HPLC分析方法中系统适用性试验概念解析及评价参数

HPLC分析方法中系统适用性试验概念解析及评价参数摘要：系统适用性试验是分析实验测定开始前，对分析系统（包括方法、操作和仪器）是否满足测定要求进行的验证操作，如果符合要求，则可继续进行测定且其结果可靠，如果不符合要求，则需对系统进行调整或改进以满足要求，保证后续实验结果可靠。本文论述将从多维角度讲述HPLC分析方法中系统适用性试验概念解析，以及试验评价参数，及如何确定系统适用性实验内容，如何选择计算方法等研究部分。关键词：系统适用性、评价参数、计算方法前言：《中国药典》2015年版四部0512中关于系统适用性试验的内容为：“色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、拖尾因子和重复性等四个参数。按各品种正文项下要求对色谱系统进行适用性试验，即用规定的对照品溶液或系统适用性试验溶液在规定的色谱系统进行试验，必要时，可对色谱系统进行适当调整，以符合要求。”一、系统适用性试验概念解析系统适用性试验定义，即为用规定的对照溶液或测试溶液，对仪器进行试验和调整，以确认色谱系统能满足当前检测的要求。主要适用于色谱系统如气相色谱（GC）、高效液相色谱（HPLC）。整个验证试验是一个风险管理的过程，是对色谱系统的风险评估，对色谱系统是否符合检测要求进行的全面评估，不只是分离度的要求。其评价的是检测中仪器、电信号、分析操作及样品等方面的综合特性。1.系统适用性试验评价参数《中国药典》2015年版四部0512中关于系统适用性试验的内容为：色谱系统的适用性试验通常包括理论板数、分离度、拖尾因子和重复性等四个参数。2.1理论板数N以被分析物主峰或规定的色谱峰计算柱效，以确定色谱峰的尖锐程度，尤其在痕量组分测定中尤为重要。理论板数高，峰高窄，则理论板数低，峰矮宽；低理论板数表明色谱条件与待测物的适用性较差，存在其他风险，如定量误差大，分离度较差等。但随着技术发展，理论板数都较大，新开发方法较少制定该要求。N=5.54*（t/W）2其中（d=10uN=5万、d=10uN=5万、d——柱填料的颗粒直径，t——保ppp R留时间，W/——半峰宽）2.2分离度R分离度是评价相邻峰分离程度，或内标峰与主峰的分离程度，便于定量分析时确定测定结果的准确性。分离度不足可能会导致定量误差大，另外一般杂质间的分离度可以降低要求，而主成分与杂质间的分离度要求需要更加严格。R=2（t2-t）/（W+W）S R R1 1 2其中（tR2——相邻峰中后一峰的保留时间，tR1——相邻两峰中前一峰的保留时间，W及W为此相邻两峰的峰宽。）122.3拖尾因子T拖尾因子T是评价色谱柱的对称性，便于保证峰积分时的测量精度，尤其采用峰高法计算含量时。较大的拖尾因子可能会积分误差大，一般来说含量测定项需评估该项，拖尾因子在日常监测过程中发生变化的可能性较小，其可接受标准在方法开发期间应当被评估，系统适用性试验一般较少制定该要求。

T=W/2d其中（w005h——峰高处的峰宽，d1——峰极大至前言之间的距离，峰高定量时，T应在0.95-1.05之间。）2.4重复性重复性是指连续进样重复性，不同于方法验证，考察重复性的目的主要是确认进样器的状态可接受，影响重复性的其他因素如溶剂效应、拖尾、波长等风险应当在方法开发期间评估。1.如何确定系统适用性试验内容？系统适用性试验是结合方法开发与验证的相关数据，找出方法中与色谱系统相关的高风险因素，制定相应的考察项以确认在今后的检测工作中色谱系统能满足要求。系统适用性试验溶液：取****对照品适量，加稀释剂制成每1ml约含**mg的溶液，置水浴中加热4小时，取出，放冷，作为系统适用性溶液。判断标准：主峰与相邻降解杂质峰的分离度应不小于1.5。1.系统适用性试验计算方法含量测定、有关物质、异构体、基因毒杂质、其他杂质等不同测定主体适用于不同的计算方法，各种计算方法的对比见下表1：计算方法适用情况与要求

计算方法适用情况与要求外标杂质与主成分响应或者性质相差较大；杂质对照品稳定，易通用，需用到对照品外标杂质与主成分响应或者性质相差较大；杂质对照品稳定，易通用，需用到对照品获得内标法供试品溶液制备过程较复杂，如需衍生或者萃取等；杂质对照品稳定，易获得通用，需用到对照品自身对照法主成分外标法各杂质校正因子在0.2-5之间无需使用对照品，多个样品配制繁琐各杂质校正因子在0.2-5之间需用到对照品，一份对照品溶液可测定多份样品面积归一化法杂质含量较高，供试品浓度在线性范围内，各杂质校正因子在0.2-5之间操作简便，误差大限度法无需提供定量结果的杂质控制需用到对照品，无法提供定量的结果表1：系统适用性试验计算方法

检测项外标法内标法自身对照法主成分外标法面积归一化法含量测定+-+iii有关物质+-i+++异构体ii+++基因毒杂质+±i+i其他杂质+±iii注：+能用，一不用，土根据情况判断表2检测项对应的计算方法参考文献国家药典委员会.《中国药典》2015年版四部[S]2.国家药典委员会.《中国药典》2005年版二部[S]3.谢沐风.如何建立高