免疫分析技术生化分析优秀课件

免疫分析技术生化分析第一页，共四十一页，2022年，8月28日

脊髓灰质炎Polio

狂犬病Rabies

风疹Rubella肝炎HepatitisA

肝炎HepatitisB

流感Influenza白喉diphtheria

天花Smallpoxvirus轮状病毒RotavirusPertussis百日咳第二页，共四十一页，2022年，8月28日Comparisonofmaximumandcurrentmorbidityforvaccine-preventablediseases

DiseaseMaximumcasesYear1992Percentagechange白喉Diphtheria麻疹Measles腮腺炎Mumps百日咳pertussis脊髓灰质炎

Polio(paralytic)风疹RubellaCRS破伤风Tetanus乙型流感HeamophilusinfluenzaetypeB乙型肝炎HepatitisB206,939694,134152,209265,26921,26957,68620,0001,56020,00026,6111921194119681934195219691964,6519231984198542,2372,5724,083416011451,41216,12699.9999.7598.3198.4699.9899.7299.9597.1292.9439.40第三页，共四十一页，2022年，8月28日疫苗的原理疫苗是将病原微生物及其代谢产物，经过人工减毒、灭活或利用基因工程等方法制成的用于预防传染病的自动免疫制剂。疫苗保留了病原菌刺激动物体免疫系统的特性。当动物体接触到这种不具伤害力的病原菌后，免疫系统便会产生一定的保护物质，如免疫激素、活性生理物质、特殊抗体等；当动物再次接触到这种病原菌时，动物体的免疫系统便会依循其原有的记忆，制造更多的保护物质来阻止病原菌的伤害。

免疫分析法是利用抗原抗体特异性结合反应检测各种物质（药物、激素、蛋白质、微生物等）的分析方法。第四页，共四十一页，2022年，8月28日

第一节抗原第五页，共四十一页，2022年，8月28日抗原(Antigen，Ag)：能够刺激机体产生免疫应答，并且能与免疫应答产物(抗体或免疫效应细胞)特异性结合的物质。第六页，共四十一页，2022年，8月28日抗原的两种基本特性：（1）免疫原性(immunogenecity)：指抗原分子能够诱导机体产生免疫应答(产生特异性抗体及免疫效应细胞)的性质。

（2）抗原性(antigenicity，又称免疫反应性)：指抗原分子与免疫应答产物(抗体或免疫效应细胞)发生特异性结合的性质。第七页，共四十一页，2022年，8月28日

完全抗原（completeantigen)：具有免疫原性和抗原性的物质，如：异种动物的血清、细菌、病毒等。半抗原（hapten，又称不完全抗原incompleteantigen）：无免疫原性，只有抗原性的物质，如：多为某些简单的小分子物质，如青霉素、磺胺。载体（carrier）：赋予半抗原以免疫原性的蛋白质。半抗原+蛋白质完全抗原第八页，共四十一页，2022年，8月28日半抗原

+载体抗体BT完全抗原BBBT在青霉素进入体内后，如果其降解产物和组织蛋白结合，就获得了免疫原性，并刺激免疫系统产生抗青霉素抗体。当青霉素再次注射人体内时，抗青霉素抗体立即与青霉素结合，产生病理性免疫反应，出现皮疹或过敏性休克，甚至危及生命。

第九页，共四十一页，2022年，8月28日第一部分抗原的类型一．根据抗原性质：完全抗原、半抗原第十页，共四十一页，2022年，8月28日

二．根据与人体的亲缘关系：

1.异种抗原（xenogenicAg）：来源于不同物种的抗原，如微生物、动物蛋白对于人是异种抗原；

2.同种异型抗原（allogenicAg）：来源于同一物种的不同个体的抗原，如来自于另一个个体的血型抗原，主要组织相容性抗原等；

3.自身抗原（autoantigen）：来自于自身的抗原，如眼晶状体蛋白等。第十一页，共四十一页，2022年，8月28日

三．根据抗原的合成方式：天然抗原：异己抗原自身抗原人工抗原：人工结合抗原人工合成抗原基因工程抗原第十二页，共四十一页，2022年，8月28日第二部分医学上重要的抗原一.病原微生物：

1.细菌性抗原：细胞壁：蛋白质、脂多糖等。鞭毛：蛋白质夹膜：多糖

2.病毒性抗原：衣壳：蛋白包膜：糖蛋白

3.其它：螺旋体、真菌等。第十三页，共四十一页，2022年，8月28日痢疾杆菌

霍乱弧菌伤寒杆菌链球菌大肠杆菌第十四页，共四十一页，2022年，8月28日狂犬病病毒腺病毒口蹄疫病毒病毒（viruses）流感病毒第十五页，共四十一页，2022年，8月28日真菌白色念珠菌

(1,000Xoil)疟原虫第十六页，共四十一页，2022年，8月28日二．细菌的外毒素与类毒素

外毒素：某些病原菌生长繁殖过程中分泌到菌体外的一种代谢产物，为次级代谢产物。其主要成分为可溶性蛋白质。

类毒素：经0.3%～0.4%甲醛处理过的失去毒性保留免疫原性的外毒素。仍然具有刺激人体产生抗毒素，以起到机体从此对某疾病具有自动免疫的作用。它们广泛地应用于预防某些传染病、注射到动物体内用于制备抗毒素。第十七页，共四十一页，2022年，8月28日

三．异种动物血清异种动物的血清蛋白对人具有免疫原性。如：马的血清进入人的体内，马血清中的许多蛋白质就成为人的抗原物质。

第十八页，共四十一页，2022年，8月28日四．血型抗原：

——已经发现并为国际输血协会承认的血型系统有30种

1.ABO血型系统：血型抗原（RBC）抗体（血清）

———————————————————A型A抗原抗B抗体

B型B抗原抗A抗体

AB型AB抗原无抗A、抗B抗体

O型无A、B抗原抗A、抗B抗体

———————————————————第十九页，共四十一页，2022年，8月28日2.Rh血型系统：

Rh是恒河猴（RhesusMacacus）外文名称的头两个字母。兰德斯坦纳等科学家在1940年做动物实验时，发现恒河猴和多数人体内的红细胞上存在Rh血型的抗原物质，故而命名的。凡是人体血液红细胞上有Rh抗原（又称D抗原）的，称为Rh阳性。

第二十页，共四十一页，2022年，8月28日

实际意义新生儿溶血症孕妇(Rh-)→胎儿(Rh+)

↓↓抗Rh抗体+新生儿RBC(Rh+)↓

溶血反应

第二十一页，共四十一页，2022年，8月28日

第二节抗体第二十二页，共四十一页，2022年，8月28日抗体（antibody,Ab）:

机体免疫细胞被抗原激活后，由分化成熟的B细胞分泌的一类能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）:

具有抗体活性或化学结构与抗体分子相似的球蛋白。

所有抗体都是Ig，但并非所有Ig都具抗体活性。第二十三页，共四十一页，2022年，8月28日血清疗法：一种利用被动免疫的疗法。将已被免疫的动物血清（抗血清）注射到相应疾病的患者身上以达到治疗的目的。这种血清称为治疗血清。恢复期病人的血清也可治疗其他病人。

第二十四页，共四十一页，2022年，8月28日第二十五页，共四十一页，2022年，8月28日第一部分免疫球蛋白的结构

第二十六页，共四十一页，2022年，8月28日N端C端可变区恒定区VHVLCH1CH2CH3CL铰链区V区：和抗原特异性结合的关键部位C区：决定抗体分子的异种抗原性第二十七页，共四十一页，2022年，8月28日第二部分单克隆抗体和基因工程抗体抗原决定簇：决定抗原性的特殊化学基团。大多存在于抗原物质的表面，有些存在于抗原物质的内部，须经酶或其他方式处理后才暴露出来。一个天然抗原物质可有多种和多个决定簇。如白喉类毒素有8个抗原决定簇，流感病毒有40多个抗原决定簇。

第二十八页，共四十一页，2022年，8月28日一.多克隆抗体病原微生物含有多种抗原决定簇的抗原物质，此这些抗体制剂也是多种抗体的混合物，故称多克隆抗体，即针对多种抗原决定簇的抗体。易出现非特异性交叉反应。第二十九页，共四十一页，2022年，8月28日二、单克隆抗体单克隆抗体是针对一个抗原决定簇的抗体，又是单一的B淋巴细胞克隆产生的。所有制备抗体的细胞都是同一个细胞的拷贝，因此其产生的抗体完全相同。第三十页，共四十一页，2022年，8月28日杂交细胞设计方案：

一个B淋巴细胞---只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞---能无限增殖第三十一页，共四十一页，2022年，8月28日单克隆抗体是大规模细胞培养的产物，而不是直接来自于动物血清。制备单克隆抗体的过程涉及到细胞培养、细胞融合等多种步骤。第三十二页，共四十一页，2022年，8月28日杂交瘤技术产生的3个技术关键1.B淋巴细胞与骨髓瘤细胞的特性：

B淋巴细胞（Blymphocytes）：

接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。

B淋巴细胞本身是一种终末分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡---短命细胞第三十三页，共四十一页，2022年，8月28日骨髓瘤细胞（myelomacells）：恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可永远分裂和存活---长命细胞。

经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细胞株---没有抗体分泌物。第三十四页，共四十一页，2022年，8月28日2.细胞融合技术：第三十五页，共四十一页，2022年，8月28日3.杂交瘤细胞的筛选：不能合成

DNA死亡不能合成

DNA死亡第三十六页，共四十一页，2022年，8月28日单克隆抗体的应用1．检验医学诊断试剂

作为检验医学实验室的诊断试剂，单克隆抗体有着特异性强、纯度高、均一性好等优点，并且很大程度上促进了商品化试剂盒的发展。目前，应用单克隆抗体制作的商品化试剂盒广泛应用于：病原微生物抗原、抗体的检测肿瘤抗原的检测免疫细胞及其亚群的的检测激素测定细胞因子的测定

第三十七页，共四十一页，2022年，8月28日1)乙肝表面抗原检测试纸条乙型肝炎是一种广泛的传染病。据报道,全世界感染该病的人在两亿以上,我国乙肝表面抗原阳性者占人口的10%左右。该测试