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文档简介

（九）产蛋白酶和淀粉酶芽孢杆

菌的分离和活力检测（开放）

(实验22)

目的要求

1、培养学生的创新思维和独立分析问题、解决问题的综合能力.

2、对所学习过的实验方法进行综合技能训练。3、通过实验掌握从自然界中分离产酶微生物的方法。实验原理微生物体积小，生产速度快，易于大规模生产，从微生物中制取各种酶已经成为发酵工业当中的一个新兴的领域。自然界的土壤中有可能分布着能够产生蛋白酶和淀粉酶的芽孢杆菌。通过土样稀释、加热土壤悬浮液杀死非芽孢杆菌、平板分离就有可能分离到芽孢杆菌的单菌落。有产蛋白酶能力的芽孢杆菌能水解酪素生成酪氨酸，在含有酪素的平板上菌落的周围出现透明的水解圈。有产淀粉酶能力的芽孢杆菌则能将淀粉水解生成小分子的糊精和葡萄糖，在淀粉平板上菌落周围出现水解圈，但是用肉眼不易分离，滴加碘液后没有水解的淀粉程蓝色，而水解圈无色。蛋白酶活力单位的测定方法：取5毫升用pH8硼酸缓冲液配制的06.%酪蛋白溶液于试管中，置于40度水浴中预热2min后加入1：20以pH8硼酸缓冲液稀释的酶液（即取1毫升蛋白酶发酵液，加入19毫升的缓冲液）1ml，40度水浴精确保温10min。时间到后，各管立即加入0.4mol/L三氯醋酸5ml，以终止反应。继续水浴中保温20min，使残余蛋白质沉淀后离心分离或过滤。取滤液用751分光光度计在275nm处测定其吸收度。空白实验2测定方法同上，唯在加酪蛋白之前先加0.4mol/L三氯醋酸5ml，使酶失活，在加酪蛋白。

计算：在40度下每1min水解酪蛋白产生1Ug酪氨酸，定义为一个蛋白酶活力单位。具体的操作步骤自己查找资料拟定。

蛋白酶和淀粉酶活力单位的测定淀粉酶活力单位的测定：---Wohlgemuth

Hagihara

改良法---具体方法自己拟定。独立设计实验方案1实验材料与用具－利用本实验室已经有的设备条件和材料试剂开展本次实验.2实验方法与步骤的设计－自行拟定

要求学生用所学到的知识和技能，自己从不同来源获取相关资料，设计出一个综合性的、探索性的实验.实验报告及思考题一.实验报告以论文形式提交二.思考题1、你所设计的实验流程是否合理？实验中有无疏漏和失误?2、实验中的

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