临床血液学检验技术-实验课十

实验九

红细胞渗透脆性试验

Ham试验(酸溶血试验）

蔗糖溶血试验

201510261、按渗透脆性试验表格量加好试剂，共24管，充分混匀2、每组采集1份静脉血3ml，加入放有肝素的试管中，立即颠倒混匀3、红细胞渗透脆性试验24支试管中，每管加1滴全血，立即轻轻颠倒混匀，记录时间4、酸溶血和蔗糖溶血试验准备，对照用标本为每组自采静脉血，试验管用酸溶血试验用专用患者红细胞实验流程安排等一、红细胞渗透脆性试验

（erythrocyteosmoticfragilitytest）

1、掌握红细胞渗透脆性试验原理及临床意义。2、掌握红细胞渗透脆性试验方法、结果观察及结果的报告。目的要求原理

S/V↑，抵抗力↑，渗透脆性↓；反之，渗透脆性增高。

试管号

12345678910111210.0g/LNacl（ml）0.60.7

0.80.91.01.11.21.31.4

1.51.61.7蒸馏水（ml）

1.9

1.8

1.7

1.6

1.5

1.4

1.3

1.2

1.1

1.0

0.9

0.8Nacl浓度（g/L）

2.4

2.8

3.2

3.6

4.0

4.4

4.8

5.2

5.6

6.0

6.4

6.8每人抽静脉血3ml。方法与步骤同时按上述方法做正常对照。用一次性的滴管垂直滴加于上述试管各1滴（约0.05ml），轻轻颠倒混匀。室温静置2h，低速离心（1000rpm×5min）观察结果(从高浓度开始):

开始溶血:

完全溶血:结果判断正常参考值开始溶血：3.8g/L～4.6g/L

完全溶血：2.8g/L～3.2g/L

患者与正常对照,溶血管的NaCl浓度相差0.4g/L具有诊断价值。注意事项1、试剂加样要准确，最好用前新配。

2、可用肝素抗凝新鲜静脉血。

3、黄疸较深的标本影响结果。4、每次试验应有正常对照。

5、所用器材应洁净、干燥。

6、避免体外溶血。注意事项临床意义1、红细胞渗透脆性增加：

遗传性球形红细胞增多症、椭圆形红细胞增多症；自身免疫性溶血伴有球形红细胞增多；口形红细胞增多症（水肿型）。临床意义2、红细胞渗透脆性降低：

地中海贫血、缺铁性贫血、铁粒幼红细胞性贫血、血红蛋白病等；严重肝病、阻塞性黄疸、脾切除术后。BACK二、酸溶血试验（hamtest）

1、掌握酸溶血试验的原理及临床意义2、掌握掌握酸溶血试验的方法、结果观察及结果报告。目的要求原理在酸化（PH6.4-6.5）的正常或自身血清中（含有补体）中，经37℃孵育，红细胞易发生溶血。试剂0.2mol/LHCL

0.154mol/LNaCl溶液

操作步骤

反应物试验管对照管

新鲜混合血清（ml）1.01.0

患者50%红细胞（ml）0.05--

正常人50%红细胞（ml）--0.050.2mol/L盐酸（ml）0.050.05

混匀，置37℃水浴箱内1h后，1000rpm×5min离心观察上清液。*正规方法需病人和正常人的血清及红细胞，共做4管操作步骤结果判断试验管溶血、对照管不溶血为阳性；两管均不溶血为阴性。

正常参考值：阴性。

临床意义：对诊断PNH有特异性意义。球形红细胞增多可出现假阳性。注意事项（1）1、不宜用抗凝血，因抗凝剂中K+，Na+可影响PH。

2、血清酸化后，必须塞紧试管，否则CO2逸出，影响血清PH。

3、为保证补体充足，最好采用多人混合新鲜血清。

4、如患者经多次输血，血中异常红细胞相对减少，可造成本试验的假阴性或弱阳性。注意事项（2）三、蔗糖溶血试验

原理

利用蔗糖能通过C3前活化素系统激活补体经典途径而使PNH患者的红细胞发生溶血。方法与步骤

ml

g/L的蔗糖溶液

ml枸橼酸钠抗凝血0.54.592.437℃30分钟混匀1000rpm离心5min观察

正常参考值：阴性。

临床意义：

PNH筛选试验，特异性比酸溶血试验差。阳性也可见于AA、MA、AIHA等。

注意事项1、所用器材均应清洁干燥，以免溶血。

2、也可用葡萄糖乳糖麦芽糖等替代蔗糖，均能获得满意的结果。

3、每次实验需同时做对照。

红细胞渗透脆性试验：开始溶血：x.xg/L

完全溶血：x

.xg/L

蔗糖溶血试验：