GMP质量体系丙酸倍氯米松检验操作规程

PAGE4PAGE1目的：为检验丙酸倍氯米松规定一个标准的程序，以便获得准确的实验数据。范围：适用于丙酸倍氯米松的检验。职责：检验室主任、检验员。规程：1．性状:本品为白色或类白色粉末；无臭。本品在丙酮或氯仿中易溶，在甲醇中溶解，在乙醇中略溶，在水中几乎不溶。1.1比旋度：取本品0.25g，精密称定置25ml量瓶，加二氧六环溶解并定量稀释至刻度，摇匀，按(SOP-QC-310-00)测定，比旋度为+88°至+94°为符合规定。式中：a：旋光仪读数；W：样品称重量（mg）；，B：水分含量（%）。2.鉴别：2.1试剂与仪器2.1.10.4%氢氧化钠溶液2.1.2磷酸2.1.35%硝酸镧溶液润湿滤纸2.1.40.02mol/L碘溶液2.1.5氨试液 2.1.6乙醇2.1.7试管2.1.8容量瓶2.1.9分光光度计2.1.10红外光谱仪2.1.11电子天平(万分之一克)2.2项目与步骤2.2.1称取本品约25mg，按氧瓶燃烧法(SOP-QC-317-00)进行有机破坏，以水20ml与0.4%氢氧化钠溶液1ml为吸收液，燃烧完全后，溶液按氯化物的鉴别:⑴取供试溶液加硝酸使成酸性后，加硝酸银试液即生成白色凝乳状沉淀；分离沉淀加氨试液即溶解，再加硝酸，沉淀复生成为符合规定。⑵取供试溶液少量置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，即发生氯气，能使湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色为符合规定。2.2.2取本品约20mg置试管中，加磷酸3～4滴，混匀，试管上端覆以5%硝酸镧溶液润湿滤纸，小火缓缓加热至沸，取下滤纸条加0.02mol/L碘溶液1滴后，再加氨试液1滴，滤纸渐变为蓝紫色为符合规定。2.2.3取本品50mg，精密称定置100ml量瓶中，加乙醇溶解并定量稀释，摇匀，精密吸取2ml置50ml量瓶中加乙醇稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含20μg的溶液。照分光光度法(SOP-QC-301-00)测定，在239nm的波长处有最大吸收，吸收度为0.57～0.60；在239nm与263nm波长处的吸收度比值应为2.25～2.45为符合规定。2.2.4取本品，按红外分光光度法(SOP-QC-302-00)测定，本品的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致为符合规定。3．检查3.1试剂与仪器3.1.1氯仿-甲醇(9:1)3.1.2二氯乙烷-甲醇-水(95:5:0.2)3.1.3硅胶G薄层板3.1.4碱性四氮唑蓝试液3.1.5层析缸3.1.6微量进样器3.1.7称量瓶3.1.8恒温干燥箱3.1.9坩埚3.1.10茂福炉3.1.11电子天平(万分之一克)3.项目与步骤3.2.1其他甾体:取本品,精密称取约0.15g置50ml量瓶中，加氯仿-甲醇（9:1）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密吸取2ml，置100ml量瓶中，加氯仿-甲醇（9:1）稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。照薄层色谱法（SOP-QC-304-00）试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯乙烷-甲醇-水(95:5:0.2)为展开剂，展开后，晾干。在105℃干燥10分钟，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深为符合规定。3.2.2干燥失重:取本品置称量瓶中，精密称定，按干燥失重测定法(SOP-QC-325-00)，在105℃干燥至恒重，减失重量不得过0.5%为符合规定。3.2.3炽灼残渣:称取本品约1g，置已炽灼至恒重的坩埚中，精密称定，按炽灼残渣检查法(SOP-QC-327-00)，在700-800℃炽灼至恒重，不得过0.1%为符合规定。4.含量测定4.1试剂与仪器4.1.1C18硅胶色谱柱4.1.2丙酸倍氯米松对照品4.1.3甲睾酮对照品4.1.4甲醇4.1.5容量瓶(50ml,100ml)4.1.6单标移液管(5ml,10ml)4.1.7电子天平(万分之一克),称量瓶4.1.8注射器(10ml),过滤器,滤膜4.1.9高效液相色谱仪4.2检验步骤:按高效液相色谱法(SOP-QC-306-00)检测。4.2.1色谱条件和系统适用性试验：用C18硅胶色谱柱，流动相为甲醇-水（74:26）,流速为0.9ml/min，检测波长为240nm。量取内含丙酸倍氯米松对照品溶液与内标物溶液的混合对照溶液[*]20μl，注入液相色谱仪，丙酸倍氯米松峰和内标物质峰的分离度应大于4.0，理论板数按丙酸倍氯米松峰计算应不低于2500。4.2.2内标溶液的制备：取甲睾酮12mg，精密称定，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。4.2.3丙酸倍氯米松对照溶液与样品溶液的制备及测定丙酸倍氯米松对照溶液与含内标溶液的混合对照溶液的制备: 取丙酸倍氯米松对照品约12.5mg，精密称定置100ml量瓶中，加甲醇74ml使溶解用水稀释至刻度，摇匀。[*]精密量取丙酸倍氯米松对照品溶液10ml与内标溶液5ml置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品的混合溶液。样品溶液与内标溶液的混合液的制备及测定取样品约12.5mg精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇74ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀；精密吸取10ml与内标溶液5ml置50ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为样品的混合溶液。取20μl注入液相色谱仪，将对照品的混合溶液按同法测定，按下式计算本品中丙酸倍氯米松（C28H37ClO7）的折干含量，应在 97.0%-103.0%为符合规定。Cd：本品的折干含量；CW：本品的湿品含量；B%：本品的含水百分数；A1：样品溶液中丙酸倍氯米松的峰面积或峰高；AS：内标物溶液中甲睾酮的峰面积或峰高；W1：样品的称样量（g）；Ws：内标物的称样量（g）；f: 为校正因子；As、Ws:同上式意义；A2:丙酸倍氯米松对照溶液中丙酸倍氯米松的峰面积或峰高；W2: