公开课基因工程郝世强

基因工程考前冲刺1.不同生物间基因移植成功，说明生物共有一套

，从进化的角度看，这些生物具有

。2. 从化学本质来看，运载体应该是

。3.一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定切点切割，这个特点说明了：

遗传密码共同的原始祖先小形环状DNA酶具有专一性5.直接分离基因——“鸟枪法”最大的缺点是工作量大，

。6.人工合成基因法①逆转录法：以信使RNA为模板，在

的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。

②直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。带有一定的盲目性逆转录酶7.基因运载体必须具备的条件

8. 基因工程育种与传统育种技术相比，具有的优点是9.在将质粒导入细菌时，一般要用

处理细菌，以增大细菌细胞壁的通透性。10.培育转基因动物，受体细胞一般选用

。

a.能够在宿主细胞内复制并稳定的保存b.据多个限制酶切点，以便与外源基因连接c.具有标记基因，便于进行筛选育种周期短，目的性强，能克服远缘杂交不亲和障碍等。氯化钙受精卵

“基因剪刀”

“基因针线”

“基因的运载体”基因工程最基本的工具目的基因基因操作的工具1.基因的“剪刀”──限制性内切酶（限制酶）一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA分子切断。专一性限制性内切酶限制酶２、基因的针线──DNA连接酶▲作用部位：磷酸二酯键▲作用：将互补配对的两个黏性末端连接起来▲作用对象：DNA片段类别限制酶DNA连接酶DNA聚合酶解旋酶作用底物DNA分子DNA片段脱氧核苷酸DNA分子作用部位磷酸二酯键磷酸二酯键磷酸二酯键氢键作用结果形成黏性末端或平末端形成重组DNA分子形成新的DNA分子分解成两条单链DNA分子

3、基因的运输工具——载体常用运载体受体细胞种类来源质粒细菌细菌、动植物细胞等病毒细菌病毒（噬菌体）细菌等植物病毒植物细胞动物病毒动物细胞▲作为载体必须具备的条件：1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。3）具有某些标记基因，便于进行筛选。提取目的基因目的基因与运载体结合目的基因导入受体细胞目的基因的检测和表达基因工程基本操作步骤●检测目的基因是否表达：分子水平：受体细胞是否产生特定的蛋白质个体水平：受体细胞是否表现出特定的性状

5、目的基因的表达目的基因的检测类型检测内容方法分子检测导入检测目的基因是否进入受体细胞DNA分子杂交(DNA和DNA之间)转录检测目的基因是否转录出mRNA分子杂交(DNA和mRNA之间)翻译检测目的基因是否翻译成蛋白质抗原—抗体杂交个体水平检测包括做抗虫、抗病的接种实验，如饲喂法、感染法等（

第一步水解产物（单位bp）第二步水解产物（单位bp）A酶切割2100将第一步水解分离后，分别用B酶切割1900200140080060010001000500500B酶切割2500将第一步水解产物分离后，分别用A酶切割1900600130080050012001000200经A酶和B酶同时切割19001000800600500200

基因工程（1）2.（6） 重组质粒、质粒核