基因工程简介5

基因工程简介第三章第四节一基因工程的基本内容主要内容1）基因工程的概念2）基因操作的工具3）基因操作的基本步骤（一）基因工程的概念基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果基因拼接技术或DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的基因产物剪切→拼接→导入→表达实质基因重组基因工程培育抗虫棉的简要过程：（一）基因工程的概念普通棉花(无抗虫特性)苏云金芽孢杆菌提取抗虫基因与运载体DNA拼接导入棉花细胞(含抗虫基因)棉花植株(有抗虫特性)上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？（二）基因操作的工具关键步骤一的工具：关键步骤二的工具：关键步骤三的工具：基因的剪刀——限制性内切酶基因的针线——DNA连接酶基因的运载工具——运载体基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶）（二）基因操作的工具大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。限制酶基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶）（二）基因操作的工具限制酶什么叫黏性末端？（二）基因操作的工具被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。基因的针线——DNA连接酶（二）基因操作的工具

DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。外源基因(如抗虫基因)怎样才能导入受体细胞(如棉花细胞)？（二）基因操作的工具导入过程需要运输工具——运载体。运载体的作用有哪些？作用一：作为运载工具，将外源基因(抗虫基因)转移到受体细胞(棉花细胞)中去。作用二：利用运载体在受体细胞(棉花细胞)内，对外源基因(抗虫基因)进行大量复制。

作为运载体必须具备哪些条件？（二）基因操作的工具1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。2）具多个限制酶切点，以便与外源基因连接。3）具有某些标记基因，便于进行筛选。如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等。基因的运载工具——运载体：（二）基因操作的工具常用的运载体主要有两类：1）细菌细胞质的质粒2）噬菌体或某些动植物病毒大肠杆菌的质粒：（二）基因操作的工具

最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如四环素的标记基因。质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性作用。四个基本步骤：（三）基因操作的基本步骤1）提取目的基因2）目的基因与运载体结合3）将目的基因导入受体细胞4）目的基因的检测和表达目的基因的提取方法（三）基因操作的基本步骤直接分离基因人工合成基因反转录法根据已知的氨基酸序列合成DNA：鸟枪法步骤一：目的基因的提取1）鸟枪法：供体细胞中的DNA许多DNA片段运载体受体细胞产生特定性状目的基因限制酶载入导入外源DNA扩增分离步骤一：目的基因的提取2）反转录法：目的基因的mRNA单链DNA(cDNA)双链DNA(即目的基因)反转录合成步骤一：目的基因的提取3）根据已知的氨基酸序列合成DNA法

：蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列结构基因的核苷酸序列推测推测目的基因化学合成哪些新技术能大大简化基因工程的操作技术？1）DNA序列自动测序仪：2）PCR技术：对提取出来的基因进行核苷酸序列分析。使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增。（三）基因操作的基本步骤步骤二：目的基因与运载体结合（三）基因操作的基本步骤步骤三：目的基因导入受体细胞受体细胞：细菌CaCl2细胞壁的通透性增大重组质粒进入受体细胞目的基因随受体细胞的繁殖而复制（三）基因操作的基本步骤步骤四：目的基因的检测和表达四环素抗性基因氨苄青霉素抗性基因不能，受体细胞必须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达。（三）基因操作的基本步骤受体细胞摄入DNA分子后就说明目的基因完成了表达吗？若不能表达，要对抗虫基因再进行修饰。1）以下说法正确的是（）

A、所有的限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列

B、质粒是基因工程中唯一的运载体

C、运载体必须具备的条件之一是：具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接

D、基因控制的性状都能在后代表现出来C练习2）不属于质粒被选为基因运载体的理由是

A、能复制（）

B、有多个限制酶切点

C、具有标记基因

D、它是环状DNAD练习3）有关基因工程的叙述中，错误的是（）

A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来

B、限制性内切酶用于目的基因的获得

C、目的基因须由运载体导入受体细胞

D、人工合成目的基因不用限制性内切酶A练习4）有关基因工程的叙述正确的是（）

A、限制酶只在获得目的基因时才用

B、重组质粒的形成在细胞内完成

C、质粒都可作为运载体

D、蛋白质的结构可为合成目的基因提供资料D练习5）基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的步骤是