高效液相色谱仪的维护和保养

4/4高效液相色谱仪的维护与保养液相色谱仪应该进行适当的维护保养，维护保养按照维护频率分为日常维护、每周维护及每月维护。每周维护、每月维护活动均应记录在仪器维护记录本上。1日常维护1.1溶剂配制所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水。溶剂必须经过滤膜过滤，过滤水和有机相时应该选用不同的滤膜。纤维素膜主要用于水溶液，尼龙滤膜和PTFE膜均是通用型滤膜。常用0.45μm滤膜，如果使用亚二微米颗粒色谱柱，建议使用0.22μm滤膜。溶剂使用前必须脱气，常用超声脱气20-30min。1.2开机准备新鲜的纯水和有机溶剂以及方法所需的溶液。按顺序打开仪器各组件电源→电脑电源→打开工作站。确认工作站和仪器连接正常，通过工作站或手动打开排气阀，将需要用到的通道分别100%以流速3ml/min~5ml/min排气。（所需流量参考日常工作的排气流量）（多个泵同时排气简单对泵造成损耗，不建议！）确认各通道排气完成后，关闭排气阀。用20倍以上的柱体积的有机溶剂冲洗系统。（注意：有机溶剂冲洗前需确认之前关机时已经移除系统中的缓冲盐）调用运行方法，使用5~10倍柱体积的方法所需流动相比例平衡系统。平衡系统前用所需方法的流动相比例在排气阀打开的情况下以3ml/min~5ml/min运行一段时间，让泵中的流动相比例快速达到所需的流动相比例。更换洗针溶剂、更换密封垫清洗溶剂。1.3试验中注意1.3.1流动相在选择A、B、C、D泵放置流动相时，将盐溶液连接在一个底部梯度阀端口上，有机溶剂连接在一个上部梯度阀端口上。最好使有机溶剂通道位于盐溶液通道的正上方。最好不要将纯水溶液作为流动相的一组，如果使用了水相作为流动相的一组，应注意定期更换、过滤溶剂，不应超过2天，避免阳光直接照射。如果试验允许，可向水相中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠。1.3.2色谱柱使用流动相前千万注意，流动相与色谱柱内的保存溶剂和系统内存留溶剂的混溶性，避免形成乳化小液滴，从而毁坏柱子。可以使用异丙醇作为过渡溶剂。使用保护柱，延长色谱柱的使用寿命。1.3.2洗针液和清洗密封垫溶液每天观察洗针液和清洗密封垫的溶液，及时更新。洗针液的选择依据样品的极性，样品可在洗针液中洗针液中溶解，即达到效果，一般情况下，可装50%甲醇溶液或者50%乙腈溶液。清洗密封垫的溶液一般为10%异丙醇。如果清洗液和洗针液足够，则使用5个工作日后需更换新的溶液。1.4关机试验结束后，要把柱子和系统流路冲洗干净，用有机溶剂保存，然后关机。具体步骤如下：关闭检测器的灯。确认所有的液相色谱管路畅通。例如：Agilent1260LC四元泵系统的A\B\C\D四路管路+sealwash管路+系统中的主路旁路。WatersAlliance系统（包括2690，2695，e2695）的A\B\C\D四路管路+SealWashIn（绿色标签）+NeedleWash（纯绿色管路）。将水相管路中的缓冲盐移除。（将缓冲盐的流路更换成纯水，系统中用不大于80%比例的水相冲洗移除缓冲盐。）将水相溶剂更换成有机相（甲醇或乙腈），并将系统中所有流路置换成有机相。关闭仪器电源和电脑系统。2每周维护2.1定期灌注：仪器一周（5天）不使用时，需将系统用有机溶剂（一般为甲醇）重新填满。2.2检查清洗阀滤芯和色谱柱滤芯。清洗阀滤芯被堵塞的表现是有一层黄色或黑色表面、沉淀物，或者打开清洗阀(purge阀)用泵以5mL/min的流量输送水时它的压力大于10bar即150psi。2.3检查溶剂过滤器是否堵塞或变色。若有，采用4.3.2的方法清洗。2.4检查系统是否有漏液情况、缓冲盐结晶情况。若有，采用适当的的方法处理。2.5使用水冲洗所有多通道梯度阀（MCGV）通道，除掉阀端口中所有可能的盐沉淀物。3每月维护3.1清洗溶剂瓶，清洗完毕放入烘箱中（设置温度80℃）灭菌，2小时候取出放置3.2清洗溶剂过滤器：用纯水冲洗残留之溶剂后，玻璃过滤器用浓硝酸（35％）的烧杯里浸超过一小时，再用超纯水彻底冲洗过滤器，玻璃过滤器不能用超声波清洗；不锈钢溶剂过滤头可用甲醇超声波清洗15分钟，再用超纯水彻底冲洗。3.3清洗管路：移除色谱柱，接两通。分别使用60℃-70℃的纯化水（流速：1.0ml/min）、异丙醇（流速：0.5ml/min）、甲醇（流速：1.0ml/min）冲洗4个管路，单个管路冲洗不少于30分钟。3.4检测器：检查氘灯使用时长及氘灯能量，是否满足准确检测的需求，依据实际情况提前购买备用氘灯。4.泵的常见问题及解决方案项目现象原因解决方案1当阀关闭后，有溶剂从废液管出口滴出泵头漏液更换冲洗阀滤芯或冲洗阀2压力脉动不稳定主动入口阀滤芯不干净更换主动入口阀后，进行渗漏测试以验证3梯度性能问题，间歇性的压力波动溶剂过滤头堵塞清洗或更换溶剂入口过滤芯4滤芯的压降大于10bar即150psi（5ml/minH2O冲洗阀打开）说明堵塞了滤芯不干净更换冲洗阀滤芯或冲洗阀5泵头下侧漏液保留时