GMP质量体系人工牛黄检验操作规程

PAGE3PAGE1目的：为检验人工牛黄规定一个标准的程序，以便获得准确的实验数据。范围：适用于人工牛黄的检验。职责：检验室主任、检验员。规程：1 性状：本品为黄色疏松的粉末；味苦，微甘。2鉴别：2.1试剂与仪器2.1.1硫酸2.1.2硝酸2.1.3甲醇2.2.4胆酸猪去氧胆酸对照品2.1.5异辛烷-正丁醚-冰醋酸(8:5:5)2.2.610%磷钼酸的乙醇溶液2.1.7牛胆粉2.1.8甲苯-冰醋酸-水(7.5:10:0.3)2.1.9硅胶G薄层板2.1.10试管2.1.11容量瓶(10ml)2.1.12微量进样器2.1.13层析缸2.1.14电子天平（万分之一克）2.1.15恒温干燥箱2.2项目与步骤2.2.1取本品适量，分为二份，一份加硫酸显污绿色；另一份加硝酸显红色为符合规定。2.2.2精密称取本品0.1g，置10ml的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取胆酸、去氧胆酸对照品各0.01g，置10ml容量瓶中，各加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。照薄层色谙法（SOP-QC-304-00）试验，吸取上述供试品溶液4μl，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-正丁醚-冰醋酸(8:5:5)为展开剂展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸的乙醇溶液，于105℃烘约5分钟使显色。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点为符合规定。 2.2.3精密称取本品0.1g，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试 品溶液。另精密称取牛胆粉对照品0.02g，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度， 摇匀，作为对照品溶液。照薄层色谱法（SOP-QC-304-00）试验，吸取上述供试品溶液和 对照品溶液各8μl，分别点于同一硅胶板G薄层板上，以甲苯-冰醋酸-水(7.5：10：0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸的乙醇溶液，于105℃烘烤约15分钟。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上应显相同颜色的斑点为符合规定。3检查3.1试剂与仪器3.1.1甲醇3.1.2异辛烷-正丁醚-冰醋酸（8:5:5）3.1.3层析缸3.1.4水分测定仪3.1.5硅胶G薄层板3.1.6微量进样器3.2项目与步骤3.2.1水分：精密称取本品约0.1g，按水分测定法（SOP-QC-326-00）测定，本品的水分不得过5.0%为符合规定。3.2.2猪去氧胆酸的限量检查：对照品溶液的配制：精密称取猪去氧胆酸0.01g，置10ml的容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。供试品溶液的配制：精密称取供试品0.1g，用适量甲醇转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，密塞；振摇使样品溶解，放置，取上清液作为供试品溶液。检查法：照薄层色谱法（SOP-QC-304-00）试验，精密量取供试品溶液4μl及对照品溶液1.5μl,分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-正丁醚-冰醋酸（8:5:5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%磷钼酸的乙醇溶液，于105℃烘约5分钟。供试品色谱中，猪去氧胆酸斑点的颜色应深于或等于对照品色谱为符合规定。4含量测定4.1胆酸4.1.1试剂与仪器4.1.1.160%冰醋酸4.1.1.2新配制的糠醛水溶液（1-100）4.1.1.3硫酸溶液4.1.1.4带塞试管4.1.1.5容量瓶（50ml）4.1.1.6滤纸漏斗4.1.1.7漏斗架4.1.1.8刻度移液管4.1.1.9紫外分光光度计4.2检验步骤4.2.1标准溶液的制备：取在105℃干燥至恒重的胆酸对照品12.5mg，精密称定，置25ml量瓶中，加60%冰醋酸溶液使溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml含胆酸0.5mg）。标准曲线的绘制：精密量取标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8与1.0ml，分别置于带塞试管中，均用60%冰醋酸溶液稀释成1.0ml，加新配的糠醛水溶液(1→100)各1.0ml，在冰浴中放置5分钟，加硫酸溶液(取硫酸50ml与蒸馏水65ml混合制成)13ml，混匀，在70℃水浴中加热10分钟，迅速移至冰浴中，放置2分钟，以相应的试剂为空白，照分光光度法(SOP-QC-301-00)测定，在605nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。4.2.2测定法取本品约0.1g，精密称定，加60%冰醋酸溶液数ml，充分研磨，移入50ml量瓶中，残渣再加60%冰醋酸溶液，研磨后，全部移入量瓶中，再用60%冰醋酸溶液稀释至刻度，摇匀，弃去初滤液，精密吸取续滤液各1ml，分别置于甲、乙两个带塞试管中，于甲管中加新配制的糠醛水溶液1ml，乙管加水1ml作空白，按标准曲线的绘制项下的方法自“在冰浴中放置5分钟”起，依法制定吸收度。按标准曲线计算含量，即得。本品胆酸含量按干燥品计，不得少于13.0%为符合规定。4.3胆红素4.3.1试剂与仪器4.3.1.1氯仿、胆红素标准品4.3.1.2棕色容量瓶(100ml,50ml)4.3.1.3刻度移液管4.3.1.4紫外分光光度计4.4检验步骤4.4.1标准溶液的制备：取胆红素标准品约0.01g，精密称定，置100ml棕色量瓶中，加氯仿30ml使溶解，在60℃水浴中振摇片刻，使充分溶解，取出，用水冷却后，放至室温，加氯仿稀释至刻度，作为标准储备液(0.1mg/ml)；精密吸取标准储备液10.0ml，置50ml棕色量瓶中，加氯仿稀释至刻度，即为标准溶液(约20μg/ml)。4.4.2标准曲线的绘制：精密吸取胆红素标准溶液4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml，分别置于25ml棕色量瓶中，用氯仿稀释至刻度，即得每ml含3.2、4.0、4.8、5.6、6.4μg胆红素的标准液，照分光光度法(SOP-QC-301-00)测定，在453nm处测定吸收度。4.4.3测定法取样品0.08g，精密称定，加氯仿30ml转移至100ml棕色量瓶中，置60℃水