输卵管末端膨大部分称子宫，可以分泌胶质卵膜。雌雄生殖腺前方均有黄色指状脂肪体，含有大量脂肪供生殖细胞生长，大小与季节有关。七、问题解答1、如何确定探针刺入脊椎？食指与拇指捏住蟾蜍脊椎后刺入，若手指感受到探针则未能进入2、毕氏器功能？其中含有未分化的大细胞，类似不成熟的卵。约在2年后，毕氏器发展成为具有产卵功能的卵巢，而原来存在的退化输卵管，这时在雌性激素的影响下，发展成为子宫。这种雄性转变为雌性的现象，在生物学上称为性逆转。雄性无尾两栖类，在胚胎期，毕氏器是普遍存在的。胚胎期的精巢分为前、后两部：前部即称毕氏器，一般在性成熟之前即行消失；后部则形成精巢，产生精子。雄性蟾蜍的毕氏器则一直保留到成体。3、生物进化论与心理学演变？达尔文：比较心理学、情绪心理学、个体差异、发展心理学、机能主义心理学、进化心理学。达尔文在研究人类心理时有生物学化倾向，而在研究动物心理时又有拟人论倾向，这两种倾向都是由于忽视了动物和人类的本质区别。斯金纳：行为主义理论，操作性条件反射理论波普尔：伪证主义心理学波普尔认为科学不存在一个确定无疑的终极状态,相反科学的未来是一个开放的、不稳定的状态,观察和实验只是对理论证伪的手段。它们本身并不能直接导引出科学理论。“在科学发展中,观察和实验只起了批判和论证的作用,而且它们是和其他非观察的论证一同起作用的。”八、参考文献波普尔证伪主义的心理学意义自然辩证法研究2004年5月达尔文的心理学遗产社会心理科学2011年第四期基础动物学