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酶除去细胞壁的能力的用应用生工081班:陈登成酶除去细胞壁
根据不同细胞的结构和细胞壁的组分不同,除去细胞壁所使用的酶也各异。除去细菌细胞壁除去革兰氏阳性菌的细胞壁:采用从蛋清中分离得到的溶菌酶。该酶专一地作用于细菌细胞壁的肽多糖分子中N-乙酰胞壁酸与N-乙酰氨基葡萄糖之间的a-1,4键。除去革兰氏阴性菌的细胞壁:需由溶菌酶和EDTA共同作用才能达到较好的除去细胞壁的效果。这是由于EDTA可作用于脂多糖的缘故。除去酵母细胞壁
酵母的细胞壁分为两层,外层由磷酸甘露糖和蛋白质组成,内层由β—葡聚糖构成细胞壁的骨架。除去酵母细胞壁:主要采用β-1,3-葡聚糖酶。该酶作用于细胞壁内层的β-葡聚糖分子中β-1,3-糖苷键,使作为细胞壁骨架的β-葡聚糖水解,而使细胞壁破坏。蜗牛的消化液中含有较多的β-1,3-葡聚糖酶,故常用于酵母的破壁。
若β-葡聚糖酶与磷酸甘露糖酶及蛋白酶联合作用,则可使细胞壁的内外两层同时被破坏,而显著提高破壁效果。除去霉菌细胞壁
霉菌的细胞壁结构比较复杂。不同种属的霉菌。其细胞壁结构和组分有较大差别。因此,若要除去霉菌的细胞壁,需要弄清属于什么霉菌,再选用适宜的几种酶共同作用,才能达到较好的破壁效果。
毛霉,根霉等藻菌纲霉菌的细胞壁主要由几丁质(N-乙酰-D-氨基葡萄糖以β-1,4-键结合而成)和壳多糖(氨基葡萄糖以β-1,4-键结合而成)等多种物质组成。破壁时主要采用放线菌或细菌产生的壳多糖酶、几丁质酶及蛋白酶等多种酶的混合物。这些混合多酶制剂一般称之为细胞壁溶解酶(Lytic
Enzym).米曲霉、黑曲霉和青霉等半知菌纲霉菌的细胞壁的主要组分是几丁质和6-葡聚糖等。破壁时主要使用β–1,3-葡聚糖酶和几丁质酶的混合物。植物细胞壁的破除
植物细胞壁主要由纤维素、半纤维素、木质素和果胶等组成。
破除植物细胞壁主要采用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶组成的混合酶。这几种酶大多数是由霉菌发酵产生。利用酶除去细胞壁,除了要根据细胞的结构特点选用适宜的酶之外,还必须控制好酶作用条件和时间。此外,若用酶除去细胞壁以制备原生质体
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