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文档简介

2023/1/151自动生化分析检测方法的现状及进展

蚌医一附院检验科李兴武2023/1/152一、生化分析仪的现状二、生化分析仪的测定方法三、校准与质控四、测定项目间的顺序安排2023/1/153一、生化分析仪的现状自动化释义:自动化即由机械化的仪器设备取代人的手工操作过程。2023/1/154主要组成:计算机前处理反应模块监测计算模块机械手模块2023/1/1552023/1/156分类:连续流动式或管道式分立式——常用离心式干片式——急诊常用2023/1/157功能:随计算机与电子技术的发展:向通用化、全自动、微量化、组合式(模块)方向发展。即:测定技术与反应类型增多、测试速度快、通道多、软件功能强、自动化程度高、样品与试剂用量少、人工干预少。2023/1/158功能:采用生物技术与机电控制技术有机融合,集生物技术、机械设计、精密仪器、工业控制、电机技术、传感技术、通讯技术、计算机技术于一体自动化分析仪工作站2023/1/159工作站:采用模块化设计的思路,实现良好的可扩展性。结合条码技术,再通过实验室信息系统与医院信息系统相连,可达到整个数据共享,乃至远程共享(如独立实验室)。2023/1/1510全实验室自动化(TotalLaboratoryAutomation,TLA)是指将临床实验室相互有关或互不相关的自动化仪器串联起来,构成流水线作业的组合,形成大规模的全检测过程的自动化.上世纪80年代末,日本Dr.Sasaki建立了世界上第一个组合式自动化实验室2022/12/3111全实实验验室室自自动动化化体体现现以以下下几几个个方方面面::1.提升升快快速速回回报报结结果果的的能能力力2.将检检验验报报告告的的误误差差减减少少到到最最小小::来来源源于于样样本本的的50%,来来源源于于分分析析的的不不到到30%。3.全面面提提升升临临床床检检验验的的管管理理2022/12/3112生化分析仪在在国内的使用用1.1980-1984:半自动及小小型全自动为为主,以美国国仪器为主,,国内开始研研制试剂2.1984-1990:型号多样,,日本仪器增增多,与自动动化仪器配套套的试剂盒投投入生产3.1990-今:高速高质质量的仪器,,一些方法学学淘汰,从大大医院开始逐逐步建立Lis系统,实现数数据共享,逐逐步实现全实实验室自动化化2022/12/3113未来实验室组组织及检验手手段将向两极极化发展:★一方面是实验验室全自动化化或全程自动动化,自动化化仪器将生化化、免疫、血血液、尿液及及药物检测等等合为一体。。★另一方方面是是实验验室仪仪器的的小型型化,,快速速、即即时、、简易易的检检验手手段,,用于于现场场检验验、床床边检检验、、医师师诊所所和家家庭。。2022/12/3114一、生生化分分析仪仪的现现状二、生生化分分析仪仪的测测定方方法三、校校准与与质控控四、测测定项项目间间的顺顺序安安排2022/12/3115二、、生生化化分分析析仪仪的的测测定定方方法法终点点法法一点点终终点点法法二点点终终点点法法免疫疫比比浊浊法法双波波长长法法2022/12/3116一点点终终点点法法的的设设置置::以R和S混合合之之前前的的空空气气空空白白、、水水空空白白或或试试剂剂空空白白的的吸吸光光度度值值为为测测定定计计算算基基点点,,以以反反应应达达到到平平衡衡的的吸吸光光度度读读数数减减去去空空白白读读数数,,校校准准曲曲线线通通过过零零点点且且成成直直线线,,对对于于反反应应速速度度快快的的多多用用::如如TP、ALB等二、、测测定定方方法法2022/12/3117二、、测测定定方方法法一点点终终点点法法反反应应曲曲线线AlT(时时间间))AS+R(吸光度))2022/12/3118二点终点点法的设设置:常常用单试剂分分析:当当测定波波长与干干扰物的的吸收光光谱有重重叠时(如脂血、、溶血、、黄疸),消除样样本空白白的干扰扰。如GLU500nm,Hb500nm(整个过程程OD不变),通过双波波长可消消除其干干扰。二、测定定方法2022/12/3119二点终点法的的设置:常用用双试剂法:除除可消除样本本空白的干扰扰外,还可消消除内源性物物质的干扰。。二、测定方法法2022/12/3120AmTAR2AlS+R1(吸光度)(时间)两点终点Ax=样本空白A2-kAl(液量校正正系数)k=S+VlS+Vm二、测定方方法2022/12/3121免疫比浊法法通过物质对对光的散射射来测定物物质含量的的方法。散射比浊::特定蛋白白分析仪透射比浊::自动生化化分析仪通常作两点点终点法分分析,多采采用多点校校准。应用:用Ab测定Ag(主要为微微量蛋白::IG、C、APOA/B、ASO、RF、CRP等),要求求Ab过量,此时时Ag-Ab复合物的生生成量随Ag的增加而递递增,光散散射强度与与抗原量成成正比。二、测定方方法2022/12/3122双波波长长法法消除除样样品品中中对对测测定定有有干干扰扰的的物物质质的的影影响响;;1.脂血血::吸吸收收光光谱谱300~600nm呈下下降降趋趋势势2.Hb:350nm、400nm、540nm、580nm吸收收峰峰3.胆红红素素::300~500nm有吸吸收收峰峰可见见它它们们的的吸吸收收峰峰都都较较宽宽,,且且同同测测定定波波长长有有重重叠叠现现象象。。二、、测测定定方方法法2022/12/3123辅助波波长的的选择择:根据测测定波波长选选择辅辅助波波长,,要求求干扰扰物质质在测测定波波长同同辅助助波长长有相相同的的吸光光度。。如钼酸酸铵法法测P3+用340nm,而Hb在340及380nm均有较较高吸吸收峰峰,选选380nm作为辅辅助波波长。。二、测测定方方法2022/12/3124连续监监测法法属于动动态监监测法法,或或叫速速率法法,适适用酶酶活性性和代代谢产产物检检测,,测定定产物物生成成或底底物消消耗速速度,,多有有酶参参与,,此法法测酶酶的活活力而而不是是酶的的浓度度(质质量))。在零级反反应期单单位时间间内的吸吸光度变变化(反应速率率△A/min)才与酶活活力呈正正比。二、测定定方法2022/12/3125测定时间间的选择择:监测时间间应根据据所用仪仪器不影影响检测测速度和和结果的的准确性性选在时时间反应应进程曲曲线的线线性期。。通常::延迟时间间:30-60秒监测时间间:>120秒二、测定定方法2022/12/3126酶活力计计算有两两种方法法1、绝对法法:酶活活力(U/L)=△△A×(反应液体体积/样品体积积)×(1000/消光系数数)2、相对法法:(U/L或mmol/L)=[△△A(测定)/△A(标准)]×标准物的的活力或或浓度二、测定定方法2022/12/31271.连续监测法法即零级反应应速率法,亦称斜率法法在较长反应应时间区段段内(90-180秒),每隔一定定时间(5~30秒)读取一次吸吸光度值,,至少读取取4点,得到3个以上△A,最后算出出反应速率率△A/min。二、测定方方法2022/12/31282.两点点速速率率法法主要要用用于于其其反反应应过过程程不不成成线线性性,,这这样样只只注注意意其其反反应应的的起起始始点点和和终终止止点点,,而而忽忽视视其其中中间间过过程程的的线线性性变变化化。。如::测测定定苦苦味味酸酸法法测测Cr,反反应应过过程程中中VitC、丙丙酮酮酸酸、、蛋蛋白白质质等等均均可可与与苦苦味味酸酸生生成成红红色色化化合合物物而而干干扰扰反反应应,,通通常常选选择择1min内的的两两点点进进行行测测定定。。二、、测测定定方方法法2022/12/3129AlTAS+R1R2A2(吸光度)(时间)速率法A/min=[(A2-A1)-(空白)]/(t2-t1)二、测定方法法A2TAS+R1A1R2(吸光度)(时间)两点速率Ax=A2-A1tt2022/12/3131速率B法1.一个通通道内内一次次进行行两项项反应应相关关的速速率法法测定定2.用于干干扰或或/及及样品品空白白自动动补偿偿:在在第一一反应应(干扰反反应)一直维维持线线性的的前提提下,,可以以从第第二反反应(主反应应)速率中中扣除除第一一反应应速率率的延延续影影响。。如用于于消除除胆红红素转转化为为胆绿绿素吸吸光度度下降降、对对肌酐酐苦味味酸法法测定定的负负干扰扰等二、测测定方方法2022/12/3132双项同同测法法:指在不不同时时间向向同一一个比比色杯杯加入入几种种试剂剂,(一个通通道内内一次次进行行两项项反应应相关关的终终点法法)。比如同同测游游离脂脂肪酸酸和甘甘油三三酯。。二、测测定方方法3.空白校校正::a.Ax=某点吸吸光度度-比色杯杯水空空白b.Ax=(终点测测定吸吸光度度-终点空空白吸吸光度度)一(始点测测定吸吸光度度-始点空空白吸吸光度度)c.终点法法(带试剂剂空白白)=终点吸吸光度度-R1点吸光光度(试剂空空白)d.终点法法(不带试试剂空空白)=终点吸吸光度度-比色杯杯水空空白e.两点法法(自身空空白)=(加R2后测定定点读读数-R1点读数数)-(加R2前测定定点读读数-R1点读数数)2022/12/3133二、测定方方法2022/12/3134一、生化分分析仪的现现状二、生化分分析仪的测测定方法三、校准与与质控四、测定项项目间的顺顺序安排2022/12/3135三、校准与与质控校准:1.包括设备本本身的校准准(如波长长、温度、、加样量、、空白吸光光度等)2.测定项目的的校准:是是常规的工工作内容项目的校准准:多数项项目的测定定,其浓度同吸吸光度变化化基本上成成线性关系系,选择低、中中、高三个个校正点可可获得满意意的准确度度。如果只只设置一个个校正点,尽量选择一一个中值校校正点。校准2022/12/3137校准品的的问题::测定系统统应包括括测定原原理、试试剂、仪仪器、校校准品四四要素1.校准品与与方法、、试剂、、仪器是是相关联联的,作作用是减减少系统统误差,,用人血血清基质质,最好好采用配配套使用用,或进进行区域域性的统统一,有有调查显显示使用用相同校校准液后后其不同同类型仪仪器测定定结果更更接近靶靶值2.选择适合合的校准准品,包包括数目目、类型型和浓度度校准3.有可能校校准品应应溯源到到参考方方法或参参考物质质4.校准频度度:通常常至少6个月进行行一次5.当更换试试剂或不不同的批批号时;;质控反反映出异异常的趋趋势或偏偏移;仪仪器或者者检验系系统进行行一次大大的预防防性维护护或者更更换了重重要部件件6.必须有校校准计划划:有记记录和分分析7.不同厂家家生产的的定值质质控血清清靶值之之间有的的相差较较大,提提示不能能用定值值质控血血清代替替校准品品作校准准用2022/12/3139线性校准准方法K因数法两点线性性多点线性性校准2022/12/3140K因数法主要用于酶酶活性的测测定a)理论K值b)实测K值c)厂家给的K值d)校准K值校准2022/12/3141校准K因数法(一点法)t2C=K*(A2-A1)/(t2-t1)A2t1A1(S1)2022/12/3142校准C2CnAxCxAsS1ABSC1As多点线性(3~6个校准品经经线性一次次回归制成成工作曲线线)2022/12/3143校准准非线线性性校校准准方方法法用于于免免疫疫比比浊浊等等测测定定常常用用Logit-logxpExponrenalSplineLinearGraph2022/12/3144校准准Logit-logxp(对数数方方法法))C1C2CxC3CnBA2A3AnAx2022/12/3145校准Exp(指数涵数数)C1BC2A2A3C3CxCnAxAn2022/12/3146校准Spline(样条涵数数)C1C2CxCN-1CNBC3A2A3AxAN-1AN质控室内质控控:对仪仪器的重重复性进进行监控控,采用用定值或或非定值值,做标标本前或或中间做做,绘图图,对失失控进行行分析记记录,查查找原因因。可直接传传入LIS系统统,还可可通过网网络进行行远程质质控及数数据图形形的上传传。2022/12/3148室间质质评采用PT方案同一质质评项项目连连续三三次中中有两两次PT<80%,则该该项目目为不不满意意现场质质评2022/12/3149一、生生化分分析仪仪的现现状二、生生化分分析仪仪的测测定方方法三、校校准与与质控控四、测测定项项目间间的顺顺序安安排四、测测定项项目间间的顺顺序安安排生化分分析仪仪多采采用一一根针针吸取取试剂剂,在吸取取不同同检测测项目目的试试剂之之间仅仅有一一个短短暂的的水冲冲洗的的过程程,若此过过程无无法达达到彻彻底冲冲洗的的目的的,则可能能会造造成前前后检检测项项目之之间的的交叉叉污染染。2022/12/3151四、测测定项项目间间的顺顺序安安排ALT(IFCC),AST(IFCC)试剂剂中含含有高高活力力LDH成分,,有可可能会会对LDH的测定定带来来干扰扰。ALP(IFCC),CK(NAC),CK-MB(NAC),CO2(PEPC),AMY(EPS)等试试剂中中含Mg2+有,可可能会会对其其后Mg的测定定带来来干扰扰。2022/12/3152CHE(BUTYRYLTHIOCHOLINE),CHO(CHODPAP),GLU(GODPAP),UA(URICASE)

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